張梅娜 張麗娟 李英惠 段志敏 陳 麗 董 靜 張 娜 崔 娜 宋 潔 趙敏英

IMP3基因在葡萄胎中的表達及其意義

張梅娜①張麗娟②*李英惠①段志敏①陳 麗①董 靜①張 娜①崔 娜①宋 潔①趙敏英③

目的：探討IMP3基因在葡萄胎中的表達及其意義。方法：應用免疫組織化學鏈霉親和素-過氧化物酶(SP)法檢測IMP3基因在不同轉歸患者初次清宮葡萄胎組織中的表達。結果：IMP3基因在人絨毛膜促性腺激素(HCG)＞2×105mIU/ml患者和HCG＜2×105mIU/ml患者中均有表達；IMP3基因在HCG＞2×105mIU/ml葡萄胎患者中陽性表達率為90%，在HCG＜2×105mIU/ ml患者中的表達率為78%，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(x2=2.245，P＜0.05)。在HCG＞2×105mIU/ml的葡萄胎患者中，后來發(fā)展為侵蝕性葡萄胎患者的IMP3基因表達陽性率高，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(x2=10.719，P＜0.05)；HCG＜2×105mIU/ml葡萄胎患者中，后來發(fā)展為侵蝕性葡萄胎患者的IMP3基因表達陽性率高，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(x2=14.438，P＜0.05)。結論：IMP3基因作為一種特異性很高的胞漿標志物，表達于葡萄胎合體滋養(yǎng)細胞，在HCG＞2×105mIU/ml的葡萄胎組織中表達率高。IMP3基因與葡萄胎的轉歸密切相關，有望成為判斷葡萄胎的發(fā)生、發(fā)展及轉歸的標志物。

IMP3基因；滋養(yǎng)細胞疾病；葡萄胎；侵蝕性葡萄胎；免疫組織化學

滋養(yǎng)細胞疾病(gestational trophoblastic diseases，GTD)是一組來源于胎盤絨毛滋養(yǎng)細胞的疾病，根據(jù)組織學將其分為葡萄胎(hydatidiform mole，HM)、侵蝕性葡萄胎(invasive hydatidiform mole，IHM)、絨毛膜癌(choriocarcinoma，CCA)及胎盤部位滋養(yǎng)細胞腫瘤。由于目前診斷手段及滋養(yǎng)細胞疾病標志物特異性的限制，只能在檢測到血β亞基人絨毛膜促性腺激素(β-human chorionic gonadotropin，β-HCG)未能如期下降或影像學發(fā)現(xiàn)異?；芈晻r，方能診斷侵蝕性葡萄胎并進行治療，尚未能早期判斷其預后及進行相應治療，因此新的標志物和治療靶點已經(jīng)成為基礎研究者和臨床醫(yī)師關注的焦點。本研究通過檢測IMP3基因在葡萄胎不同轉歸患者初次清宮葡萄胎組織中的表達差異，進一步分析IMP3基因在葡萄胎向侵蝕性葡萄胎演變過程中的作用機制，以探討該基因在葡萄胎發(fā)生和發(fā)展過程中的作用，以及與轉歸之間的關系，為早期診斷侵蝕性葡萄胎以及治療監(jiān)測提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取1990年7月至2010年7月在河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院、首都醫(yī)科大學存檔處葡萄胎患者首次清宮石蠟標本，根據(jù)本化驗室HCG檢測的最高稀釋度數(shù)值為2×105mIU/ml，將其分為HCG＞2×105mIU/ml組和HCG＜2×105mIU/ml組，每組100例。HCG＞2×105mIU/ml組年齡20～53歲，平均年齡(32.05±0.93)歲；HCG＜2×105mIU/ml組年齡19～54歲，平均年齡(33.66±1.01)歲；兩組患者年齡無顯著性，具有可比性。隨訪4個月，部分患者血β-HCG下降后又上升、或持續(xù)平臺期超過4周而確定為侵蝕性葡萄胎。

1.2 儀器及試劑

采用OLYMPUS-CX21型光學照相顯微鏡(日本OLYMPUS公司)；ZPJ-1型展片機(天津)；LEICARM2135石蠟切片機(德國)。兔抗人的IMP3多克隆抗體(英國Abcam公司)；免疫組織化學試劑盒(北京鼎國生物技術有限公司)；二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine，DAB)顯色盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)；氨丙基三乙氧硅烷(3-amino propyltri ethoxy silane，APES)防脫片試劑(北京中杉金橋生物技術有限公司)。

