陳雪蓮 錢沁佳

(海南省農(nóng)墾三亞醫(yī)院婦產(chǎn)科，海南 三亞 572000)

CTLA-4基因多態(tài)性與宮頸癌易感性的關(guān)系

陳雪蓮 錢沁佳

(海南省農(nóng)墾三亞醫(yī)院婦產(chǎn)科，海南 三亞 572000)

目的探討細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原(CTLA)-4基因單核苷酸多態(tài)性(SNPs)與宮頸癌發(fā)生的關(guān)系。方法350例宮頸癌患者為病例組，350例健康女性為對照組，抽取全血基因組DNA，直接測序法檢測CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A單核苷酸多態(tài)性，采用MTT 法檢測不同基因型的外周血單核細(xì)胞增殖能力，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測不同基因型患者血清轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β、白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-4表達(dá)水平。結(jié)果宮頸癌病例組CTLA-4-318 位點等位基因C的概率低于對照組，等位基因T概率高于對照組，CC基因型比例低于對照組，TT基因型比例高于對照組(均P<0.05)。病例組CTLA-4 CT60 位點等位基因A的概率低于對照組，等位基因G的概率高于對照組，AA基因型比例低于對照組，GG基因型比例高于對照組(均P<0.05)。CTLA-4-318 CC基因型T細(xì)胞增殖率高于TT基因型，TGF-β水平低于TT基因型，IL-2、IL-4水平高于TT基因型(均P<0.05)。CTLA-4 CT60 AA基因型TGF-β水平低于GG基因型，IL-2、IL-4水平高于GG基因型(P<0.05)。結(jié)論CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A基因多態(tài)性在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用，CTLA-4-318 TT基因型及CT60 GG基因型可增加宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的增殖及調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌有關(guān)。

宮頸癌；細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原 4；基因多態(tài)性；細(xì)胞因子

90%以上的宮頸癌患者伴有高危型人乳頭瘤病毒(HPV)感染〔1〕，然而并非所有的HPV感染者都會進(jìn)展成為宮頸癌患者，多種環(huán)境因素、遺傳因素及免疫學(xué)因素在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用。細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原(CTLA)-4是調(diào)節(jié)T細(xì)胞增殖、分化的重要分子之一，CTLA-4基因在調(diào)節(jié)細(xì)胞及體液免疫反應(yīng)中起到重要作用〔2〕。CTLA-4作為CD28的分子拮抗劑具有多種生物學(xué)功能。CTLA-4基因多態(tài)性與胃癌、結(jié)直腸癌、腎癌等惡性腫瘤的發(fā)生有一定關(guān)系〔3〕。本研究旨在探討CTLA-4基因的單核苷酸多態(tài)性(SNPs)與宮頸癌發(fā)生的關(guān)系及其可能的機(jī)制。

1 對象與方法

1.1對象 收集2013年1月至2015年12月海南省農(nóng)墾三亞醫(yī)院就診的350例宮頸癌患者的臨床資料，入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)新發(fā)病例首次就診，未做過手術(shù)及放化療；(2)術(shù)前病理診斷為宮頸鱗癌。選取體檢中心350例健康女性為對照組，入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)宮頸細(xì)胞學(xué)檢查呈陰性；(2)高危型HPV檢測呈陰性。所有入選對象均需排除自身免疫系統(tǒng)疾病、嚴(yán)重感染、惡性腫瘤及血緣關(guān)系。病例組年齡32～67〔平均(48.6±14.2)〕歲，中位年齡47歲；對照組年齡35～63〔平均(47.1±16.9)〕歲，中位年齡46歲，兩組年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法 抽取兩組治療前空腹外周靜脈血10 ml，其中5 ml于1 500 r/min離心5 min收集血清，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒進(jìn)行血清轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β、白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-4水平檢測。另外5 ml血液分為2份，一份進(jìn)行全血DNA的提取進(jìn)行基因多態(tài)性 的檢測，一份采用Ficoll密度梯度離心法分離外周血單核細(xì)胞。根據(jù)目的基因CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A的序列號，用Primer Premier 5.0 設(shè)計引物，并委托上海生工公司合成引物，PCR擴(kuò)增后采用直接測序法檢測CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A的基因多態(tài)性表達(dá)。收集單核細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，在植物血凝素(PHA)刺激下采用噻唑藍(lán)(MTT)法進(jìn)行細(xì)胞增殖率的測定。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行χ2檢驗、單因素方差分析、LSD-t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1兩組CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A基因型比較 CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A基因型的分布均符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡定律。病例組CTLA-4-318 位點攜帶等位基因C的概率低于對照組，等位基因T的概率高于對照組，病例組攜帶CTLA-4 CT60 位點等位基因A的概率低于對照組，攜帶等位基因G的概率高于對照組(P<0.05)。病例組CTLA-4-318 位點CC基因型比例低于對照組，TT基因型比例高于對照組，病例組CTLA-4 CT60 AA基因型比例低于對照組，GG基因型比例高于對照組(P<0.05)。見表1，表2。

表1 兩組CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A攜帶等位基因頻率比較〔n(%),n=50〕

