葛月，李銳

摘 要：目的：建立柴連口服液中柴胡總皂苷（柴胡皂苷a、柴胡皂苷d）的含量測(cè)定方法。方法：高效液相色譜法，采用Spuril C18（250×4.6mm，5？滋m）；甲醇-水（77：23）（用三乙胺調(diào)節(jié)pH至7.5）；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；流速：1.0mL·min-1。結(jié)果：柴胡皂苷a在4.128μg·ml-1～82.56μg·ml-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R=0.9994；。柴胡皂苷d在5.644μg·ml-1～112.88μg·ml-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R=0.9998；平均回收率為98.70%，RSD=0.77%。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確性、重復(fù)性好、回收率高，適用于柴連口服液的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：柴連口服液；柴胡總皂苷（柴胡皂苷a、柴胡皂苷d）；高效液相色譜法

柴連口服液由麻黃、柴胡、廣藿香、肉桂、連翹、桔梗六味中藥經(jīng)水蒸氣蒸餾，煎液濃縮等一系列工藝加工制成的中藥口服液。主要用于解表宣肺，化濕和中，適用于感冒風(fēng)寒、風(fēng)寒挾濕證者，證見(jiàn)惡寒、發(fā)熱、頭痛、鼻塞、咳嗽、咽干、惡心等。柴連口服液中除了揮發(fā)油成分，其抗炎的主要有效成分為皂苷類，柴胡中含有大量柴胡皂苷成分，主要是柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量高。依據(jù)2015年版中國(guó)藥典一部，建立了產(chǎn)品中柴胡總皂苷的含量測(cè)定方法，并對(duì)該方法進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)。

1 對(duì)照品、樣品及試藥

柴胡皂苷a對(duì)照品（中檢所，批號(hào)：110777-200507，含量：100%）；柴胡皂苷d對(duì)照品（中檢所，批號(hào)：110778-200506，含量：100%）；柴連口服液（市售樣品，規(guī)格：10ml/支）；甲醇、磷酸為色譜純，其它試劑為分析純。

2儀器、色譜條件與系統(tǒng)適用性

Waters高效液相色譜儀；Spuril C18（250×4.6mm，5？滋m）；甲醇-水（77：23）（用三乙胺調(diào)節(jié)pH至7.5）；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；流速：1.0mL·min-1。理論板數(shù)按柴胡皂苷a峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。

3 對(duì)照品溶液、供試品溶液的制備

3.1 對(duì)照品溶液的制備：取柴胡皂苷a對(duì)照品、柴胡皂苷d對(duì)照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1ml含柴胡皂苷a40μg、柴胡皂苷d 55μg的溶液，搖勻，即得。

3.2 供試品溶液的制備：精密量取本品2ml，置中性氧化鋁柱（100～200目，10g，內(nèi)徑2.0cm）上，用80%甲醇40ml洗脫，收集洗脫液置50ml量瓶中，加10%濃氨試液3滴，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

4 專屬性試驗(yàn)

按工藝制備不含柴胡的空白樣品，精密量取空白樣品溶液2ml，按供試品溶液處理方法，照上述色譜條件，將對(duì)照品溶液、空白樣品供試品溶液分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果在與柴胡皂苷a、柴胡皂苷d對(duì)照品相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰，表明處方中其他成分及輔料對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。本方法專屬性良好。

5 線性關(guān)系考察

分別精密稱取柴胡皂苷a對(duì)照品20.64mg、柴胡皂苷d對(duì)照品28.22mg，分別置50ml量瓶中，加80%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液各0.1、0.5、1.0、1.5、2，0ml，分別置10ml量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，得到系列濃度的對(duì)照品溶液，照上述色譜條件與系統(tǒng)適用性，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，分別對(duì)柴胡皂苷a、柴胡皂苷d進(jìn)行線性回歸，具體計(jì)算結(jié)果如表1。

結(jié)果表明，柴胡皂苷a、柴胡皂苷d在各自濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

6 精密度試驗(yàn)

分別取線性關(guān)系考察項(xiàng)下濃度為41.28μg·mL-1柴胡皂苷a對(duì)照品溶液，濃度為56.44μg·mL-1柴胡皂苷d對(duì)照品溶液，照上述色譜條件，精密吸取20μL，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，考察各自峰面積，RSD分別為0.9%、0.75%，均小于2.0%，儀器精密度良好。

7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品，精密量取本品2ml，置中性氧化鋁柱（100～200目，10g，內(nèi)徑2.0cm）上，用80%甲醇40ml洗脫，收集洗脫液置50ml量瓶中，加10%濃氨試液3滴，加80%甲醇稀釋至刻度，即得重復(fù)性試驗(yàn)供試品溶液。平行處理6份樣品，照上述色譜條件，分別精密吸取20μL，注入液相色譜儀，計(jì)算出各自含量，結(jié)果表2。

結(jié)果表明，重復(fù)性試驗(yàn)含量結(jié)果的RSD（%）均小于2.0%，本方法重復(fù)性良好。

8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收的方法?；厥章试囼?yàn)對(duì)照品混合儲(chǔ)備液的配制：精密稱取柴胡皂苷a對(duì)照品29.49mg和柴胡皂苷d對(duì)照品30.52mg，置25ml量瓶中，加80%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻?；厥章蕵悠啡芤褐苽洌壕芰咳”酒?ml，量取9份，分別精密加入對(duì)照品混合儲(chǔ)備液0.8ml、1.0ml、1.2ml（相當(dāng)于已知含量樣品1ml的80%、100%、120%的含量），各3份，置中性氧化鋁柱（100～200目，10g，內(nèi)徑2.0cm）上，用80%甲醇40ml洗脫，收集洗脫液置50ml量瓶中，加10%濃氨試液3滴，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。按上述色譜條件，進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖，計(jì)算回收率，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

結(jié)果表明，各濃度下的柴胡總皂苷平均回收率均在98%～102%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的RSD（%）小于2.0%，該方法回收率良好、準(zhǔn)確度高。

9 溶液穩(wěn)定性考察

取本品供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12小時(shí)，將供試品溶液注入液相色譜儀，分別記錄不同時(shí)間點(diǎn)柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的峰面積。結(jié)果峰面積的RSD分別為0.93%、1.03%，RSD均小于2.0%，表明12小時(shí)內(nèi)樣品供試品溶液穩(wěn)定，可以用于含量測(cè)定。

10 討論

10.1 柴連口服液中含有六味中藥，有效成分復(fù)雜，所以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量測(cè)定干擾較多，參照藥典，最后將檢測(cè)波長(zhǎng)定在220nm，因?yàn)楸酒吩?10nm有其他成分物質(zhì)紫外吸收干擾。

10.2 藥典標(biāo)準(zhǔn)中柴胡藥材的柴胡皂苷a、d流動(dòng)相采用乙腈-水不同比例梯度洗脫，保留時(shí)間較長(zhǎng)，不適用于組方復(fù)雜的本品口服液。由于柴胡皂苷顯酸性，所以流動(dòng)相系統(tǒng)加入三乙胺調(diào)節(jié)pH值，使流動(dòng)相系統(tǒng)呈弱堿性，利于皂苷在色譜柱中解離，縮短保留時(shí)間，改善色譜峰拖尾現(xiàn)象，優(yōu)化了色譜峰形。

參考文獻(xiàn)

[1]魯湘鄂，郭海福，汪洪武，李湘.HPLC法測(cè)定柴胡中柴胡皂苷a，d的含量.肇慶學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，27（2）：43-46.

[2]中華人民共和國(guó)藥典（一部）.化學(xué)工業(yè)出版社，2015：280-281.