胡夢(mèng)，杜杰，賈丹丹，劉英，胡海峰*

(1.上海醫(yī)藥工業(yè)研究院，上海 200040；2.國(guó)藥集團(tuán)健康產(chǎn)業(yè)研究院有限公司，上海 201203；3.中國(guó)中藥公司，北京 100195)

·基礎(chǔ)研究·

炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中微生物的分離與初步鑒定△

胡夢(mèng)1，2，杜杰3，賈丹丹1，2，劉英1，2，胡海峰1，2*

(1.上海醫(yī)藥工業(yè)研究院，上海 200040；2.國(guó)藥集團(tuán)健康產(chǎn)業(yè)研究院有限公司，上海 201203；3.中國(guó)中藥公司，北京 100195)

目的：揭示炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中的微生物菌群。方法：應(yīng)用經(jīng)典微生物分離純化方法，結(jié)合形態(tài)學(xué)考察和16S rDNA 或18S rDNA 基因序列分析，對(duì)炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中樣品進(jìn)行微生物的分離及菌種初步分類鑒定。結(jié)果：共分離獲得細(xì)菌14株、酵母菌11株、絲狀真菌2株。14種細(xì)菌分別為克雷伯氏菌屬菌、腸桿菌屬菌、節(jié)桿菌屬、蠟樣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、形賴氨酸芽孢桿菌、伯格菌屬、短黃桿菌、棒狀桿菌屬、嗜鹽球菌、巨大芽孢桿菌、植物乳桿菌、乳酸乳球菌、食竇魏斯式菌；11種酵母菌分別為淺白色隱球酵母菌、膠紅酵母菌、葡萄牙棒孢酵母、熱帶念珠菌、克魯維畢赤酵母、毛孢子菌屬菌、半乳糖霉菌、地絲菌屬、巴氏畢赤酵母、假絲酵母屬、白地霉菌；2種絲狀真菌分別為產(chǎn)黃青霉菌、卷枝毛霉菌。結(jié)論：炮天雄傳統(tǒng)發(fā)酵炮制工藝涉及多種微生物共同參與發(fā)酵過(guò)程，這一發(fā)現(xiàn)為研究炮天雄現(xiàn)代炮制工藝奠定了微生物菌種基礎(chǔ)。

炮天雄；炮制；微生物；分離；鑒定

附子為毛茛科植物烏頭AconitumcarmichaeliDebx.的子根加工品，其中形長(zhǎng)而細(xì)、重50 g以上者習(xí)稱“天雄”[1]。炮天雄是附子的一種炮制品，優(yōu)選大個(gè)附子采用傳統(tǒng)炮制技術(shù)加工而成[2]。其成品多為長(zhǎng)圓錐形，頂端常有短殘莖，中部多向一側(cè)略膨大，色黃，清脆，切面無(wú)光澤，氣微，味淡，性味辛。目前中國(guó)大陸使用較少，但港澳、東南亞地區(qū)仍習(xí)慣沿用炮天雄入方治療元陽(yáng)素虛、腎虧陽(yáng)虛癥。由于天雄藥材生用毒性較大，臨床應(yīng)用前均須炮制，炮制方法各異[3]。炮天雄的炮制工藝和臨床藥理關(guān)系密切，據(jù)報(bào)道其在加工過(guò)程中毒/效性成分大量流失，造成生物堿含量極低，甚至不能測(cè)出，能否保證臨床療效，值得進(jìn)一步研究[4]。炮天雄的現(xiàn)代研究較少，僅見藥效、毒性、基原的相關(guān)研究[5]。本文應(yīng)用經(jīng)典微生物分離純化方法，分離并初步分類鑒定附子傳統(tǒng)炮制品炮天雄中微生物菌群，為后續(xù)采用純種或混種發(fā)酵改進(jìn)炮天雄的現(xiàn)代炮制工藝奠定菌種基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1試劑