表2 兩組CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A基因型頻率比較〔n(%)，n=350〕

2.2CTLA-4基因多態(tài)性與T細(xì)胞增殖率及細(xì)胞因子的關(guān)系 不同CTLA-4-318基因型T細(xì)胞增殖率不同，CC基因型T細(xì)胞增殖率高于TT基因型(P<0.05)。不同CTLA-4 CT60基因型T細(xì)胞增殖率差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。不同CTLA-4-318基因型TGF-β、IL-2、IL-4水平不同，CC基因型TGF-β水平低于TT基因型，IL-2、IL-4水平高于TT基因型(P<0.05)。不同CTLA-4 CT60基因型TGF-β、IL-2、IL-4水平不同，AA基因型TGF-β水平低于GG基因型，IL-2、IL-4水平高于GG基因型(P<0.05)。見表3。

表3 CTLA-4基因多態(tài)性與T細(xì)胞增殖率及細(xì)胞因子的關(guān)系

與CC組比較：1)P<0.05；與AA組比較：2)P<0.05

3 討 論

宮頸癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，基因多態(tài)性與宮頸癌易感性之間關(guān)系密切。研究發(fā)現(xiàn)，人類白細(xì)胞抗原(HLA)的多態(tài)性與宮頸癌易感性及HPV感染密切相關(guān)，HLA多態(tài)性與高危型HPV16型病毒的變異有關(guān)〔4〕。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤壞死因子(TNF)-α基因多態(tài)性與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，TNF-α基因啟動子區(qū)-238攜帶A等位基因的人群宮頸癌發(fā)病風(fēng)險低于等位基因G人群，而TNF-α-308位點G等位基因人群宮頸癌發(fā)病風(fēng)險低于等位基因A人群〔5〕。

人類CTLA-4基因位于染色體2q33，該基因區(qū)域分布多種與腫瘤免疫關(guān)系密切的基因。CTLA-4是CD28的拮抗劑，能夠與CD28競爭性結(jié)合B7受體，負(fù)性調(diào)節(jié)T細(xì)胞的增殖、分化。本研究結(jié)果說明CTLA-4-318 TT基因型可增加宮頸癌發(fā)病風(fēng)險，CC基因型可降低宮頸癌發(fā)病風(fēng)險，CTLA-4 CT60 GG基因型可增加宮頸癌發(fā)病風(fēng)險，AA基因型可降低宮頸癌發(fā)病風(fēng)險。

惡性腫瘤的發(fā)生與癌基因的激活劑抑癌基因的失活密切相關(guān)，抗腫瘤免疫在此過程起到重要作用，CD4+及CD8+在抗腫瘤免疫過程中起到重要作用，CTLA-4能抑制CD4+T細(xì)胞及CD8+細(xì)胞毒T細(xì)胞的作用，降低機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)〔6〕。本研究結(jié)果提示CTLA-4-318及CTLA-4 CT60與宮頸癌發(fā)病密切相關(guān)，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的增殖及調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌。有研究發(fā)現(xiàn)，CTLA-4基因型的多態(tài)性與年齡、是否絕經(jīng)及HPV感染等因素?zé)o關(guān)，而與宮頸癌分期有關(guān)，說明CTLA-4基因型多態(tài)性在宮頸癌進(jìn)展過程中起到重要作用〔7〕。

本研究認(rèn)為，CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A基因多態(tài)性在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用，CTLA-4-318 TT基因型及CT60 GG基因型可增加宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的增殖及調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌有關(guān)。宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是多基因多因素協(xié)同累積作用的結(jié)果，深入探討基因多態(tài)性與宮頸癌發(fā)病的關(guān)系，為宮頸癌的早期診斷、早期治療提供依據(jù)。

1楊劍虹，徐鳳娟，王金湖，等.基因擴(kuò)增及導(dǎo)流雜交技術(shù)檢測人乳頭瘤病毒〔J〕.臨床檢驗雜志，2012;30(12):981-2.

2Zhao HY，Duan HX，Gu Y.Meta-analysis of the cytotoxic T-lymphocyte antigen 4 gene+6230G/A polymorphism and cancer risk〔J〕.Clin Transl Oncol，2014;16(10):879-85.

3李 華，周翊峰，郭紅燕，等.細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4 編碼區(qū) 49 位點的基因多態(tài)性與宮頸癌遺傳易感性的關(guān)系〔J〕.中華腫瘤雜志，2011;33(9):681-4.

4Yan Q，Chen P，Lu A，etal.Association between CTLA-460G/A and-1661A/ G polymorphisms and the risk of cancers:a meta-analysis〔J〕.PLoS One，2013;8(12):e83710.

5Mocellin S,Nitti D.CTLA-4 blockade and the renaissance of cancer immunotherapy〔J〕.Biochim Biophys Acta,2013;1836(2):187-96.

6王甲甲，鐘佳伶，張 娟，等.細(xì)胞毒 T 淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原 4 基因多態(tài)性與宮頸癌易感性的相關(guān)分析〔J〕.臨床檢驗雜癥，2015;33(2)：119-23.

7Lee YH，Song GG.A meta-analysis of the association between CTLA4+49 A/G，-318C/T，and IL-1 polymorphisms and susceptibility to cervical cancer〔J〕.Neoplasma,2014;61(4):481-90.

〔2016-09-15修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

陳雪蓮(1983-)，女，主治醫(yī)師，主要從事婦科腫瘤研究。

R73

A

1005-9202(2017)17-4207-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.17.017