繆 巍 才保加 劉 寧 王曉龍 馬曉明 戈 銳

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，青海 西寧 810001)

結(jié)腸腺癌中CyclinA表達(dá)與Ki67標(biāo)記增殖的關(guān)系及意義

繆 巍 才保加 劉 寧 王曉龍 馬曉明 戈 銳

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，青海 西寧 810001)

目的檢測結(jié)腸腺癌中細(xì)胞周期素(Cyclin)A和Ki67的表達(dá)特征，分析二者在不同臨床病理特中的表達(dá)意義，關(guān)注二者陽性率的相關(guān)性。方法結(jié)腸腺癌術(shù)后組織71例為觀察組，距腫瘤邊緣>5 cm的非腫瘤性結(jié)腸黏膜組織29例為對照組。應(yīng)用免疫組化方法檢測兩組CyclinA和Ki67的表達(dá)。結(jié)果觀察組CyclinA和Ki67表達(dá)陽性率明顯高于對照組。觀察組CyclinA和Ki67表達(dá)與腫瘤最大徑、浸潤深度明顯相關(guān)。CyclinA表達(dá)與腫瘤脈管累犯相關(guān)。CyclinA和Ki67均與腫瘤神經(jīng)侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性。相關(guān)分析顯示觀察組CyclinA和Ki67表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論結(jié)腸腺癌術(shù)后組織中CyclinA和Ki67表達(dá)升高，二者呈正相關(guān)，對促進(jìn)腫瘤形成和進(jìn)展有一定價值。

結(jié)腸腺癌；細(xì)胞周期素(Cyclin)A；Ki67；免疫組化

結(jié)腸中最常見的腫瘤是腺癌，其來源于腸黏膜的上皮細(xì)胞，病變發(fā)生過程與上皮細(xì)胞不典型增生有密切關(guān)系，此時細(xì)胞處于高分裂狀態(tài)，細(xì)胞增殖活躍，機(jī)體內(nèi)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的蛋白表達(dá)明顯異?！?，2〕。細(xì)胞周期素(Cyclin)A是直接調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖周期的正性因子，在細(xì)胞周期的進(jìn)程中，可以分別與周期蛋白依賴性激酶(CDK)1和CDK2結(jié)合，啟動S期相關(guān)因子的轉(zhuǎn)錄，在細(xì)胞增殖和分裂活動中起重要作用〔3〕。Ki67是標(biāo)記細(xì)胞增殖指數(shù)的經(jīng)典蛋白，其特異性強(qiáng)，臨床意義明顯〔4〕。本文關(guān)注結(jié)腸腺癌術(shù)后組織中CyclinA和Ki67的表達(dá)，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 2014年1月至2016年7月青海大學(xué)附屬醫(yī)院行手術(shù)根治的結(jié)腸腺癌患者71例為觀察組，留取術(shù)后的蠟塊組織，其中男39例，女32例，年齡58～82(平均65.3)歲，均經(jīng)病理醫(yī)師閱片確診，并符合世界衛(wèi)生組織(WHO)中的診斷標(biāo)準(zhǔn)及分型。術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。距腫瘤邊緣>5 cm的非腫瘤性結(jié)腸黏膜組織29例為對照組，其中男15例，女14例，年齡59～80(平均66.8)歲。兩組常規(guī)資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2CyclinA和Ki67表達(dá)的檢測 術(shù)后組織中CyclinA和Ki67的表達(dá)均基于石蠟包埋的組織，切取4 μm切片后應(yīng)用免疫組化二步法檢測，行二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色，嚴(yán)格按實驗步驟進(jìn)行，減少誤差，做好質(zhì)量控制。

1.3CyclinA和Ki67結(jié)果的判讀 CyclinA和Ki67的陽性部位是細(xì)胞核，以棕黃色-棕褐色為陽性，判斷依據(jù)著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比的評分之和。著色強(qiáng)度評分：0分，無顯色；1分，棕黃色；2分，棕褐色。陽性細(xì)胞百分比評分：選擇5個高倍視野，計數(shù)陽性率，取其平均值；0分，<10%；1分，10%～50%；2分，>50%。取兩項評分之和的值作為最終評分結(jié)果。0～2分為陰性，>2分為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組CyclinA和Ki67蛋白表達(dá)的比較 兩組CyclinA和Ki67表達(dá)陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