1.1.1樣品 炮天雄傳統(tǒng)炮制不同階段的中間品(四川江油中壩附子科技發(fā)展有限公司提供)，其塊根長(zhǎng)圓錐形，稍彎曲，頂端常有短殘莖，中部多向一側(cè)略膨大，表面棕褐色或灰棕色，有小瘤狀突起的支根。樣品炮制共包括3個(gè)階段：膽巴液浸泡發(fā)酵，清水浸漂和輔料浸泡發(fā)酵，晾干；含7個(gè)取樣點(diǎn)(每隔兩天換浸泡液前取樣)，采集時(shí)間為2016年4月6日—25日。樣品炮制第一階段含4個(gè)取樣點(diǎn)，樣品編號(hào)為J1-1、J1-2、J1-3、J1-4；第二階段含1個(gè)取樣點(diǎn)，樣品編號(hào)為J2；第三階段含2個(gè)取樣點(diǎn)，樣品編號(hào)為J3-1、J3-2。

1.1.2其他試劑 LB培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基、高氏一號(hào)培養(yǎng)基 (國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；Fx KOD Buffer、脫氧核糖核苷三磷酸、dNTP、Fx KOD酶、Easy Taq Buffer、Easy Taq 酶(TaKaRa公司)；引物NS1、NS2(南京金斯瑞生物科技有限公司合成)。

1.2儀器

電子天平(上海精科儀器有限公司)；精密數(shù)顯示酸度計(jì)(Sartorius)；壓力蒸氣滅菌鍋(上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司)；超凈工作臺(tái)(上海智城分析儀器制造有限公司)；生化培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；恒溫培養(yǎng)振蕩器(上海智城分析儀器制造有限公司)；PCR擴(kuò)增儀(德國(guó)Eppendorf公司)。

2 方法

2.1分離及純化培養(yǎng)基

2.1.1LB培養(yǎng)基 添加甲醇溶解制霉菌素，過(guò)濾除菌，終質(zhì)量濃度為50μg·mL-1，乳酸菌外細(xì)菌分離培養(yǎng)用。

2.1.2MRS培養(yǎng)基 添加終質(zhì)量濃度為100μg·mL-1溴甲酚綠指示劑，高壓蒸氣滅菌乳酸菌產(chǎn)酸使顯色劑變黃，乳酸菌分離培養(yǎng)用。

2.1.3PDA培養(yǎng)基 添加過(guò)濾除菌、終質(zhì)量濃度為50μg·mL-1硫酸鏈霉素，真菌分離培養(yǎng)用。

2.1.4高氏一號(hào)培養(yǎng)基 添加過(guò)濾除菌、終質(zhì)量濃度為100μg·mL-1重鉻酸鉀，放線菌分離培養(yǎng)用。

2.2微生物的分離與純化

2.2.1樣品處理

2.2.1.1樣品稀釋 取樣品5g，在無(wú)菌條件下加至裝有45mL無(wú)菌0.9% 氯化鈉溶液、含玻璃小珠的250mL錐形瓶中，振搖約30min，使菌分散，得稀釋10倍菌懸液，采用10倍梯度稀釋，得0.9%氯化鈉溶液水稀釋后菌懸液。

2.2.1.2樣品增菌培養(yǎng) 取樣品約1g，無(wú)菌條件下分別加入2.1分離培養(yǎng)基中，LB液體培養(yǎng)基于37 ℃、200r·min-1振蕩培養(yǎng)1.5d，MRS液體培養(yǎng)基于37 ℃靜置培養(yǎng)1.5d，PDA液體培養(yǎng)基于28 ℃、200r·min-1振蕩培養(yǎng)2.5d。增菌后培養(yǎng)液采用10倍梯度稀釋，得富集培養(yǎng)后稀釋菌液。

2.2.2 微生物分離 分別吸取0.2mL樣品稀釋后菌懸液，均勻涂布于2.1固體培養(yǎng)基。

2.2.3 菌株純化 將LB培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基置于 37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；將PDA培養(yǎng)基、高氏一號(hào)培養(yǎng)基置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，將培養(yǎng)基表面長(zhǎng)出的菌落進(jìn)行平板劃線，直到菌落形態(tài)一致。

