劉浩

摘 要：目的：探究HPLC測定方法在對清開靈藥物之中梔子苷含量進(jìn)行測定的效果。方法：使用高效液相模式色譜儀器進(jìn)行分析，設(shè)定檢測波的波長數(shù)值為238納米，在選擇流動相的時候選乙腈和水的混合溶液作為流動相1.5米每分鐘。探究結(jié)果：實驗結(jié)果顯示其精密度數(shù)值以及回收率數(shù)值顯示良好，實驗平均回收率達(dá)到了85.4%，RSD數(shù)值顯示為1.49%。結(jié)論：使用這種檢測方法能取得良好的實驗結(jié)果，不但實驗分析速度加快，且結(jié)果可靠，這種分析方法可以被用作清開靈藥物中梔子苷含量的測定。

關(guān)鍵詞：HPLC法；清開靈；梔子苷；含量測定

清開靈藥物從其成分的角度分析來看，其主要的成分為膽酸藥物、金銀花藥物、珍珠母藥物、梔子藥物、黃岑藥物、水牛角藥物，這種藥物在臨床治療之中有著清熱解毒、安神助眠的作用，能調(diào)節(jié)人的精神狀態(tài)以及身心狀態(tài)，同時對于上呼吸道部分的感染癥狀、病毒性感染情況、高熱癥情況都有良好的治療效果。通過現(xiàn)代醫(yī)學(xué)分析技術(shù)的進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)清開靈藥物之中影響藥效的主要成分中的一種就是梔子物質(zhì)，而這一物質(zhì)含量方面測定的質(zhì)量直接決定藥物的生產(chǎn)質(zhì)量，由此為了保證清開靈這種藥物的質(zhì)量，本文運用了HPLC法對藥品之中的梔子苷物質(zhì)的含量進(jìn)行了進(jìn)一步的分析，并且實際的分析中這種分析方式有著分離程度較高、重現(xiàn)性良好的特點，最終獲得了較為良好的實驗分析效果。

1 儀器以及藥品

LC-10A型高效液相色譜儀，包括SPD-10AUV檢測器，LC-10A色譜工作站（日本島津公司）；梔子苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供），清開靈片樣品（哈爾濱 圣泰制藥股份有限公司，批號：20100506-1、20100506-2、20100506-3）。乙腈、甲醇為色譜純。

2 方法以及結(jié)果

2.1 實驗溶液的制備

2.1.1 對照作用溶液的制備。對照溶液在實驗中起到了強化分析效果、豐富分析內(nèi)容的作用，在制備環(huán)節(jié)之中首先技術(shù)人員要稱量15.4毫克梔子苷藥品的對照品，并將這些藥品放入到50毫升的棕色試劑瓶中，之后向試劑瓶中逐漸加入甲醇溶液直到溶液高度達(dá)到了刻度線，將試劑瓶搖勻，從試劑瓶之中精確的稱量出5毫升溶液，并將這5毫升溶液放入到100毫升的容量瓶之中，再次用甲醇溶液將其稀釋到刻度線，充分的將溶液搖勻，最終所獲得的溶液之中每毫升含梔子苷物質(zhì)15.4微克。

2.1.2 實驗溶液的配置。在進(jìn)行精實驗溶液配置的階段中，直接拿取清開靈藥物十片，將這些藥物完全研磨、粉碎，并從研磨之后的粉末之中精準(zhǔn)的稱量出0.25克該粉末，將粉末放置到容積為25毫升的容量瓶之中，向其中倒入20毫升的甲醇溶液，并通過超聲設(shè)備對其進(jìn)行進(jìn)一步的震蕩處理，將震蕩時間維持在30分鐘左右。在完成了震蕩操作之后將溶液靜置降溫至冷卻，同時向其中加入甲醇溶液并稀釋到刻度線，將其搖勻，使用微孔濾膜對其進(jìn)行過濾。

2.1.3 陰性性質(zhì)的樣品溶液。在配置該藥品的階段中，按照藥品的處方確定溶液的成分，并保證藥物中含有除了梔子苷物質(zhì)以外的所有藥物，遵照藥品加工方案制成不含梔子苷物質(zhì)成分的清開靈藥物，之后按照供試品物質(zhì)的相應(yīng)方法以及規(guī)定制備出。

2.2 實驗色譜條件

在確定相應(yīng)色譜條件的時候，根據(jù)實驗特點以及實驗要求選擇C18色譜柱，將物質(zhì)的檢測波長設(shè)定為238納米，選擇流動相的時候選乙腈和水的混合溶液作為流動相1.5米每分鐘，進(jìn)樣量10微升。取梔子苷對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液分別注入液相色譜儀進(jìn)行測定。供試品色譜圖中，呈現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰，且基線平穩(wěn)，分離度好，而陰性樣品在此保留時間無色譜峰。

