陳興壯，紀(jì)海容

（海南省三亞市中醫(yī)院 檢驗科，海南 三亞 572000）

白細(xì)胞介素17單核苷酸多態(tài)性及血漿水平與慢性丙型肝炎感染的相關(guān)性研究

陳興壯，紀(jì)海容

（海南省三亞市中醫(yī)院 檢驗科，海南 三亞 572000）

目的探討白細(xì)胞介素17（IL-17）單核苷酸多態(tài)性及血漿水平與慢性丙型肝炎感染的相關(guān)性。方法將200例慢性丙型肝炎患者作為觀察組，150例體檢健康者作為對照組。采用TaqMan檢測系統(tǒng)提取檢測IL-17 SNPS基因組DNA；采用Elisa檢測法測定IL-17水平。對比兩組研究對象IL-17 rs8193036及rs2275913位點等位基因及基因型分布；對比兩組研究對象IL-17多態(tài)性與HCV基因型的關(guān)系；對比兩組研究對象IL-17水平。結(jié)果觀察組IL-17 rs8193036位點等位基因C、T分布，IL-17 rs2275913位點等位基因A、G分布多于對照組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。觀察組IL-17 rs8193036位點CC、CT及TT基因型分布，RS2275913基因型AA、AG及GG分布多于對照組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。觀察組患者IL-17水平（98.73±28.65）高于對照組（70.27±18.53），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論IL-17水平的升高可能是慢性丙型肝炎感染的因素之一。

白細(xì)胞介素17；血漿水平；慢性丙型肝炎

慢性丙型肝炎（chronic hepatiits C，CHC）是一種由丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）引起的疾病，該病具有傳染性和易于發(fā)展為慢性疾病的特點[1]。據(jù)2011年世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，該病在全世界的患者總數(shù)高達1.3億～1.7億人，且該病每年的病死人數(shù)超過3 500萬人[2]。目前，慢性丙型肝炎的研究機制探討尚不清楚。就現(xiàn)存研究范圍來講，對該病的機制研究主要集中在白細(xì)胞介素28B（IL-28B）上，對白細(xì)胞介素 17（Interleukin-17，IL-17）與該病關(guān)系的報道較少。米寅等[3]在對IL-28B基因多態(tài)性與丙型肝炎易感性的關(guān)系中指出，中國人群IL-28B rs8099917的基因多態(tài)性在一定程度上影響著丙型肝炎的發(fā)生。叢瑞等[4]在研究中指出，IL-28B對我國丙型肝炎患者的自發(fā)清除影響不顯著。與此同時，南月敏等[5]在研究中指出，目前關(guān)于IL-17與CHC患者感染的機制研究十分不清楚。因此本研究旨在探索IL-17單核苷酸多態(tài)性及血漿水平與CHC感染的相關(guān)性，為日后CHC機制探索提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取海南省三亞市中醫(yī)院2012年4月-2016年4月收治的CHC患者200例作為觀察組。其中，男性121例，女性79例，年齡21～82歲，平均（36.2±0.7）歲。同時選取150例體檢健康者作為對照組。其中，男性78例，女性72例，年齡23～76歲，平均（34.5±1.2）歲。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

所有患者符合①②③中的1項，且同時符合④⑤項。①感染CHC病毒超過6個月；②發(fā)病時間不明確，既往無肝炎病史，但通過肝組織病理檢查確定為慢性肝炎者；③患者癥狀體征及實驗室檢查、影像學(xué)檢查結(jié)果可確診為丙型肝炎患者；④所有患者血清抗HCV抗體及HCV-RNA檢測結(jié)果顯示為陽性，且HCV RNA定量檢測不超過15 IU/ml；⑤所有患者均未接受過干擾素聯(lián)合抗病毒藥物治療[6]。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

①患者合并其他類型肝炎者；②患者合并人類免疫缺陷病毒感染；③患者同時伴有惡性腫瘤等嚴(yán)重疾病者；④患者伴有嚴(yán)重心腦系統(tǒng)疾病及其他血液系統(tǒng)疾病者；⑤患者伴有精神意識障礙者；⑥患者為妊娠期或哺乳期婦女。

1.4 試劑來源及各指標(biāo)檢測方法

抗 HCV抗體、HCV RNA、HCV基因型、IL-17 SNPS檢測及IL-17水平測定：抗HCV（上海生物工程技術(shù)有限公司），酶聯(lián)免疫吸附法（Elisa）；HCV RNA（上海羅氏診斷有限公司），COBAS TaqMan系統(tǒng)；IL-17 SNPS基因組DNA定量分析（美國Thermo公司），NanoDrop 2 000C紫外分光光度儀；IL-17 SNPS檢測提取基因組DNA（美國Applied Biosystems公司），TaqMan檢測系統(tǒng)；IL-17水平測定（美國RapidBiocab公司），Elisa。