2.3菌株初步鑒定

2.3.1形態(tài)學(xué)觀察

2.3.1.1菌落形態(tài) 用接種針取單菌落，細(xì)菌接種于LB培養(yǎng)基，置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；真菌接種于PDA培養(yǎng)基，置28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察菌體在培養(yǎng)基中的菌落形態(tài)與生長(zhǎng)情況。

2.3.1.2顯微形態(tài) 細(xì)菌用結(jié)晶紫染色，置于顯微鏡下觀察細(xì)菌結(jié)構(gòu)，同時(shí)進(jìn)行革蘭氏染色；酵母菌用美藍(lán)染色，置于顯微鏡下觀察；絲狀真菌用插片法進(jìn)行培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)過(guò)插片的位置后，取出蓋玻片進(jìn)行顯微鏡觀察。

2.3.216SrDNA/18SrDNA分子生物學(xué)鑒定

2.3.2.116SrDNA分子生物學(xué)鑒定 細(xì)菌菌落PCR：以菌落為模板，上游引物27F：5′GAGAGTTTGATCCTGGCTCAG3′，下游引物1495R：5′CTACGGCTACCTTGTTACGA3′，完成PCR擴(kuò)增。PCR體系為FxKODBuffer10μL、dNTP0.4μL、引物各0.4μL、FXKOD酶0.4μL、DMSO1μL、ddH2O10μL。PCR程序?yàn)?5℃預(yù)熱5min，94℃變性30s，56℃退火35s，72℃延伸90s，循環(huán)30次，72℃保持10min，16℃保溫。用1%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序并對(duì)結(jié)果進(jìn)行序列分析[5]。

2.3.2.218SrDNA分子生物學(xué)鑒定 真菌以提取的基因組DNA為模板，上游引物NS1：5′GTAGTCATATGCTTGTCTC3′，下游引物NS2：5′GGCTGCTGGCACCAGACTTGC3′，完成PCR擴(kuò)增?；蚪M提取：取培養(yǎng)的真菌一管，裝入細(xì)砂，用FastPrep儀器進(jìn)行操作(5m·s-1，10s，2次)。然后加入500μLDES溶液和5μLβ-巰基乙醇，混勻，65℃水浴30min。加入500μL水飽和苯酚-三氯甲烷-異戊醇(25∶24∶1)，12000r·min-1離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中，再加500μL水飽和苯酚-三氯甲烷-異戊醇(25∶24∶1)，沉淀1次。12000r·min-1離心5min后，將上清液轉(zhuǎn)移至1.5mL 離心管中，加入冷的70%乙醇混勻，-20℃沉淀2h。12000r·min-1離心5min，揮干殘余的乙醇，加入TER溶液溶解。PCR體系為Easy Taq Buffer2.5μL、dNTP1.0μL、引物各1.0μL、Easy Taq酶0.1μL、DMSO1.25μL、模板0.5μL、ddH2O21μL。PCR程序?yàn)?8℃預(yù)熱5min，96℃變性20s，52℃退火90s，72℃延伸90s循環(huán)30次，72℃保持10min，16℃保溫。用1%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序并對(duì)結(jié)果進(jìn)行序列分析[5]。

2.3.2.3選取擴(kuò)增結(jié)果陽(yáng)性的產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序 將PCR測(cè)序結(jié)果提交至NCBI，與Gene Bank數(shù)據(jù)庫(kù)中已知基因序列進(jìn)行Blast對(duì)比分析待測(cè)菌株與模式菌株的同源性。

3 結(jié)果與分析

通過(guò)對(duì)炮天雄炮制過(guò)程中不同時(shí)間點(diǎn)的樣品進(jìn)行分離，總共得到細(xì)菌14種，酵母菌11種，絲狀真菌2種，結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)對(duì)所分菌株進(jìn)行綜合鑒定。

3.1細(xì)菌

3.1.1細(xì)菌形態(tài)學(xué)特征3.1.1.1乳酸菌形態(tài)觀察 各株乳酸菌在MRS平板上的菌落形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)及革蘭染色結(jié)果見表1。

