曾小平， 肖 楚， 晏頌欣, 劉燕玲， 周慧蓉， 徐方云， 潘 意， 王紅梅△

(1南昌大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 2江西科技學(xué)院， 江西 南昌 330006)

沉默吲哚胺2,3-雙加氧酶2基因?qū)谏亓黾?xì)胞B16-BL6增殖、遷移和侵襲的影響*

曾小平1， 肖 楚1， 晏頌欣1, 劉燕玲2， 周慧蓉1， 徐方云1， 潘 意1， 王紅梅1△

(1南昌大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，2江西科技學(xué)院， 江西 南昌 330006)

目的： 探討沉默吲哚胺2,3-雙加氧酶2(IDO2)基因?qū)π∈蠛谏亓鯞16-BL6細(xì)胞增殖、遷移及侵襲等生物學(xué)行為的影響。方法: IDO2-siRNA轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的黑色素瘤細(xì)胞B16-BL6，應(yīng)用real-time PCR和Western blot檢測(cè)IDO2和IDO1基因的表達(dá)；平板集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IDO2基因沉默對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)觀察IDO2對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移的影響；Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)觀察腫瘤細(xì)胞侵襲能力。結(jié)果: 沉默B16-BL6細(xì)胞中IDO2基因能使細(xì)胞單集落形成密度降低,劃痕遷移變慢, Transwell小室細(xì)胞遷移數(shù)減少,侵襲細(xì)胞數(shù)減少。結(jié)論: 沉默IDO2可以影響黑色素瘤細(xì)胞B16-BL6的增殖、遷移和侵襲能力。

吲哚胺2,3-雙加氧酶2； 黑色素瘤； 細(xì)胞遷移； 細(xì)胞侵襲

近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞如樹(shù)突狀細(xì)胞等能產(chǎn)生一種重要的免疫負(fù)調(diào)節(jié)因子——吲哚胺2,3-雙加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase，IDO;現(xiàn)又稱(chēng)為IDO1)，它可以使腫瘤逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)控，改變腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移能力，影響樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗的臨床治療效果[1]。IDO1于1963年首次在兔的腸道中被發(fā)現(xiàn)，是色氨酸沿犬尿酸代謝途徑的第一步限速酶[2-3]。Mellor等[4]發(fā)現(xiàn)IDO1能減少細(xì)胞微環(huán)境中的色氨酸水平，即引起“色氨酸饑餓”，從而選擇性降低抗原依賴(lài)的T細(xì)胞活性。此外色氨酸的代謝產(chǎn)物如3-羥基氨基苯甲酸、犬尿素和喹啉也能導(dǎo)致T細(xì)胞抑制和死亡，IDO1還可以介導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞形成從而引起腫瘤免疫逃逸[5]。2007年在人及小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)一種新的具有IDO1樣活性的酶，被稱(chēng)為吲哚胺2,3-雙加氧酶2(indoleamine 2,3-dioxyge-nase 2，IDO2)，此酶也可以分解色氨酸，是IDO1的同源蛋白，且結(jié)構(gòu)上與IDO1有43%相似，其基因緊鄰IDO1基因的下游，位于人和小鼠的第8號(hào)染色體上[6]。由于IDO2分子發(fā)現(xiàn)的時(shí)間較晚，它的許多生物學(xué)特性及免疫抑制的機(jī)制還未闡明，但卻表現(xiàn)出比IDO1更強(qiáng)的抑制T細(xì)胞的抗腫瘤作用。同時(shí)IDO2對(duì)腫瘤本身生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和侵襲的作用仍不清楚。本研究通過(guò)篩選獲得高表達(dá)IDO2基因的小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16-BL6，應(yīng)用RNA干擾技術(shù)特異性沉默IDO2后觀察B16-BL6細(xì)胞生物學(xué)特性的變化，探討IDO2對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)調(diào)控作用。

材料和方法

1材料與主要試劑

小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16-BL6購(gòu)自American Type Culture Collection (ATCC)；RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清購(gòu)自HyClone； 胰蛋白酶購(gòu)自Gibco；IDO2-siRNA和GL2-siRNA(control siRNA)購(gòu)自Sigma；qPCR引物由上海拜力生物科技有限公司合成；SYBR Premix Ex Taq I kit購(gòu)自TaKaRa；Transwell小室購(gòu)自BD Biosciences；Lipofectamine 2000購(gòu)自Invitrogen。

