明智慧 單 笑 韓昕彤

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院口腔科，吉林 長(zhǎng)春 130021)

長(zhǎng)春新堿對(duì)人舌癌Tca8113細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

明智慧 單 笑1韓昕彤1

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院口腔科，吉林 長(zhǎng)春 130021)

目的探討外源性長(zhǎng)春新堿(VCR)對(duì)人舌癌細(xì)胞株Tca8113的生物學(xué)行為。方法應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)觀察不同濃度的VCR對(duì)Tca8113細(xì)胞的增殖抑制作用，MTT法檢測(cè)Tca8113細(xì)胞的增殖抑制率，流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度的VCR對(duì)Tca8113細(xì)胞增殖周期進(jìn)程的影響，電子顯微鏡觀察 Tca8113細(xì)胞亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果不同濃度的VCR對(duì)Tca8113細(xì)胞增殖均有抑制作用，其細(xì)胞增殖數(shù)量顯著低于對(duì)照組，抑制率呈明顯的劑量依賴性。流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示VCR主要作用于細(xì)胞周期的M期，從而使細(xì)胞有絲分裂停止于細(xì)胞中期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，電子顯微鏡下可見VCR作用后的Tca8113細(xì)胞線粒體、紡錘體、微管等結(jié)構(gòu)改變，可見凋亡小體。結(jié)論VCR抗腫瘤效能主要取決于自身的藥物濃度及作用時(shí)間、給藥途徑等，以提高其VCR的生物利用度。

Tca8113細(xì)胞；長(zhǎng)春新堿；細(xì)胞周期；凋亡

舌癌是口腔惡性腫瘤最常見的類型，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，且有年輕化傾向〔1〕。隨著醫(yī)療技術(shù)的提升，越來(lái)越多的靶向藥物投入到臨床實(shí)驗(yàn)中，腫瘤的治療不再墨守成規(guī)，取而代之的是有針對(duì)性的個(gè)性化治療方案。在腫瘤細(xì)胞學(xué)的發(fā)展過程中，越來(lái)越多的學(xué)者從細(xì)胞水平對(duì)治療方案有效性進(jìn)行評(píng)估，這將成為日后評(píng)價(jià)療效的重要模式〔2〕。本研究探討長(zhǎng)春新堿(VCR)體外對(duì)Tca8113細(xì)胞增殖抑制率、細(xì)胞周期進(jìn)程及凋亡率。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞及試劑 人舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞株購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)，噻唑藍(lán)(MTT)試劑、RPMI1640培養(yǎng)基購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，VCR由我院藥劑科提供(北京四環(huán)制藥有限公司)。

1.2MTT比色法 參照文獻(xiàn)〔3〕進(jìn)行，略加改進(jìn)。

1.3流式細(xì)胞術(shù) 細(xì)胞培養(yǎng)及分組同1.2，本處操作用25 ml培養(yǎng)瓶替代96孔塑料培養(yǎng)板。

1.4透射電子顯微鏡技術(shù) 細(xì)胞培養(yǎng)及分組同1.3，完成上述操作后，分別收集不同濃度的VCR作用后的Tca8113細(xì)胞懸液于錐形離心管內(nèi)，離心沉淀1 000 r/10 min，棄去上清，將細(xì)胞沉淀物經(jīng)2.5%戊二醛前固定，1%鋨酸后固定，梯度酒精脫水，環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，醋酸鉛-鈾雙重染色，透射電子顯微鏡觀察。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1MTT結(jié)果 0、10、20、40 μg/ml組A值1.34±0.15、1.12±0.11、0.83±0.18、0.72±0.22；抑制率分別為16.4%、38.1%、46.3%。不同濃度的VCR對(duì)Tca8113細(xì)胞增殖均有抑制作用，且呈正相關(guān)性，與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.01)。

2.2透射電子顯微鏡結(jié)果 不同濃度VCR藥物作用Tca8113細(xì)胞后，可見胞質(zhì)內(nèi)有存在大量空泡，存在明顯的線粒體腫脹，細(xì)胞和染色質(zhì)可見凝集及趨邊，能見到凋亡小體。見圖1。

圖1 透射電子顯微鏡結(jié)果(×5 000)

