唐貞力

（大理大學第八附屬醫(yī)院，云南臨滄677000）

排毒尪痹湯對類風濕性關節(jié)炎患者T細胞亞群的影響

唐貞力

（大理大學第八附屬醫(yī)院，云南臨滄677000）

目的：觀察排毒尪痹湯對類風濕性關節(jié)炎（RA）患者外周血T淋巴細胞亞群的影響，從細胞免疫方面探討本方藥的療效機制。方法：使用隨機且平行對照的方法，按隨機數字表法將200例門診及住院患者分為兩組。對照組100例，吲哚美辛腸溶片25 mg∕次，1次∕d，甲氨蝶呤片7.5 mg∕次，1次∕周；治療組100例，排毒尪痹湯煎服200 mL∕次，2次∕d。連續(xù)治療4周為1療程，兩個療程后，于治療前和治療后分別檢測CD4+，CD8+細胞，計算CD4+∕CD8+值。結果：治療前兩組CD4+、CD8+、CD4+∕CD8+值比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。治療后，兩組較治療前，CD4+細胞均下降，CD8+細胞均升高，CD4+∕CD8+比值均降低；且兩組治療后各指標組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論：RA患者體內存在著細胞免疫功能紊亂，排毒尪痹湯能調節(jié)T細胞分布，使機體趨向免疫穩(wěn)定狀態(tài)，具有類似MTX聯合用藥的免疫抑制效應。

類風濕性關節(jié)炎；排毒尪痹湯；T淋巴細胞亞群

類風濕關節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一種病因復雜的自身免疫性疾病，目前其發(fā)病機制尚不十分清楚，臨床以多關節(jié)慢性炎癥為主要表現。研究發(fā)現，調節(jié)性T細胞免疫功能紊亂，細胞異?；罨图毎麃喨旱钠胶馐Э孛芮邢嚓P是其主要發(fā)病機制之一，且這種調節(jié)細胞主要存在于CD4+、CD8+淋巴細胞亞群中〔1-2〕。本院結合當地少數民族的佤醫(yī)佤藥獨特的治療特色，并通過十余年的臨床使用心得，篩選優(yōu)化組方配伍，最終總結出排毒尪痹湯。并運用該方治療類風濕性關節(jié)炎100例，取得較好療效。本研究通過檢測RA患者外周血T淋巴細胞亞群的CD4+、CD8+細胞變化以及排毒尪痹湯對其影響，從細胞免疫方面探索本方藥治療類風濕性關節(jié)炎的部分作用機制。

1 材料與方法

1.1 研究設計及隨機分組方法采用隨機平行對照方法，將臨滄市人民醫(yī)院中醫(yī)科門診及住院符合條件的RA患者200例，按照隨機數字表方法，分為兩組，兩組在性別、年齡、病程、關節(jié)功能比較等方面差異無統(tǒng)計學意義。

1.2 納入標準（1）年齡在15～70周歲之間。（2）均為活動性RA患者，符合美國風濕病協會類風濕關節(jié)炎1987年修訂標準?；顒有訰A診斷標準為〔3〕（需具備以下5項中4項）：①晨僵≥1 h。②休息時有中等程度疼痛。③關節(jié)腫脹≥3個。④關節(jié)壓痛≥5個。⑤ESR≥30 mm∕h。（3）中醫(yī)辨證屬于“風寒濕型”標準。（4）受試者知情，自愿簽署知情同意書。

1.3 排除標準①伴有可能影響效應指標觀測、判斷的其他生理或病理狀況。②合并其他免疫系統(tǒng)疾病。③除規(guī)定用藥外，長期服用治療本病的西藥或其他藥物近3周未停服者。④特征人群：孕婦、哺乳期、精神病、病情危篤或疾病晚期。⑤嚴重心、肝、腎損害影響藥物代謝。

1.4 退出標準①違反試驗方案。②發(fā)生嚴重不良事件、并發(fā)癥，難以繼續(xù)治療。③資料不全無法判定療效、安全性。④不符合納入條件，納入錯誤或未按規(guī)定服藥無法判定療效。

1.5 診斷標準

1.5.1西醫(yī)診斷參照美國風濕病學會（ARA）1987年對RA活動期的診斷標準〔2〕。

1.5.2中醫(yī)診斷參照衛(wèi)生部2002年《中藥新藥臨床研究指導原則》標準〔3〕。

1.6 治療方法4周為1療程，連續(xù)兩個療程。

1.6.1對照組吲哚美辛腸溶片（山西云鵬藥業(yè)有限公司，國藥準字H14020771）25 mg，1次∕d；甲氨蝶呤片（上海信誼藥廠有限公司，國藥準字H31020644）7.5 mg，1次∕周。