2方法

2.1IDO2-siRNA轉(zhuǎn)染B16-BL6細(xì)胞 小鼠黑色素瘤B16-BL6細(xì)胞常規(guī)復(fù)蘇后，用含10% 胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)液重懸，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)，隔天換液，待細(xì)胞長(zhǎng)至90%左右融合用0.25%的胰蛋白酶消化傳代。取生長(zhǎng)良好的細(xì)胞均勻鋪板于12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，待細(xì)胞融合度達(dá)70%左右時(shí)按照Lipofectamine 2000的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。4 h后換成含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為未處理組、轉(zhuǎn)染GL2-siRNA(control siRNA)的陰性對(duì)照組和轉(zhuǎn)染IDO2-siRNA實(shí)驗(yàn)組。

2.2Real-time PCR和Western blot檢測(cè)B16-BL6細(xì)胞中siRNA對(duì)IDO1和IDO2的沉默效果 收集轉(zhuǎn)染后48 h的細(xì)胞，用Trizol試劑盒提取各組總mRNA, M-MLV 逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)反轉(zhuǎn)錄成cDNA。SYBR Premix Ex Taq I kit及ABI 7500熒光定量PCR儀進(jìn)行qPCR擴(kuò)增和分析。IDO1的上游引物序列為5’- GGGCTTTGCTCTACCACATCCACT-3’，下游引物序列為5’-ACATCGTCATCCCCTCGGTTCC-3’，產(chǎn)物為234 bp；IDO2的上游引物序列為5’-TGCCTGATGGCCTATAACCAGTGT-3’，下游引物序列為5’-TGCAGGATGTGAACCTCTAACGCT-3’，產(chǎn)物為306 bp；GAPDH的上游引物序列為5’-GGGGTGAGGCCGGTGCTGAGTAT-3’， 下游引物序列為5’-CATTGGGGTAGGAACACGGAAGG-3’ 。反應(yīng)條件為： 95 ℃ 10 min； 95 ℃ 30 s， 60 ℃ 45 s， 72 ℃ 30 s， 40個(gè)循環(huán)； 72 ℃延伸10 min。每組樣本設(shè)3個(gè)復(fù)孔，取其平均Ct值。以未處理組作參照，IDO1和IDO2的相對(duì)表達(dá)量用2-ΔΔCt表示。組織裂解液RIPA提取轉(zhuǎn)染48 h的細(xì)胞總蛋白，BCA法測(cè)蛋白濃度，取50 μg樣品進(jìn)行SDS-PAGE，轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜，分別用相應(yīng)的抗體孵育，ECL系統(tǒng)曝光顯影，膠片進(jìn)行高清度掃描后收集圖像，以凝膠圖像灰度處理系統(tǒng)分析。

2.3平板集落形成實(shí)驗(yàn) 將各組細(xì)胞配成細(xì)胞懸液，調(diào)整濃度為1×107cells/L，取100 μL細(xì)胞懸液接種于作好標(biāo)記的培養(yǎng)皿中(即每個(gè)培養(yǎng)皿接種1 000個(gè)細(xì)胞)，補(bǔ)加培養(yǎng)液至5 mL，置于5% CO2、 37 ℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；觀察各組細(xì)胞平板集落形成情況，在第7天將培養(yǎng)皿中的液體吸出，加PBS清洗2次后，加瑞氏染液的I液1 mL，使其覆蓋培養(yǎng)皿中所有的細(xì)胞，作用1 min后加入等量或稍多的瑞氏染液的II液輕輕搖勻，作用5 min后用自來(lái)水沖洗；晾干后拍照保存。

2.4劃痕實(shí)驗(yàn) 取24孔板，每孔分別接種每組細(xì)胞1×105于1 mL細(xì)胞培養(yǎng)液中，置細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；24 h后吸出培養(yǎng)液，用10 μL的槍頭給每組豎直劃痕，力道保持平穩(wěn)；用PBS緩慢清洗3遍，每孔各加1 mL的細(xì)胞培養(yǎng)液，于拍照顯微鏡下觀察拍照后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h；取出觀察細(xì)胞遷移情況。

