于偉東

顯微鏡直接計(jì)數(shù)法在人教版必修3《穩(wěn)態(tài)與環(huán)境》的“培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量變化”探究實(shí)驗(yàn)中有提及，但是關(guān)于如何計(jì)數(shù)與操作，教材并未做具體說(shuō)明，如果教師不進(jìn)行適當(dāng)?shù)难a(bǔ)充，學(xué)生在學(xué)習(xí)時(shí)必然要受到困擾，學(xué)習(xí)效果將大打折扣?，F(xiàn)將有關(guān)知識(shí)做以下簡(jiǎn)要補(bǔ)充。

1實(shí)驗(yàn)原理

用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母菌，種群的增長(zhǎng)受培養(yǎng)液的成分、空氣、pH、溫度等因素的影響。在理想的無(wú)限環(huán)境中，酵母菌種群呈“J”型增長(zhǎng)；自然界中資源和空間總是有限的，酵母菌種群呈“S”型增長(zhǎng)。計(jì)算酵母菌數(shù)量可用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。

2實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)步驟見(jiàn)圖1。

圖1實(shí)驗(yàn)步驟3計(jì)數(shù)方法和工具

計(jì)數(shù)方法為顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)工具為血球計(jì)數(shù)板。

4血球計(jì)數(shù)板使用方法簡(jiǎn)介

血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由4條槽構(gòu)成3個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短槽隔成兩半，每1邊的平臺(tái)上各自刻有1個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為9個(gè)大格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造如圖2所示。計(jì)數(shù)室的刻度一般有2種規(guī)格，一種是1個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格；另一種是1個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，但無(wú)論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)，如圖3所示。每1個(gè)大方格邊長(zhǎng)為1 mm，則每1個(gè)大方格的面積為1 mm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.1 mm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.1 mm3。計(jì)數(shù)時(shí)，如果是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，通常數(shù)5個(gè)中方格的總菌數(shù)，即共80個(gè)小格；如果是大方格分成16個(gè)中方格，通常數(shù)4個(gè)中方格的總菌數(shù)，即共100個(gè)小格，如圖4所示。然后求得每個(gè)小方格的平均數(shù)，再乘上400，就得出1個(gè)大方格中的總菌數(shù)，再換算成1 mL菌液中的總菌數(shù)。

1-血球計(jì)數(shù)板；2-蓋玻片；3-計(jì)數(shù)室。

圖2血球計(jì)數(shù)板構(gòu)造（一）圖3血球計(jì)數(shù)板構(gòu)造（二）設(shè)中方格內(nèi)總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則1 mL菌液的總菌數(shù)為：A÷80×400×104×B；如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則1 mL菌液的總菌數(shù)為：A÷100×400×104×B。

圖4兩種規(guī)格的血球計(jì)數(shù)板

5跟蹤訓(xùn)練

某生物興趣小組開(kāi)展探究實(shí)驗(yàn)，課題是“探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量與時(shí)間的變化關(guān)系”。實(shí)驗(yàn)材料和用具：菌種和無(wú)菌培養(yǎng)液、試管、血球計(jì)數(shù)板、滴管、顯微鏡等。實(shí)驗(yàn)步驟：將含有酵母菌的培養(yǎng)液滴在計(jì)數(shù)板上，計(jì)數(shù)1個(gè)小方格內(nèi)的酵母菌數(shù)量，再以此為根據(jù)，估算試管中酵母菌總數(shù)。連續(xù)觀察7天，并記錄每天的數(shù)值。根據(jù)以上敘述回答下列問(wèn)題：

（1）根據(jù)所學(xué)知識(shí)，該課題的實(shí)驗(yàn)假設(shè)是：開(kāi)始一段時(shí)間，酵母菌呈“J”型增長(zhǎng)，隨著時(shí)間的推移，由于，酵母菌呈“S”型增長(zhǎng)。

（2）本實(shí)驗(yàn)沒(méi)有另設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，原因是。該實(shí)驗(yàn)是否需要重復(fù)實(shí)驗(yàn)？（填“是”或“否”）。

（3）在吸取培養(yǎng)液計(jì)數(shù)前，要輕輕振蕩幾次試管，目的是。如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過(guò)多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)采取的措施是。

（4）利用血球計(jì)數(shù)板可在顯微鏡下對(duì)酵母菌進(jìn)行直接計(jì)數(shù)。每個(gè)計(jì)數(shù)室由400（25×16）個(gè)小室組成，容納液體的總體積為0.1 mm3?，F(xiàn)將1 mL酵母菌樣品中加入99 mL無(wú)菌水稀釋，用無(wú)菌吸管吸取少許樣品滴在蓋玻片邊緣，使其自行滲入計(jì)數(shù)室，并用濾紙吸去多余菌液，如圖5所示。

圖5計(jì)數(shù)室放大圖現(xiàn)觀察到圖中該計(jì)數(shù)室所示a、b、c、d、e 5個(gè)中方格80個(gè)小室內(nèi)共有酵母菌44個(gè)，則上述1 mL酵母菌樣品中約有酵母菌個(gè)。為獲得較為準(zhǔn)確的數(shù)值，減少誤差，你認(rèn)為應(yīng)采取的做法是。

參考答案：（1）環(huán)境資源和空間有限。（2）該實(shí)驗(yàn)在時(shí)間上形成前后自身對(duì)照。（3）使酵母菌分布均勻；稀釋菌液。（4）44÷80×400×100×100 00=2.2×108；多取樣、取平均值。endprint