岳靈萍

213000常州市第四人民醫(yī)院病理科

不同固定劑對冰凍切片免疫組化結(jié)果的影響

岳靈萍

213000常州市第四人民醫(yī)院病理科

目的：探討不同固定劑對冰凍切片免疫組化結(jié)果的影響。方法：選擇從手術(shù)室送檢的被檢測抗體能表達的正常組織或腫瘤冰凍切片標本6例，分別為常見的組織或腫瘤6種，置于6種不同冰凍固定液，分別對6種固定劑制作完成的冰凍切片的免疫組化染色效果進行評價。結(jié)果：EAF固定劑與丙酮固定劑、EAF固定劑與AAF固定劑、EAF固定劑與95%酒精固定劑，以及甲醇固定劑與丙酮固定劑之間對冰凍切片免疫組化染色結(jié)果的影響，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；EAF固定劑的冰凍切片免疫組化染色效果優(yōu)于其他固定劑，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結(jié)論：使用EAF固定劑進行冰凍切片制作，可獲得最佳的免疫組化染色效果。

固定劑；冰凍切片；免疫組化

積極探討不同固定劑對冰凍切片免疫組化染色結(jié)果的影響，規(guī)避不利因素，從而促使冰凍切片免疫組化染色質(zhì)量的不斷提升，具有重要的意義。筆者以下就對這一問題進行了研究。

資料與方法

選取從我院手術(shù)室送檢的被檢測抗體能表達的正常組織或腫瘤冰凍切片標本6例，6例冰凍切片標本分別是子宮內(nèi)膜癌切除標本、子宮肌瘤切除標本、乳癌清掃淋巴結(jié)標本、乳腺癌切除標本、胃癌根治術(shù)下切緣標本及甲狀腺腫塊切除標本各1例。

研究方法：6種冰凍切片分別置于6種不同冰凍固定液，分別為95%酒精、4%甲醛、甲醇、丙酮、EAF(成分：冰醋酸5 mL+無水乙醇85 mL+濃度40%的甲醛10 mL)、AAF（成分：冰醋酸5 mL+丙酮85 mL+濃度為40%的甲醛10 mL)，固定5 min，根據(jù)組織含有的特定抗原進行相應(yīng)抗體的免疫組化染色，對6種固定劑制作完成的冰凍切片的免疫組化染色效果進行評價，以此來分析6種固定劑對冰凍切片免疫組化染色效果的影響[1]。

免疫組化染色結(jié)果評價標準：按照中國病理學工作者委員會免疫組化質(zhì)控中心推薦的免疫組化質(zhì)控評分標準進行?？荚u項目有陽性信號的定位、信號的強度和分布、交叉反應(yīng)，背景著色及復染。結(jié)果分4個等級，①優(yōu)：免疫組化染色效果很理想，或者接近理想水平，即陽性信號很強，定位準確，分布恰當，沒有交叉反應(yīng)和背景著色；②良：免疫組化染色良好，但是有些背景著色；③中：免疫組化染色普遍較弱，偶見假陰性或假陽性；④差：免疫組化染色非常弱，可見假陰性或假陽性[2]。4個等級分別對應(yīng)的分數(shù)為4、3、2、1[3]。

統(tǒng)計學方法：本試驗采取統(tǒng)計學軟件SPSS 19.0進行統(tǒng)計分析，其中計數(shù)資料用率(%)表示，用χ2檢驗；計量資料采取(±s)表示，用t檢驗，檢驗水平為α=0.05。

結(jié) 果

95%酒精、4%甲醛、甲醇等固定劑對冰凍切片免疫組化染色結(jié)果的影響，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；EAF固定劑與丙酮固定劑、EAF固定劑與AAF固定劑、EAF固定劑與95%酒精固定劑，以及甲醇固定劑與丙酮固定劑之間對冰凍切片免疫組化染色結(jié)果的影響，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；EAF固定劑的冰凍切片免疫組化染色效果優(yōu)于其他固定劑，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

討 論

EAF固定劑中，無水乙醇雖然具備固定、脫水的雙重作用，但脫水作用更突出，易引起組織和細胞發(fā)生皺縮；甲醛雖然具備良好的固定作用，但是存在固定速度緩慢的問題；冰醋酸具備助染，能夠使組織、細胞發(fā)生輕度膨脹的作用[4]。因此，單獨使用以上任何1種試劑都達不到良好的固定效果，很難獲得理想的免疫組化染色效果。而將這3種試劑以合理的配比方式進行組合配制，即可獲得最佳的效果，其中的冰醋酸與甲醛配合，即可解決甲醛固定速度慢的問題；而冰醋酸與無水乙醇配合，則能夠解決無水乙醇對組織、細胞產(chǎn)生的皺縮作用[5]。因此，使用EAF固定劑進行冰凍切片制作，可獲得最佳的免疫組化染色效果。

表1 不同固定劑對冰凍切片免疫組化染色結(jié)果的影響分析

[1]萬鴻飛,周全,張盛忠,等.固定時間對不同組織染色的影響[J].診斷病理學雜志,2011,18(6)：476.

[2]徐云生,倪開志.6種固定液短時間固定對冰凍切片制片效果影響[J].中國實用醫(yī)藥,2011,6(35)：47-48.

[3]梁英杰.免疫組織化學技術(shù)制片的規(guī)范和質(zhì)量控制[J].中國組織化學與細胞化學雜志,2004,13(2)：262-264.

[4]周會芹,楊江輝,余琦,等.不同組織固定液對免疫組化結(jié)果的影響[J].診斷病理學雜志,2009,16(6)：478.

[5]蔡翠珠,張紅,賈曉云.胰腺冰凍切片免疫組化中組織的固定方法比較[J].中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志,2008,7(10)：78-79.

Effect of different fixative on immunohistochemical staining of frozen section

Yue Lingping
Department of Pathology,the Fourth People's Hospital of Changzhou City 213000

Objective：To investigate the effect of different fixative on immunohistochemical staining of frozen section.Methods：The detection of antibodies can be expressed in normal tissue or tumor frozen section specimens in 6 cases from the operation room were selected,took 6 kinds of common tissues or tumors,after frozen section,they were put in 6 different frozen liquid.The immunohistochemical staining effect of frozen sections on the preparation of six kinds of fixatives was evaluated.Results：There were significant differences in EAF fixing agent and acetone fixing agent,fixing agent EAF and AAF EAF fixing agent,fixing agent and fixing agent,and 95%alcohol of frozen section immunohistochemistry results between methanol fixed agent and acetone fixed agent(P＜0.05).EAF fixing agent in frozen section immunohistochemical staining was better than the other fixing agent,with significant difference(P＜0.05).Conclusion：The best immunohistochemical staining effect can be obtained by frozen section with EAF fixative.

Fixative;Frozen section;Immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.22.75