表1 炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中所分離乳酸菌的形態(tài)特征

注：++表示革蘭氏陽(yáng)性。

3.1.1.2 乳酸菌外細(xì)菌形態(tài)觀察 各株細(xì)菌在LB平板上的菌落形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)及革蘭染色結(jié)果見表2。

表2 炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中所分離乳酸菌外細(xì)菌的形態(tài)特征

注：--表示革蘭氏陰性；++表示革蘭氏陽(yáng)性。

3.1.2 細(xì)菌種屬初步鑒定

3.1.2.1乳酸菌種屬初步鑒定 將PCR測(cè)序結(jié)果提交至NCBI，與Gene Bank 數(shù)據(jù)庫(kù)中已知基因序列進(jìn)行Blast對(duì)比，分析待測(cè)菌株與模式菌株的同源性。根據(jù)乳酸菌菌株的16S rDNA序列比對(duì)分析結(jié)果及其形態(tài)學(xué)特征，并結(jié)合《細(xì)菌鑒定手冊(cè)》和《微生物分類學(xué)》等有關(guān)資料，對(duì)所分乳酸菌進(jìn)行初步鑒定。見表3。

表3 炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中所分離乳酸菌種屬初步鑒定

3.1.2.2 乳酸菌外細(xì)菌種屬初步鑒定 根據(jù)細(xì)菌菌株的16S rDNA 序列比對(duì)分析結(jié)果及其形態(tài)學(xué)特征，并結(jié)合《細(xì)菌鑒定手冊(cè)》和《微生物分類學(xué)》等有關(guān)資料，對(duì)所分細(xì)菌進(jìn)行初步鑒定。見表4。

3.2真菌

3.2.1酵母菌形態(tài)學(xué)特征 各酵母菌在PDA平板上的菌落形態(tài)及顯微觀察情況見表5。

表4 炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中所分離乳酸菌外細(xì)菌種屬初步鑒定結(jié)果

表5 炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中所分離酵母菌的形態(tài)特征

3.2.2 酵母菌的初步鑒定 酵母菌菌屬鑒定結(jié)果見表6。

表6 炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中所分離酵母菌菌屬初步鑒定

3.2.3 絲狀真菌形態(tài)學(xué)特征

3.2.3.1 菌落形態(tài)及插片鏡檢結(jié)果 各絲狀真菌在PDA平板上的菌落形態(tài)及插片鏡檢結(jié)果見表7，顯微形態(tài)見圖1。

表7 炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中所分離絲狀真菌的形態(tài)特征

注：A.真菌F-1；B.真菌F-2。圖1 真菌顯微鏡檢圖

3.2.3.2 絲狀真菌初步鑒定 根據(jù)真菌菌株的18s rDNA序列同源性比對(duì)分析結(jié)果及其形態(tài)學(xué)特征，并結(jié)合《真菌鑒定手冊(cè)》和《微生物分類學(xué)》等有關(guān)資料，對(duì)所分絲狀真菌進(jìn)行初步鑒定，鑒定結(jié)果見表8。

表8 炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中所分離絲狀真菌菌屬初步鑒定

3.3不同炮制階段微生物菌群的變化

炮天雄的不同炮制階段樣品中微生物菌群變化情況見表9。

表9 炮天雄傳統(tǒng)炮制過(guò)程中微生物菌群

由表9可見，乳酸菌L-1～L-3出現(xiàn)在炮天雄整個(gè)炮制過(guò)程中。乳酸菌外細(xì)菌的種類在樣品炮制過(guò)程中呈現(xiàn)遞減趨勢(shì)，其中菌株B-1、B-2、B-3約在整個(gè)炮制過(guò)程中出現(xiàn)，而細(xì)菌B-10僅在樣品炮制第一階段的J1-1樣品中分離得到。酵母菌的種類在整個(gè)炮制過(guò)程中變化較大，在炮制的第一階段主要菌株為Y-1～Y-3，在炮制第二、三階段主要新增菌株Y-8、Y-11。絲狀真菌F-2在樣品炮制第一階段后期及炮制第二、三階段被分離得到，絲狀真菌F-1僅在樣品的炮制第一階段后期分離得到。