1.3 試驗方法

所有蠟塊標本以4 μm厚度切片制片，每張切片經(jīng)蘇木精-伊紅(hematoxylin eosin，HE)染色常規(guī)病理形態(tài)學觀察證實后采用鏈霉親和素-過氧化物酶(streptavidin-perosidase，SP)法進行染色。

1.4 結果判定

IMP3基因主要位于細胞漿，以細胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的染色定為陽性。參照許良中等[1]的免疫組織化學反應結果的評定標準，綜合考慮切片中陽性細胞數(shù)占所觀察同類細胞數(shù)的百分比，陽性細胞數(shù)分為4個等級，即0～4分：≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，≥51%為3分：根據(jù)顯色程度判定陽性程度分為4級：基本不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將每張切片的著色程度得分與著色程度百分率相乘，最后得分，0～1分為陰性(－)，2～3分為弱陽性(＋)，4～6分為中等陽性(＋＋)，6分以上為強陽性(＋＋＋)，最后用雙盲法進行資料統(tǒng)計。

1.5 統(tǒng)計學方法

應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理分析，各組內(nèi)進行x2檢驗，組間用秩和檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 IMP3基因在葡萄胎中的表達情況

免疫組織化學反應結果可見棕黃色或棕褐色顆粒位于葡萄胎細胞的細胞漿中，IMP3基因在葡萄胎中均有表達，但是以HCG＞2×105mIU/ml組的葡萄胎患者為主，其中IMP3基因表達強陽性的44例(占44%)，表達陽性的32例(占32%)，表達弱陽性的14例(占14%)，其表達陽性率為90%；HCG＜2×105mIU/ml組的葡萄胎患者中，IMP3基因表達強陽性的19例(占19%)，表達陽性的26例(占26%)，表達弱陽性的33例(占33%)，其表達陽性率為78%，兩組葡萄胎患者MP3基因表達陽性率比較，其差異有統(tǒng)計學意義(x2=2.245，P＜0.05)，見表1。

表1 IMP3基因在葡萄胎中的表達情況

2.2 HCG與葡萄胎轉歸之間的關系

HCG＞2×105mIU/ml組的100例葡萄胎患者中，有21例后來發(fā)展為侵蝕性葡萄胎，轉歸率為21%；HCG＜2×105mIU/ml組的100例葡萄胎患者中，有8例發(fā)展為侵蝕性葡萄胎，轉歸率為8%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(x2=5.106，P＜0.05)。研究結果表明，HCG越高的葡萄胎患者，將來發(fā)展為侵蝕性葡萄胎的可能性越大。

2.3 IMP3基因在葡萄胎中的表達與轉歸的關系

(1)IMP3基因在HCG＞2×105mIU/ml組葡萄胎中的表達與轉歸的關系。HCG＞2×105mIU/ml組的100例葡萄胎患者中，IMP3基因表達強陽性44例，其中有17例后來發(fā)展為侵蝕性葡萄胎，轉歸率為39%，IMP3基因表達陽性32例中，有4例后來發(fā)展為侵蝕性葡萄胎，轉歸率為13%，IMP3基因表達弱陽性的14例和表達陰性的10例中，未發(fā)展為侵蝕性葡萄胎的，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(x2=10.719，P＜0.05)。

(2)IMP3基因在HCG＜2×105mIU/ml組葡萄胎中的表達與轉歸的關系。HCG＜2×105mIU/ml組的100例葡萄胎患者中，IMP3基因表達強陽性的患者19例，其中有6例患者轉歸后發(fā)展為侵蝕性葡萄胎，轉歸率為32%，表達陽性的患者26例，其中有2例后發(fā)展為侵蝕性葡萄胎，轉歸率為8%，表達弱陽性的33例患者和表達陰性的22例患者中，后來沒有發(fā)展為侵蝕性葡萄胎的，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(x2=14.438，P＜0.05)。