2.5Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn) 將各組細(xì)胞換成無(wú)血清培養(yǎng)液培養(yǎng)12 h去除血清的影響；0.25%的胰蛋白酶消化細(xì)胞后用PBS洗1遍，并用10 g/L BSA的無(wú)血清培養(yǎng)基重懸。分別調(diào)整細(xì)胞濃度至1×109cells/L；將Transwell小室架在24孔板上，各小室內(nèi)分別加入100 μL各組細(xì)胞懸液；24孔板的下室各加入500 μL含20%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液；常規(guī)培養(yǎng)72 h取出小室，吸出培養(yǎng)液，用PBS淋洗；再用棉簽小心擦去上室膜細(xì)胞；用瑞氏染液固定染色，倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)遷移至下室膜上的細(xì)胞，每個(gè)樣本隨機(jī)取5個(gè)視野計(jì)數(shù)，取平均值。

2.6Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn) 將Matrigel放入4 ℃冰箱過(guò)夜(12 h)，吸取融化狀態(tài)的Matrigel 10 μL，加70 μL的10 g/L BSA無(wú)血清培養(yǎng)基混合，加入Transwell小室的上室包被基底膜，室溫風(fēng)干成果凍狀；吸出殘余液體，每孔加入50 μL含10 g/L BSA的無(wú)血清培養(yǎng)基水化基底膜，置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育30 min后； 細(xì)胞換成無(wú)血清培養(yǎng)12 h，消化后離心收集細(xì)胞沉淀，用PBS洗1遍，然后用10 g/L BSA的無(wú)血清培養(yǎng)基重懸。分別調(diào)整細(xì)胞濃度至1×109cells/L；將Transwell小室架于24孔板上，各小室內(nèi)分別加入100 μL各組細(xì)胞懸液；24孔板的下室各加入500 μL含20%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，常規(guī)培養(yǎng)96 h；取出小室，吸出培養(yǎng)液，用PBS淋洗；再用棉簽小心擦去上室膜細(xì)胞；瑞氏染液固定染色，倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)遷移至下室膜上的細(xì)胞，每個(gè)樣本隨機(jī)取5個(gè)視野計(jì)數(shù)，取平均值。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

以SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，兩組間差異比較采用t檢驗(yàn)法，多組間差異的比較用單因素方差分析法。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1siRNA對(duì)B16-BL6細(xì)胞中IDO2的沉默效果

我們的前期實(shí)驗(yàn)比較了不同來(lái)源的腫瘤細(xì)胞系IDO2的表達(dá)情況，篩選出高表達(dá)IDO2基因的小鼠黑色素瘤B16-BL6細(xì)胞(數(shù)據(jù)未公布)，并且挑選出能有效干擾B16-BL6細(xì)胞IDO2表達(dá)的siRNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染。應(yīng)用real-time PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中IDO1和IDO2的表達(dá)，可見(jiàn)轉(zhuǎn)染IDO2-siRNA后B16-BL6細(xì)胞IDO2的表達(dá)明顯降低，而IDO1并沒(méi)有受影響，用2-ΔΔCt法計(jì)算得到IDO2的沉默效率為67%左右。Western blot檢測(cè)顯示細(xì)胞IDO2蛋白表達(dá)亦顯著減少，見(jiàn)圖1。

Figure 1. Transfection with IDO2-siRNA decreased IDO2 expression, but the expression of IDO1 in the B16-BL6 cells was not affec-ted. The mRNA expression of IDO2 and IDO1 was detected by real-time PCR (A), and the protein expression of IDO2 was determined by Western blot (B) in the B16-BL6 cells transfected with IDO2-siRNA or GL2-siRNA (control siRNA). Mean±SD.n=4.*P<0.05vsGL2-siRNA group.

圖1Real-timePCR和Westernblot檢測(cè)轉(zhuǎn)染IDO2-siRNA對(duì)B16-BL6細(xì)胞IDO2和IDO1表達(dá)的影響

2細(xì)胞平板集落形成實(shí)驗(yàn)

通過(guò)細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)觀察IDO2沉默后細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。經(jīng)平板集落形成7 d后，各組細(xì)胞克隆形成，倒置顯微鏡拍照，在40倍顯微鏡下隨機(jī)取5個(gè)視野計(jì)算形成的單克隆數(shù)，含50個(gè)以上細(xì)胞形成的集落為一個(gè)統(tǒng)計(jì)并作圖。IDO2-siRNA沉默組較正常對(duì)照組及siRNA對(duì)照組形成的集落密度和大小都顯著減少，各組平均單集落數(shù)分別為6.8±0.6、11.8±1.0和10.3±0.7，IDO2沉默組克隆形成數(shù)明顯減少(P<0.05)。結(jié)果提示沉默細(xì)胞中的IDO2能抑制B16-BL6細(xì)胞的增殖，見(jiàn)圖2。