2.2CyclinA和Ki67在觀察組不同臨床特征中表達(dá)的比較 CyclinA和Ki67表達(dá)與腫瘤最大徑、浸潤深度密切相關(guān)。CyclinA的表達(dá)與腫瘤脈管累犯相關(guān)。CyclinA和Ki67均與腫瘤神經(jīng)侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性。見表2。

表1 兩組CyclinA和Ki67蛋白陽性表達(dá)的比較〔n(%)〕

表2 觀察組不同臨床特征患者CyclinA和Ki67的陽性表達(dá)比較〔n(%)〕

2.3觀察組CyclinA和Ki67表達(dá)相關(guān)性 CyclinA和Ki67表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.52，P=0.034)。

3 討 論

結(jié)腸腺癌是高增殖性腫瘤，正常上皮細(xì)胞異型增生及癌變過程中伴隨著增生活躍的現(xiàn)象〔4〕。Ki67是一種與細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原，其發(fā)揮生物學(xué)作用與有絲分裂密切相關(guān)，Ki67表達(dá)的范圍除G0期以外，表達(dá)在所有的增殖周期中，因此Ki67對增殖的標(biāo)記較為廣泛，且具有更強(qiáng)特異性強(qiáng)，能真實反映細(xì)胞的活躍狀態(tài)〔5，6〕。劉偉等〔7〕認(rèn)為Ki67可以作為評估胃癌惡性生物學(xué)行為及預(yù)后的參考指標(biāo)。CyclinA是在原發(fā)性肝細(xì)胞癌的DNA整合的部位上檢測到的，在其C端有一個保守序列，是典型的細(xì)胞周期素盒，可以與生物泛素結(jié)合而降解〔8，9〕。CyclinA存在于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，在DNA合成前G1期出現(xiàn)〔10〕。研究顯示流式細(xì)胞儀可以分析出CyclinA在細(xì)胞周期的S期表達(dá)最高，表明CyclinA是細(xì)胞周期通過S期、G2/M期所必需的因子〔11，12〕。本研究結(jié)果提示，CyclinA高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤形成和進(jìn)展。在G0和G1期，低磷酸化型的RB蛋白與E2F結(jié)合成為復(fù)合物，使E2F處于非活化狀態(tài)，在G1/S界限和S期，RB蛋白被CyclinA-CDK2復(fù)合物磷酸化，即與E2F解離，而處于游離狀態(tài)的E2F的抑制作用解除，細(xì)胞就能進(jìn)入增殖期〔13，14〕。有觀點認(rèn)為CyclinA同P107相結(jié)合后，形成CyclinA-E2F復(fù)合物，這是CyclinA激活E2F活性的另一條通路〔15，16〕。本文結(jié)果提示CyclinA和Ki67對嗜神經(jīng)現(xiàn)象和轉(zhuǎn)移可能無明顯作用，但是這與一些研究的結(jié)果有一定的不同，可能與樣本的選擇及樣本量有關(guān)〔7〕。本文結(jié)果提示CyclinA和Ki67具有明顯的協(xié)同作用，因此CyclinA是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的強(qiáng)有力的因子之一〔17〕。增殖與腫瘤的生長和預(yù)后相關(guān)，CyclinA和Ki67表達(dá)明顯升高意味著腫瘤不良的生物學(xué)行為和不良的預(yù)后，因此檢測二者的表達(dá)可能與結(jié)腸腺癌的預(yù)后有關(guān)。研究顯示Ki67高表達(dá)的腫瘤可能對抗腫瘤的治療有一定拮抗性〔18，19〕，因此對于此類腫瘤應(yīng)當(dāng)關(guān)注耐藥相關(guān)蛋白的檢測，篩選有效的藥物，提高治療效果。

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〔2017-04-11修回〕

(編輯 苑云杰)

繆 巍(1975-)，男，醫(yī)學(xué)碩士，副主任醫(yī)師，主要從事胃腸腫瘤研究。

R73

A

1005-9202(2017)17-4303-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.17.064