以上所有指標(biāo)檢測完全按照產(chǎn)品說明書進行操作。HCV基因分型參照高英堂等[7]在HCV基因分型芯片的研制和臨床應(yīng)用中的HCV基因分型芯片技術(shù)檢測。

1.5 觀察指標(biāo)

對比兩組研究對象IL-17rs8193036及rs2275913位點等位基因及基因型分布；對比兩組研究對象IL-17多態(tài)性與HCV基因型的關(guān)系；對比兩組研究對象IL-17水平。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

均采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以頻數(shù)（構(gòu)成比）表示，組間比較使用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象I L-17等位基因分布

觀察組IL-17 rs8193036位點等位基因C、T分布，IL-17 rs2275913位點等位基因A、G分布多于對照組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

2.2 兩組研究對象I L-17基因型分布

觀察組IL-17 rs8193036位點CC、CT及TT基因型分布，rs2275913基因型AA、AG及GG分布多于對照組，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

2.3 I L-17多態(tài)性與H C V基因型的關(guān)系

觀察組200例患者全部進行HCV基因型檢測。其中HCV基因I型290例、II型102例、III型4例、IV型4例。HCV基因I型IL-17 rs8193036 T位點及rs2275913 A位點基因分布多于II型，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。HCV基因I型IL-17 rs8193036 C位點及rs2275913 G位點基因分布少于II型，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（見表3）。HCV基因I型IL-17 rs8193036 CC、CT分布及rs2275913 AA分布少于II型，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。HCV基因I型IL-17 rs8193036 TT分布及rs2275913AG、GG分布多于II型，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表4。

表2 兩組研究對象I L-17基因型分布 例

表3 觀察組I L-17等位基因分布與H C V基因型的關(guān)系例（%）

表4 觀察組I L-17基因型分布與H C V基因型的關(guān)系 例（%）

2.4 兩組的I L-17水平比較

觀察組IL-17水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。見表5。

表5 兩組I L-17水平比較 （±s）

表5 兩組I L-17水平比較 （±s）

組別IL-17水平觀察組（n=200） 98.73±28.65對照組（n=150） 70.27±18.53 t值 10.613 P值 0.000

3 討論

CHC是指由不同病因所引起的肝臟壞死和炎癥，其病程一般均超過6個月[8]。該病的主要發(fā)生原因為HCV感染、嗜酒及長期服用肝毒性藥物。CHC的發(fā)展過程呈波動型或持續(xù)進行型[9]。若治療不當(dāng)往往可導(dǎo)致肝硬化和肝細(xì)胞癌的發(fā)生。HCV侵襲人體后所發(fā)生的反應(yīng)機制比較復(fù)雜，根據(jù)目前研究報道認(rèn)為丙型肝炎的發(fā)生機制與細(xì)胞免疫功能異常有關(guān)[10]。

本研究在探討IL-17 rs8193036及rs2275913位點等位基因中發(fā)現(xiàn)，觀察組IL-17 rs8193036位點等位基因C、T分布及rs2275913位點等位基因A、G分布與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。同時在IL-17基因型分布比較中得出：觀察組患者IL-17 rs8193036位點CC、CT及TT基因型分布，rs2275913基因型AA、AG及GG分布與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。這表明IL-17 SNPS與CHC感染無關(guān)。在IL-17多態(tài)性與HCV基因型關(guān)系的探討中得出，HCV基因 I型 IL-17rs8193036C、T位點及rs2275913 A、G位點基因分布與II型差異無統(tǒng)計學(xué)意義，HCV 基因 I型 IL-17 rs8193036 CC、CT、TT 分布及rs2275913 AA、AG、GG分布與II型無差異。這表明IL-17多態(tài)性與HAV基因型無關(guān)。以上全部結(jié)果可能受到所選觀察對象種族及例數(shù)偏差的影響。該試驗所選觀察對象均為黃種人，并不具有全球人群代表性。同時在樣本例數(shù)的確定上受到病源獲取及病源配合的限制，未達到大樣本試驗。因此該部分的結(jié)論尚需進一步加以確定。在對比兩組研究對象血漿IL-17水平中得出，CHC患者的IL-17水平高于健康人群組成的對照組。這表明IL-17水平升高可能是感染HCV的重要原因之一。IL-17通過調(diào)節(jié)人體固有免疫能力及獲得性免疫反應(yīng)作用于肝臟疾病的進展過程中[11-13]。IL-17的細(xì)胞因子對人體的作用具有雙重性。當(dāng)機體處于急性炎癥狀態(tài)時，IL-17可迅速分泌，進而與外來危害物質(zhì)形成對抗，保護機體不受外源有害物質(zhì)危害。但是當(dāng)機體處于其他原因而導(dǎo)致慢性炎癥發(fā)生時，IL-17又會參與到慢性疾病的發(fā)展過程中，從而與機體免疫保護功能形成對抗[14]。同時，HCV侵襲人體的過程中往往導(dǎo)致CHC的發(fā)生[15]。因此IL-17可能是CHC病毒感染的因素之一。

綜上所述，IL-17水平的升高可能是機體CHC感染的因素之一。但其單核苷酸多態(tài)性對CHC患者的影響無明確關(guān)系，需進一步進行研究。

[1]許敏,施海燕,蔡衛(wèi)平,等.丙型病毒性肝炎患者流行及治療現(xiàn)狀調(diào)查[J].中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志,2011,25(2):135-136.