3 討論

目前，臨床上評價葡萄胎的高危因素主要采用病理組織學和影像學的手段，隨著生物醫(yī)學和分子生物學的不斷進展，基因的檢測已經(jīng)成為葡萄胎早期診斷，篩查高危因素以及判斷預后的指標，從而為葡萄胎的診斷和靶向治療開辟了新的領域，提供了新的思路。

IMP3基因(Insulin-like growth factor -ⅡmRNA-binding protein 3)又稱為L523S或K同源區(qū)域控制癌組織中過度表達(KOC)，是一種新識別的RNA結合蛋白，是胰島素生長因子信使RNA結合蛋白之一。IMP3基因定位于染色體7p11.5，包含了580個氨基酸的殘基，被4350個核苷酸mRNA轉錄所編碼。通過使用cDNA文庫和大規(guī)模的DNA印跡技術發(fā)現(xiàn)，該基因在胰腺癌和肺癌中均有相應的表達，而且與最初胰腺癌克隆的KCO是同源基因[2-3]。研究發(fā)現(xiàn)，在胚胎早期形成的時期，IMP3基因在上皮組織，胎盤組織和肌肉組織中均有表達，但在成人組織中卻未發(fā)現(xiàn)表達。在胚胎的形成時期，IMP3基因在結合，轉錄和穩(wěn)定胚胎胰島素樣生長因子Ⅱ(insulin-like growth factorⅡ，IGF Ⅱ)過程中起著非常重要的作用。IMP3基因可以間接調(diào)控IGF Ⅱ基因的表達，而IGF Ⅱ通過激活和結合IGFⅠ受體，使酪氨酸激酶氧化磷酸化，氧化磷酸化的IGFⅠ受體再將傳導促有絲分裂的信號傳到細胞內(nèi)，參與腫瘤的形成過程[4-6]。因此，可以推測IMP3基因通過穩(wěn)定IGFⅡmRNA參與癌變，也可能結合和影響其他mRNA來影響潛在的惡性細胞。IMP3基因可以調(diào)節(jié)CD24，CD44，細胞粘附分子(ALCAM，SYNCAM，MCAM)和基質金屬蛋白酶Ⅰ的表達，而這些分子均與細胞的粘附和腫瘤的侵襲性有密切關系。此外，IMP3基因還可促進白血病細胞的增殖，表明是一種胚胎性細胞，可能在調(diào)控細胞的增殖方面起著非常重要的作用。

目前許多研究發(fā)現(xiàn)，IMP3基因與多種腫瘤組織的發(fā)生和發(fā)展有密切關系。李康華等[7]采用免疫組織化學的方法，檢測了IMP3基因在骨肉瘤組織以及骨軟骨瘤組織中的表達情況，結果發(fā)現(xiàn)，在骨肉瘤組織中IMP3基因的表達明顯增加，這提示了IMP3基因的表達活化可能與骨肉瘤的發(fā)生有關系，但是具體的作用機制尚需要進一步的研究。Jiang等[8]在腎細胞癌中也發(fā)現(xiàn)，IMP3基因表達增加與惡性生物學行為有密切關系，并報道了在TNMI期腎細胞癌中IMP3基因表達陽性的患者的5年生存率為44%，而表達陰性的患者的5年生存率卻高達98%。而在Ⅱ期和Ⅲ期腎細胞癌中陽性表達者5年生存率分別為41%和16%。Parker等[9]發(fā)現(xiàn)IGF-IR同患者病死率的增加有密切關系，IGF-IR和IMP3基因作為腎透明細胞癌患者的預后因子，在一定程度上有一定的可重疊性。研究發(fā)現(xiàn)胰腺組織中IMP3基因過度表達可導致腺泡細胞的增殖和化生，提示IMP3基因可能與惡性組織的侵襲性有關系。

在婦科惡性腫瘤方面，Zheng等[10]通過免疫組織化學的方法研究發(fā)現(xiàn)，IMP3基因在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌中表達微弱，而在Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中卻明顯表達，進而指出IMP3基因的表達與Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌有密切關系，并與子宮內(nèi)膜腫瘤病變中的侵襲性組織學形為有很大的關系，可能是具有侵襲性生物學行為的標記物。在不同的子宮內(nèi)膜癌的癌前病變中IMP3基因表達不同。Vikesaa等[11]發(fā)現(xiàn)，IMP3基因可能是轉化為Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌之前的早期事件，有可能成為診斷子宮內(nèi)膜癌有意義的指標。