2.3 線性數(shù)值關(guān)系

在實驗中分次精確的稱取物質(zhì)濃度數(shù)值為15.4微克每毫升的對照品溶液，0.2毫升、0.4毫升、0.6毫升、0.8毫升、1.0毫升，并將這些溶液放置容積為10毫升的容量瓶之中，并用甲醇溶液稀釋容量瓶刻度線，在完成了溶液配置之后吸取這些溶液10微升分別注入到實驗所用的分析儀器之中，進(jìn)一步對峰面積數(shù)值進(jìn)行確定。在進(jìn)行后續(xù)研究分析的時候，以峰面積數(shù)值作為分析縱坐標(biāo)，同時以梔子苷藥物對照品物質(zhì)進(jìn)樣量作為分析的表格的橫坐標(biāo)，最終繪制出相應(yīng)的分析標(biāo)準(zhǔn)曲線。從分析結(jié)果方面來看當(dāng)梔子苷物質(zhì)的進(jìn)樣量數(shù)值在0.0604毫克到0.3010毫克之間的時候，能確保峰面積數(shù)值數(shù)值能有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度分析

選擇不同批次的供試溶液，并按照上文所提到的分析方法進(jìn)行重復(fù)性的分析實驗，重復(fù)六次，進(jìn)一步確定實驗數(shù)據(jù)分析峰的面積數(shù)值，通過分析計算獲得其RSD數(shù)值為0.92%，結(jié)果數(shù)據(jù)表明這一分析方法有良好的精密性。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，按上述色譜條件分別于0、2、4、6、8、10小時測定峰面積，計算其RSD值為0.99%。結(jié)果表明樣品在10小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗

取清開靈片10克，研碎后混合均勻，精密稱取樣品5份，每份0.25克。按供試品溶液制備方法制備，依上述測定條件測定，并計算含量，結(jié)果平均含量為1.591毫克/克，RSD為1.21%。表明本法重復(fù)性好。

2.7 加樣回收率試驗

精密稱取5份重復(fù)性試驗項下的樣品各0.1克，分別精密加入濃度為15.4μg/mL的梔子苷對照品溶液0.5ml，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，平行2次，按下式計算回收率。

2.8 樣品測定

分別精密吸取供試品溶液10微升，注入液相色譜儀，測定，按外標(biāo)法計算樣品中梔子苷的含量。三批清開靈片中梔子苷含量分別為：1.591毫克/克，1.498毫克/克和1.485毫克/克。

3 討論

3.1 檢測波長的確定

取濃度為30μg/ml的梔子苷對照品甲醇溶液，采用分光光度法在200～400nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果本品在237.5nm波長處有最大吸收。參照梔子含量測定項下方法及相關(guān)文獻(xiàn)報道，確定梔子苷含量測定的檢測波長為238nm。

3.2 超聲提取時間的選擇

參考有關(guān)文獻(xiàn)報道，在制備供試品溶液時，取同一批號樣品，以甲醇為溶劑超聲提取10、20、30、40min，在同一色譜系統(tǒng)及色譜條件下試驗，結(jié)果各樣品的平均含量分別為0.435、0.449、0.494、0.496mg/片，表明20min時梔子苷基本提取完全，故確定超聲提取時間為20min。

清開靈片由水牛角、黃芩苷、梔子、板藍(lán)根等八味藥組成，具有清熱解毒，鎮(zhèn)靜安神。用于外感風(fēng)熱時毒、火毒內(nèi)盛所致高熱不退、煩躁不安、咽喉腫痛、舌質(zhì)紅絳、苔黃、脈數(shù)者；上呼吸道感染、病毒性感冒、急性化膿性扁桃體炎、急性咽炎、急性氣管炎、高熱等病癥屬上述證候者。

本實驗建立的清開靈片中梔子苷的HPLC含量測定方法，經(jīng)方法學(xué)驗證結(jié)果表明，本法專屬性好，靈敏度高，穩(wěn)定性及重復(fù)性均符合含量測定要求，且操作簡便。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].中藥成方制劑：第8冊，1993：175.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：173.

[3]劉寧.HPLC法測定解郁安神片中梔子苷的含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2008，9（6）：467-469.

[4]邵燕虹，宋麗莉，周燕雙.HPLC法測定清熱暗瘡?fù)柚袟d子苷的含量[J].醫(yī)學(xué)綜述，2008，14（22）：3518-3519..

[5]張大軍，王兆華.高效液相色譜法測定復(fù)腎寧片中梔子苷的含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2010，16（12）：88-89.endprint