1.6.2治療組排毒尪痹湯，200 mL，2次∕d。處方組成：娘母良10 g，火把花根（先煎）10 g，小銅錘5 g，秦艽15 g，威靈仙20 g，黃芪50 g，桂枝15 g，白術20 g，茯苓20 g，淫羊藿25 g，枸杞子25 g，川斷30 g，牛膝15 g，紅花10 g，雞血藤30 g，甘草6 g。將火把花根用開水先煎2 h，再放入其他藥物煎1 h，取汁200 mL，煎煮2次，共400 mL，早、晚2次飯后分服。以上藥物均來源臨滄市人民醫(yī)院，并由中醫(yī)科統(tǒng)一煎制。

1.7 實驗材料其鼠抗人CD4，CD8單抗及生物素-兔抗鼠IgG，鏈霉親和素-HRP等試劑（北京宜安泰醫(yī)療技術開發(fā)有限公司）。

1.8 實驗方法采用免疫組化S.P法（生物素-鏈霉親和素-過氧化酶連接法，Biotin-Streptanidin-Per?oxidase）。具體步驟如下：①標本制備：抽取受試者靜脈血3～4 mL，加入肝素25 U∕mL，經離心后分離淋巴細胞，PBS洗滌3次，使每微升細胞數約2 000個，涂片，干燥。②標本染色：分別加抗T細胞亞群單克隆抗體10 μL，置濕盒中，30 min，37℃，PBSTween20淋洗4次，擦干。加（生物素-兔抗鼠IgG）10 μL，PBS洗滌同上。加（鏈霉親和素-HRP）10 μL，PBS洗滌。在1 mL蒸餾水中加入底物1，2，3各1滴（約50 μL）混勻備用。擦干涂片圈外水份，加1滴底物混合液（約30～50 μL），37℃，5～15 min，顯微鏡下觀察，待細胞膜被明顯染成紅色，用蒸餾水中止顯色，加復染液1滴，作用約1～3 min后PBS沖洗。③計數：高倍顯微鏡下計算每200個單核細胞中陽性染色細胞所占的百分比。

1.9 統(tǒng)計分析采用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料用表示，組內比較用t檢驗，組間比較用單因素方差分析。

2 結果

兩組患者治療后與治療前比較，CD4+細胞均下降（P＜0.05），CD8+細胞明顯升高（P＜0.01），但兩組治療后CD4+、CD8+、CD4+∕CD8+比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組治療前后T細胞亞群測定值比較

表1 兩組治療前后T細胞亞群測定值比較

注：與本組治療前比較*P＜0.05，**P＜0.05；與對照組治療后比較△P＞0.05。

3 討論

RA是一種系統(tǒng)性、復雜的、慢性、炎性的自身免疫性疾病，抗原多肽通過抗原提呈細胞激活T細胞是其特征性病理變化，T細胞激活后產生細胞因子，并聚集其他炎癥細胞（包括其他T細胞和巨噬細胞，產生更多細胞因子，大量巨噬細胞被激活并且釋放了白細胞介素-1（IL-1）和腫瘤壞死因子（TNF），致使軟骨細胞和滑膜細胞釋出細胞毒素，造成關節(jié)及其周圍正常細胞和組織損傷，滑膜增生，骨和軟骨受損。RA主要發(fā)病機制是T細胞介導的免疫反應異常，成熟的T細胞按其免疫效應功能，可分為CD4+輔助性T細胞（CD4+T細胞），CD8+殺傷性T細胞（CD8+或CTL細胞）和CD4+-CD25+調節(jié)性T細胞（Tr細胞）〔4〕。研究表明，與正常人比較，RA患者外周血中CD3+、CD4+淋巴細胞顯著降低，CD4+∕CD8+比值降低〔5〕。