越來越多的研究證實，IMP3基因與人類惡性生物學行為密切相關，可以在許多腫瘤組織中表達，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。IMP3基因表達的改變是葡萄胎惡變的早期事件。葡萄胎的惡性轉化是多因素的作用，以后的研究除致力于IMP3基因使滋養(yǎng)細胞侵襲性改變的機制外，應篩查一些相關性強的基因，以期對葡萄胎的惡變早期預測。本實驗研究結果顯示，IMP3基因蛋白在HCG＞2×105mIU/ml的葡萄胎患者和HCG＜2×105mIU/ml的葡萄胎患者中均有表達，但在HCG＞2×105mIU/ml的葡萄胎患者中，IMP3基因的陽性表達率高。表明IMP3基因作為一種特異性很高的胞漿標記物表達于葡萄胎中，而且有隨滋養(yǎng)層細胞增生程度的增加而增加的趨勢，差異有顯著意義，提示IMP3基因表達增加在葡萄胎的進展中起重要作用，可能會作為預測葡萄胎惡變的指標。

4 結語

目前，葡萄胎患者的隨訪主要靠動態(tài)觀測血β-HCG的變化及臨床表現(xiàn)，具有滯后性，尚無早期預測葡萄胎惡變的方法，如能在各項研究中篩檢一些相關性強的基因，獨立或結合應用于葡萄胎惡變的預測，IMP3基因的表達增強在葡萄胎的形成和惡變過程中起著重要的作用可能是葡萄胎惡變的相關因素，有可能成為預測葡萄胎惡變的早期指標[12]。

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[12]石一復.仍應重視妊娠滋養(yǎng)細胞疾病/腫瘤的研究[J].中華腫瘤防治雜志，2006，13(15)：1121.

The expression and significance of IMP3 gene in hydatidiform mole/

ZHANG Mei-na, ZHANG Li-juan, LI Ying-hui, et al//
China Medical Equipment,2017,14(9):81-84.

Objective: To investigate the expression and significance of IMP3 in hydatidiform mole. Methods: Streptavidin-peroxidase (SP) of immunohistochemistry was applied to detect expression of IMP3 gene in hydatidiform mole tissue of different outcome patients after the first cleaned of their uterus. Results: The IMP3 gene could expressed whether HCG was higher than 2X105mIU/mL (the positive expression rate was 90%) or lower than 2×105mIU/mL ( the positive expression rate was 78%) in patients, and the difference of the positive expression rate was statistically significant (x2=2.245, P＜0.05). In the patients with hydatidiform mole whose HCG was more than 2×105mIU/ mL, the positive expression rate of IMP3 gene was higher in a part of patients who developed into invasive hydatidiform mole, and the difference among different groups was statistically significant (x2=10.719, P＜0.05). In the patients with hydatidiform mole whose HCG was less than 2×105mIU/mL, the positive expression rate of IMP3 gene also was higher in a part of patients who developed into invasive hydatidiform mole, and the difference among different groups also was statistically significant (x2=14.438, P＜0.05). Conclusion: IMP3 gene which is a higher specificity biomarker in endochylema and it can be expressed in syncytiotrophoblast of hydatidiform mole. The expression rate of IMP3 gene is higher in the hydatidiform mole tissue which HCG was higher than 2×105mIU/mL. There is a closed relationship between IMP3 gene and the outcome of hydatidiform mole, and it may become a biomarker for determining the happen, development and outcome of hydatidiform mole.

IMP3 gene; Gestational trophoblastic diseases; Hydatidiform mole; Invasive hydatidiform mole; Immunohistochemistry

Department of Gynecology and Obstetrics, The First Central Hospital of Baoding, Baoding 071000, China.

1672-8270(2017)09-0081-04

R737.33

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2017.09.022

2017-02-28

①保定市第一中心醫(yī)院東院婦科 河北 保定 071000

②河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院婦科 河北 石家莊 050000

③石家莊市第一醫(yī)院生殖科 河北 石家莊 050000

*通訊作者：lijuan35@sina.com

張梅娜,女,(1980- ),碩士，主治醫(yī)師。保定市第一中心醫(yī)院東院婦科，從事婦科診治工作。