4 結(jié)論與討論

在炮天雄炮制品的取樣、包裝、運(yùn)輸、所含微生物的分離及其分子鑒定等過(guò)程中，均在無(wú)菌操作條件下進(jìn)行，確保實(shí)驗(yàn)中所分離的菌株非外源性雜菌。從炮天雄不同炮制階段樣品中共分離得到14種細(xì)菌、11種酵母菌和2種絲狀真菌，結(jié)合微生物菌落形態(tài)特征、顯微形態(tài)及16s rDNA/18s rDNA分子序列比，對(duì)這些微生物進(jìn)行初步鑒定。剔除同種菌株后，炮天雄炮制過(guò)程中分離得到微生物，乳酸菌包括：植物乳桿菌、乳酸乳球菌、食竇魏斯式菌；乳酸菌外細(xì)菌包括：克雷伯氏菌屬菌、腸桿菌、節(jié)桿菌屬菌、短黃桿菌、腎棒狀桿菌、嗜鹽球菌、巨大芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、形賴氨酸芽孢桿菌、蠟樣芽胞桿菌及伯格菌屬菌；酵母菌包括克魯維畢赤酵母菌、巴氏畢赤酵母菌、葡萄牙棒孢酵母、淺白色隱球酵母、膠紅酵母菌、熱帶念珠菌、假絲酵母菌屬菌、半乳糖霉菌、白地霉菌、地絲菌屬菌、毛孢子菌屬菌；絲狀真菌包括產(chǎn)黃青霉菌、卷枝毛霉菌。樣品中所分離到的蠟樣芽孢桿菌及巨大芽孢桿菌均具有產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶活性，其中巨大芽孢桿菌還具有產(chǎn)明膠酶、尿素酶能力。

植物乳桿菌、乳酸乳球菌、食竇魏斯式菌、克雷伯氏菌屬菌、腸桿菌、節(jié)桿菌屬菌、白色隱球酵母菌、膠紅酵母菌、葡萄牙棒孢酵母在炮天雄整個(gè)炮制階段均有出現(xiàn)。卷紙毛霉菌在樣品炮制第一階段后期及炮制第二、三階段被分離得到。

炮天雄的傳統(tǒng)炮制采用膽巴液(以氯化鈣為主)浸泡數(shù)日，人體攝入膽巴液過(guò)量，不僅會(huì)抵消附子的溫?zé)崴幮裕瑩p傷人體陽(yáng)氣，甚至出現(xiàn)中毒癥狀[6]，同時(shí)采用流水多次退膽亦會(huì)造成有效烏頭堿的流失。

在目前針對(duì)炮天雄及其炮制品中所含烏頭類生物堿量及其藥理活性研究較多，而對(duì)炮天雄傳統(tǒng)炮制品中微生物菌群及如何利用菌株發(fā)酵轉(zhuǎn)化附子降低雙酯型烏頭堿的毒性的研究甚少。魏婷婷等[7]通過(guò)從60份土壤中定向篩選，獲得菌株 SIPI-18-5(節(jié)桿菌屬Arthrobactersp)，可將烏頭堿轉(zhuǎn)化為單酯型或毒性更小的化合物。本實(shí)驗(yàn)室分離得到節(jié)桿菌屬菌株B-3，其菌落形態(tài)及顯微形態(tài)均與菌株SIPI-18-5類似，需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證是否具該種生物轉(zhuǎn)化功能。從理論上來(lái)說(shuō)，凡是能夠產(chǎn)生酯酶對(duì)酯類物質(zhì)產(chǎn)生水解反應(yīng)的微生物種類都可以作為炮天雄生物轉(zhuǎn)化的菌種。吳麗等[8]采用霉菌類(青霉菌、黑曲霉、毛霉菌)菌種生物轉(zhuǎn)化附子，轉(zhuǎn)化后附子中的雙酯型烏頭堿較生附子中的含量變化較大，并產(chǎn)生多個(gè)新組分。

本實(shí)驗(yàn)為研究采用微生物轉(zhuǎn)化炮天雄中的雙酯型烏頭堿達(dá)到減毒增效的作用提供了菌種基礎(chǔ)，同時(shí)也為減少炮天雄炮制過(guò)程中膽巴液的使用量和浸泡時(shí)間提供了可能性。

[1] 張德昌.對(duì)藥材天雄基源的商討[J].中藥材，1985(1)：46.