類風濕性關節(jié)炎臨床特征與“歷節(jié)病”“白虎歷節(jié)病”較為相似，統(tǒng)屬中醫(yī)“痹證”范疇。中醫(yī)對類風濕性關節(jié)炎病因病機的認識，經過長期臨床實踐和理論探討，目前比較傾向于外邪、正虛、瘀血3個方面。風、濕、寒、熱等閉阻經絡，氣血運行不暢，經脈失養(yǎng)，肢體關節(jié)、肌肉、筋骨等處，從而發(fā)生疼痛、重著、酸楚，麻木、甚至關節(jié)變形、腫大、僵硬、屈伸不利。筆者采用排毒尪痹湯，全方祛風散寒、利濕通絡、解毒消腫、活血化瘀、補腎益氣、扶正固本。方中君藥火把花根有祛風除濕、舒筋活絡、清熱解毒等功效，有效成分為生物堿、萜類、內酯、酚酸類等，具有明顯抑制病理性免疫反應和抗炎鎮(zhèn)痛作用。小銅錘又稱“小麻藥”，《云南中草藥選》：“止痛，活血化瘀。主治骨折，跌打損傷，風濕關節(jié)痛，閉經，胃寒痛”。娘母良被佤族稱作“娘三端”，學名為塊根木蘭，其味辛甘苦，歸心、肺、腎、肝諸經。具有補腎助陽、養(yǎng)心安神、祛痰解痙的功效。秦艽、威靈仙祛風濕、舒經絡，止痹痛。再以黃芪、桂枝、白術、茯苓補氣通陽，健脾祛濕，據現代藥理研究，黃芪對免疫功能異常有雙向調節(jié)作用；再以枸杞滋補肝腎；淫羊藿補腎壯陽、祛風除濕；川斷補肝腎、續(xù)筋骨、行血脈；紅花、牛膝、雞血藤活血祛瘀、補肝腎、強筋骨；甘草補脾益氣、緩急止痛、緩和藥性。全方共奏祛風散寒、利濕活血、補虛之功。前期研究表明，該方治療類風濕性關節(jié)炎安全有效〔6〕。

本實驗檢測了排毒尪痹湯對RA病人T細胞亞群的影響，發(fā)現經排毒尪痹湯治療后，CD4+細胞較治前明顯減少，CD8+細胞較治前明顯增多，CD4+∕CD8+值明顯下降。結果表明排毒尪痹湯對RA患者T細胞亞群比例紊亂有調節(jié)作用，推測對T細胞免疫調節(jié)為排毒尪痹湯抗類風濕性關節(jié)炎的機制之一。

〔1〕郭寧茹.類風濕關節(jié)炎淋巴細胞亞群的臨床研究〔J〕.臨床合理用藥，2015，9（3）：130-131.

〔2〕董麗娜.類風濕性關節(jié)炎患者外周血T淋巴細胞亞群變化的臨床意義〔J〕.河北醫(yī)學，2011，17（11）：1444-1447.

〔3〕鄭筱英.中藥新藥臨床研究指導原則〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.

〔4〕HAGGQVIST B，HULTMAN P.Efects of deviating the re?sponse in murine mercury induced autoimmunity towards a Th1 response〔J〕.Clin Exp Immunol，2003，134（2）：202-209.

〔5〕梅序橋，吳阿陽，鄭燕蘋，等.類風濕關節(jié)炎患者外周血T淋巴細胞亞群CD4+∕CD8+表達的意義〔J〕.檢驗醫(yī)學與臨床，2015，12（21）：3144-3149.

〔6〕唐貞力.排毒尪痹湯治療類風濕性關節(jié)炎活動期隨機平行對照研究〔J〕.云南中醫(yī)藥雜志，2016，6（3）：27-28.

Effects of Wang-bi Detoxification Herbal Medication on T-lymphocyte Subgroups of Patients with Rheumatoid Arthritis

Tang Zhenli
（The Eighth Affiliated Hospital of Dali University,Lincang,Yunnan 677000,China）

Objective：To observe effects of Wang-bi detoxification herbal medication on T-lymphocyte subgroups of patients with Rheumatoid Arthritis,and to explore the mechanism of it efficacy.Methods：A comparative study was conducted among 200 patients including inpatients and outpatients who were divided into two groups randomly.100 patients in the control group took Indometacin Enteric-coated Tablets with 25 mg every time and once a day,and Methotrexate Tablets with 7.5 mg every time and once a week,while 100 patients in the treatment group took Wang-bi detoxification herbal medication with 200 mL each time and twice a day.After two courses of eight weeks,we compared CD4+and CD8+of the two groups before and after the treatment.Results：There was no significant difference with regard to the comparison of CD4+and CD8+of each group before the treatment（P＞0.05）.However,after the treatment both of the groups had a lower CD4+and a higher CD8 and a lower ratio of CD4+to CD8+.Comparison between the two groups also showed no significant difference（P＞0.05）.Conclusion：Patients with RA has an autoimmune disorder.Wang-bi detoxification herbal medication can help the distribution of their T-lymphocyte subsets and help them keep a stable immune system, and can have a similar immunosuppressive effect as that produced by the therapy of MTX in combination with other medicines.

rheumatoid arthritis;Wang-bi detoxification herbal medication;T-lymphocyte subgroups

R593.22

B

2096-2266（2017）08-0053-03

10.3969∕j.issn.2096-2266.2017.08.013

（責任編輯 董杰）

2016-10-24

唐貞力，主任醫(yī)師，主要從事中醫(yī)類風濕性關節(jié)炎病研究.