2.3流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果 不同濃度的VCR藥物作用Tca8113細(xì)胞后，G0/G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少，G2/M期細(xì)胞相對(duì)增多(P<0.05,P<0.01)。見表1。

表1 不同濃度VCR對(duì)Tca8113細(xì)胞周期進(jìn)程的影響及凋亡率

與0 μg/ml組比較：1)P<0.05，2)P<0.01

3 討 論

VCR是從長(zhǎng)春花葉中提取出來(lái)的，且有較強(qiáng)抗腫瘤活性的二聚吲哚類生物堿，是重要的抗腫瘤藥物。MTT實(shí)驗(yàn)可準(zhǔn)確反映VCR藥物作用后Tca8113細(xì)胞的活化狀態(tài)和活細(xì)胞數(shù)量，具有一定的客觀性。線粒體作為半自主細(xì)胞器，在細(xì)胞能量代謝和氧自由基生成過程中扮演重要角色，極易受到外界因素的損傷，線粒體功能改變，從而導(dǎo)致細(xì)胞增殖受抑。

流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，不同濃度的VCR對(duì)Tca8113細(xì)胞增殖周期各時(shí)相均有不同程度的抑制作用。細(xì)胞周期是較固定的且易受各種細(xì)胞因子影響及調(diào)控〔4〕，一旦發(fā)生某環(huán)節(jié)的調(diào)控失常，即容易發(fā)生功能學(xué)及形態(tài)學(xué)的明顯改變，結(jié)果顯示不同濃度的VCR誘導(dǎo)Tca8113細(xì)胞具有一定的濃度依賴性，均表現(xiàn)為G0/G1期細(xì)胞比例增加，S期細(xì)胞減少，以上導(dǎo)致G2/M期的細(xì)胞數(shù)相對(duì)增多，細(xì)胞損傷一般表現(xiàn)為G2/M期細(xì)胞增多，細(xì)胞凋亡率增多能證明以上結(jié)論。文獻(xiàn)〔5〕報(bào)道，VCR屬于細(xì)胞周期特異性藥物，主要作用于細(xì)胞周期的M期，通過與微管蛋白的作用，導(dǎo)致微管解聚，從而破壞細(xì)胞有絲分裂以及紡錘體形成，這樣導(dǎo)致細(xì)胞有絲分裂停止于中期，促使細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞增殖得到抑制。

綜上所述，VCR對(duì)Tca8113細(xì)胞作用具有一定的時(shí)間濃度依賴性。為了提高VCR的抗癌效能、減輕不良反應(yīng)，在探索新的藥物劑型時(shí)應(yīng)以降低毒性為前提，通過增加劑量、合理延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間對(duì)VCR進(jìn)行修飾改造，從而達(dá)到提高療效以及提升臨床順應(yīng)性的目的。

1劉愛芹，李莎莎，周 旋，等.信號(hào)傳導(dǎo)及激活因子調(diào)控微RXA-21影響人舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲能力的體外研究〔J〕.中華口腔醫(yī)學(xué)雜志，2013；18(9)：539-44.

2蔣烈浩，凌志強(qiáng).miR-21與頭頸部惡性腫瘤〔J〕.國(guó)際腫瘤學(xué)雜志，2014；41(10)：750-2.

3馮青杰，孫立群，騰 博，等.雷公藤內(nèi)酯醇聯(lián)合熱療對(duì)Hep-2細(xì)胞的增殖抑制作用〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2009；35(5)：862-5.

4Pratheeshkumar P，Kuttan G.Oleanolic acid induces apoptosis by modulating p53，Bax, Bcl-2 and caspase-3 gene expression and regulates the activation of transcription factors and cytokine profile in B16F〔J〕.J Environ Pathol Toxicol Oncol，2011；30(1)：21-31.

5Silvenman JA，Deitcher SR.Marqibo(vincristine sulfate liposome injection) improves the pharmacokinetics and pharmacodynamics of vincristine〔J〕.Cancer Chemother Pharmacol，2013；71(3)：555-64.

〔2016-12-25修回〕

(編輯 袁左鳴)

韓昕彤(1977-)，女，副主任護(hù)師，主要從事護(hù)理研究。

明智慧(1967-)，女，主管護(hù)師，主要從事護(hù)理研究。

R739.8

A

1005-9202(2017)17-4206-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.17.016

1 吉林大學(xué)第一醫(yī)院透析中心