[2]Word Health Organization.Avilable from:http://www.Who.Int/mediacentre/factsheets/fs164/zh/.index.html.

[3]米寅,高英堂,焦曉磊,等.IL-28B基因多態(tài)性與丙型肝炎易感性的關(guān)系[J].世界華人消化雜志,2013,21(2):182-187.

[4]叢瑞,佟小非,劉三都,等.白細(xì)胞介素28B(IL-28B)基因多態(tài)性與丙型肝炎病毒(HCV)感染者自發(fā)清除的相關(guān)性[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2012,33(3):326-329.

[5]南月敏,張玉果,孔令波,等.白細(xì)胞介素17基因多態(tài)性及血漿水平與慢性丙型肝炎病毒感染的關(guān)系[J].中華肝臟病雜志,2013,21(6):425-428.

[6]中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會,中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會.丙型肝炎防治指南[J].中華肝臟病雜志,2004,12(4):194-198.

[7]高英堂,陳瑞陽,宋文芹,等.丙型肝炎病毒基因分型芯片的研制和臨床應(yīng)用[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2004,27(10):690-693.

[8]穆彩琴,胡蕾蘋,張璐,等.慢性丙型病毒性肝炎抗病毒治療研究進展[J].中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志,2013,27(4):310-313.

[9]趙青春,陳虹,范鐵艷,等.肝移植后丙型病毒性肝炎復(fù)發(fā)與防治的進展[J].中華器官移植雜志,2014,35(2):124-127.

[10]米寅,高英堂,杜智,等.IL-28B基因多態(tài)性與丙型肝炎相關(guān)性研究進展[J].國際遺傳學(xué)雜志,2012,35(4):224-228.

[11]CHANG Q,WANG Y K,ZHAO Q,et al.Th17 cells are increased with severity of liverin flammation in patientswith chronic hepatitis C[J].Journal of Gastroenterology and Hepatology,2012,27(2):273-278.

[12]佟小非,尤紅.IL-28B基因多態(tài)性對干擾素治療丙型病毒性肝炎應(yīng)答的影響[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2012,33(3):334-337.

[13]KIM E S,KIM S W,MOON C N,et al.Interactions between IL17A,IL23R,and STAT4 polymorphisms confer susceptibility to intestinal Bechcet's disease in Korean population[J].Life Sciences,2012,90(19):740-746.

[14]陳顯,黃成垠,朱紹汶,等.丙型病毒性肝炎的基因分型方法及臨床意義[J].臨床輸血與檢驗,2012,14(1):89-92.

[15]楊建軍,李朝霞,田淑菊,等.慢性丙型病毒性肝炎患者自身抗體動態(tài)變化與HCV-RNA基因型關(guān)系研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(24):2960-2962.

（張西倩 編輯）

Correlations of IL-17 single nucleotide polymorphisms and plasma level with chronic hepatitis C infection

Xing-zhuang Chen,Hai-rong Ji
(Clinical Laboratory,Sanya Hospital of Traditional Chinese Medicine,Sanya,Hainan 572000,China)

ObjectiveTo investigate the association between interleukin-17 single nucleotide polymorphisms(SNPs)and plasma levels and chronic hepatitis C infection.MethodsIn this study,200 patients of chronic hepatitis C were included in observation group,150 cases of healthy subjects were enrolled into control group.TaqMan detection system was used to extract genomic DNA for detection of IL-17 SNPs.ELISA was applied to detect IL-17 level.The IL-17 level was compared between the two groups.The alleles and genotype distribution of IL-17 rs8193036 and rs2275913 loci were compared between the two groups.The relationships of IL-17 polymorphisms with the HCV genotypes were analyzed in the two groups.ResultsThe distribution of alleles C and T of rs8193036 locus and alleles A and G of rs2275913 locus inIL-17gene in the observation group was more than that in the control group,but the differences were not statistically significant(P＞0.05).The distribution of CC,CT and TT genotypes of rs8193036 locus and AA,AG and GG genotypes of rs2275913 locus ofIL-17gene in the observation group was more than that in the control group with significant differences(P＞0.05).The level of IL-17 in the observation group(98.73± 28.65)was higher than that in the control group(70.27±18.53),the difference was statistically significant(P＜0.05).ConclusionsElevated IL-17 level may be one of the factors of chronic hepatitis C infection.

IL-17;plasma level;chronic C hepatitis

R512.63

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.13.014

1005-8982（2017）13-0070-04

2016-12-08