3細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察經(jīng)劃痕處理后培養(yǎng)24 h細(xì)胞遷移情況，計(jì)算每組細(xì)胞的遷移率=(D0h-D24h)/D0h。正常對(duì)照組、siRNA對(duì)照組及IDO2-siRNA組細(xì)胞的遷移率分別為0.73±0.08、0.70±0.05和0.38±0.04，B16-BL6細(xì)胞轉(zhuǎn)染IDO2-siRNA后，與對(duì)照組比較細(xì)胞遷移率明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖3。

Figure 2. Transfection with IDO2-siRNA decreased the numbers of colony formation in the B16-BL6 cells (×40). Mean±SD.n=4.*P<0.05vsGL2-siRNA group.

圖2細(xì)胞的集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染IDO2siRNA后B16-BL6細(xì)胞的集落形成數(shù)

Figure 3. The effect ofIDO2 silencing on the migration ability of the B16-BL6 cells detected by the wound healing assay (×100). Mean±SD.n=4.*P<0.05vsGL2-siRNA group.

圖3細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IDO2基因沉默對(duì)B16-BL6細(xì)胞遷移能力的影響

4B16-BL6細(xì)胞Transwell遷移實(shí)驗(yàn)

Transwell遷移實(shí)驗(yàn)觀察IDO2對(duì)B16-BL6細(xì)胞遷移能力的改變。正常對(duì)照組、siRNA對(duì)照組和IDO2沉默組遷移到下室的細(xì)胞數(shù)分別為90.4±3.7、88.6±5.1和56.2±4.0，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。這提示沉默細(xì)胞中的IDO2能降低B16-BL6細(xì)胞的遷移能力，見(jiàn)圖4。

5B16-BL6細(xì)胞Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)

Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示正常對(duì)照組、siRNA對(duì)照組和IDO2沉默組侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)分別為111.2±10.6、110.8±10.2和44.8±9.6，沉默細(xì)胞中的IDO2能降低B16-BL6細(xì)胞的侵襲能力，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)圖5。

討 論

色氨酸是人體含量最少的必需氨基酸，對(duì)維持細(xì)胞活化和增殖有重要意義，也是T淋巴細(xì)胞保持活性和生存所必需的氨基酸。色氨酸主要是沿犬尿酸通路進(jìn)行分解，該途徑的第一步限速反應(yīng)為色氨酸氧化生成N-甲酰犬尿酸原，目前發(fā)現(xiàn)有3種限速酶能夠催化此反應(yīng)：色氨酸雙加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase，TDO)、IDO1和IDO2。TDO主要存在于肝臟，催化食物來(lái)源的色氨酸，受糖皮質(zhì)激素及左旋色氨酸的誘導(dǎo)[7-8]。IDO1和IDO2是肝臟以外的主要限速酶。盡管IDO2和IDO1一樣也是色氨酸代謝的限速酶，但是它們的酶學(xué)活性、對(duì)底物的親和力、在哺乳動(dòng)物和人體內(nèi)的表達(dá)以及免疫學(xué)上表現(xiàn)的作用并不完全一致[9]；二者表達(dá)誘導(dǎo)因素也是不一樣，IDO1容易被IFN-γ所誘導(dǎo)，而IDO2卻很少被誘導(dǎo)[10]。IDO1和IDO2對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖抑制反應(yīng)也存在不同的信號(hào)通路和不同的免疫調(diào)節(jié)作用，因而可以認(rèn)為IDO2與IDO1之間既存在相互聯(lián)系，又有著不同的作用機(jī)制。

Figure 4. The effect ofIDO2 silencing on the migration ability of B16-BL6 cells detected by the Transwell migration assay (×200). Mean±SD.n=4.**P<0.01vsGL2-siRNA group.

圖4Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IDO2沉默對(duì)B16-BL6細(xì)胞遷移能力的影響

Figure 5. The effect ofIDO2 silencing on the invasion ability of the B16-BL6 cells detected by the Transwell invasion assay (×200). Mean±SD.n=4.**P<0.01vsGL2-siRNA group.