[2] 四川省食品藥品監(jiān)督管理局.四川省中藥飲片炮制規(guī)范[S].2015年版.成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，2016：127.

[3] 曹暉，王春燕，王孝濤.毒性中藥天雄炮制歷史沿革研究[J].中國(guó)中藥雜志，1998，23(6)：34.

[4] 曹暉.中藥天雄炮制品的生物堿含量及其急性毒性(LD50)變化的初步研究[M].基層中藥雜志，1993，7(2)：27.

[5] 張德昌.對(duì)天雄基源的商討[M].中藥材，1985，2(1)：46.

[6] 周林，李飛，任玉珍，等.附子中生物堿含量與在膽巴液中浸泡時(shí)間變化規(guī)律的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20(10)：724.

[7] 魏婷婷，胡海峰.烏頭堿轉(zhuǎn)化菌的篩選及發(fā)酵工藝初步優(yōu)化[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2014，45(8):726.

[8] 吳麗，何宇新.基于生物轉(zhuǎn)化技術(shù)進(jìn)行附子減毒增效的研究[D].成都：西華大學(xué)，2012.

IdentificationandIsolationofMicroorganismsfromProcessedAconitumCarmichnaeliSamplesduringItsProcessing

HU meng1，2，DU Jie3，JIA Dandan1，2，LIU Ying1，2，HU Haifeng1，2 *

(1.ShanghaiInstituteofPharmaceuticalIndustry，Shanghai200040;2.SinopharmHealthIndustryInstituteCo.，Ltd，Shanghai201203，China；3.TheTraditionalChineseMedicalCompanyofChina，Beijing100195，China)

Objective：To reveal the beneficial microorganisms in ProcessedAconitumCarmichnaeliduring its processing by traditional fermented methods.Methods：By classical microbial isolation and purification methods，the strains in ProcessedAconitumCarmichnaelisamples were isolated and purified.The preliminary taxonomy of the strains isolated was carried out by investigating the morphological properties，analyzing and comparing their 16S rDNA or 18S rDNA gene sequences.Results：14 species of bacteria，11 species of yeasts and 2 species of filamentous fungi were isolated and identified in ProcessedAconitumCarmichnaelisamples.The bacteria includedKlebsiellaspp.，Escherichiacoli，Arthrobacterspp.，Bacilluscereus，Bacilluspumilus，Lysinibacillusfusiformis，Bergeyellasp.Empedobacterbrevis，Corynebacteriumsp，Salinicoccushispanicus，Bacillusmeqateriumpartial，Weissellacibaria，Lactobacillusplantarum，LactococcusIactis.The yeasts includedCorynebacteriumbovis，Rhodotorulamucilaginosa，Clavisporalusitaniae，Candidatropicalis，Pichiakluyveri，Trichosporonspp.，Galactomycesgeotrichum，Geotrichumspp.，Pichiabarkeri，Candidaathensensisspp.，Geotrichumcandidum，and the fungi arePenicilliumchrysogenumandMucorcircinelloides.Conclusion：Many species of microorganisms exist in ProcessedAconitumCarmichnaelisamples during its processing，which help to reconstruct modern fermentation technology of ProcessedAconitumCarmichnaeli.

ProcessedAconitumCarmichnaeli；fermentation；microorganism；isolation；identification

“十二五”重大新藥專項(xiàng)(2014ZX09201001-005-001)；國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥行業(yè)專項(xiàng) (201507004)

] 胡海峰，研究員，研究方向：微生物藥物研究與開發(fā)；Tel：(021) 62892873，E-mail：haifenghu88@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.5.012

2016-09-22)

*[