圖5Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IDO2對(duì)B16-BL6細(xì)胞侵襲能力的影響

IDO2作為免疫負(fù)調(diào)控因子對(duì)T細(xì)胞的影響已有部分報(bào)導(dǎo)，那么它的表達(dá)反過(guò)來(lái)很可能也影響了腫瘤的某些生長(zhǎng)特性。由于IDO2與IDO1結(jié)構(gòu)上存在一定的相似性且有共同的酶學(xué)底物，到目前為止還沒(méi)有一種特異性抑制劑能有效地阻斷其酶學(xué)活動(dòng)，因而我們應(yīng)用RNA干擾技術(shù)特異性沉默IDO2、而不影響IDO1表達(dá)來(lái)研究其對(duì)腫瘤生物學(xué)活性的影響作用。我們的結(jié)果顯示沉默IDO2后，黑色素瘤細(xì)胞B16-BL6的集落形成數(shù)量和大小明顯下降，表明其增殖是受抑制的。微環(huán)境中色氨酸耗竭以及生成的代謝中間產(chǎn)物可引起細(xì)胞增殖受到抑制[11];有研究顯示沉默IDO1可以使細(xì)胞增殖加快[12]。因而我們推測(cè)IDO2對(duì)腫瘤細(xì)胞的調(diào)控可能與IDO1有著不同的機(jī)制，并不完全依賴(lài)于它的酶活性，或者它的酶活性是在某些條件下才能發(fā)揮作用[13]。研究表明腫瘤內(nèi)雖然有IDO2表達(dá)，但通常只有IDO1分解色氨酸，而 IDO2處于失能狀態(tài)，不影響色氨酸代謝[14]。IDO2是否對(duì)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力有影響呢？我們的體外研究結(jié)果顯示沉默IDO2后，黑色素瘤細(xì)胞遷移速度明顯減慢，在Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)中從上室侵襲到下室的細(xì)胞也顯著減少。研究表明IDO2通過(guò)誘導(dǎo)真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄起始因子2α磷酸化而上調(diào)肝臟富含的抑制蛋白的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)免疫基因亮氨酸拉鏈的表達(dá)，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和免疫反應(yīng)，且該過(guò)程不能被逆轉(zhuǎn)[15]。應(yīng)用IDO2抑制劑不僅可以更有效地減小小鼠腫瘤體積，還可以增加腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞的數(shù)量，而IDO1抑制劑僅引起荷瘤動(dòng)物腫瘤體積減小，并且二者發(fā)揮不同的免疫調(diào)節(jié)作用[16]，因而IDO2被認(rèn)為與腫瘤侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有著更為密切的關(guān)系。

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(責(zé)任編輯： 林白霜， 羅 森)

Gene silencing of indoleamine 2,3-dioxygenase 2 influences proliferation, migration and invasion of B16-BL6 melanoma cells

ZENG Xiao-ping1, XIAO Chu1, YAN Song-xin1, LIU Yan-ling2, ZHOU Hui-rong1, XU Fang-yun1, PAN Yi1, WANG Hong-mei1

(1Basic Medical College of Nanchang University,2Jiangxi University of Technology, Nanchang 330006, China. E-mail: wanghongmay@hotmail.com)

AIM: To investigate the effects of indoleamine 2, 3-dioxygenase 2 (IDO2) silencing on proliferation, migration and invasion of B16-BL6 melanoma cells.METHODS: IDO2-siRNA was transfected into the B16-BL6 melanoma cellsinvitro. The expression of IDO2 or IDO1 at mRNA and protein levels was detected by real-time PCR and Western blot. Colony formation assay was performed to analyze the proliferation ofIDO2-silencing tumor cells. The migration ability of B16-BL6 cells after silencing ofIDO2 was measured by wound healing assay and Transwell cell migration assay. The invasion ability of the tumor cells was detected by Transwell cell invasion assay.RESULTS: IDO2-siRNA signi-ficantly down-regulated IDO2 expression in B16-BL6 melanoma cells, and did not affect IDO1 expression. Compared with control group, the colony formation ability, the migratory distance measured by wound healing assay, and the migration and the invasion cell numbers detected by Transwell assay all remarkably decreased in theIDO2-silencing cells.CONCLUSION:IDO2 silencing affects the proliferation, migration and invasion abilities of the B16-BL6 melanoma cells.

Indoleamine 2,3-dioxygenase 2; Melanoma; Cell migration; Cell invasion

1000- 4718(2017)09- 1619- 06

2017- 02- 20 [

] 2017- 07- 22

江西省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(No. 14090)

R739.5； R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.09.014

△通訊作者 Tel: 13767004966； E-mail: wanghongmay@hotmail.com