盧愈新?覃丕恩?潘茂華?宋啟靈?蘇澤強(qiáng)?覃宇城?鄒春燕?黃亞銘

[摘要] 目的 分析以檢測(cè)瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶的瘧疾快速檢測(cè)試劑卡與瘧原蟲(chóng)鏡檢及瘧疾患者乳酸脫氫酶檢測(cè)進(jìn)行比較觀察。 方法 對(duì)2015～2016年在加納務(wù)工返鄉(xiāng)人員以瘧原蟲(chóng)鏡檢陽(yáng)性住院治療前的患者作為主要觀察對(duì)象，同時(shí)進(jìn)行快速瘧原蟲(chóng)檢測(cè)試劑卡檢測(cè)（膠體金法）及患者乳酸脫氫酶檢測(cè)，瘧疾陽(yáng)性患者按照四種瘧原蟲(chóng)種類(lèi)分組統(tǒng)計(jì)分析比較。 結(jié)果 瘧疾觀察患者共144例，其中鏡檢陽(yáng)性患者共142例和2例臨床癥狀明顯血檢陰性患者，鏡檢陽(yáng)性率為98.61%（142/144）。惡性瘧108例，間日瘧、三日瘧和卵形瘧分別為9例、1例和24例?？焖侬懺x(chóng)檢測(cè)試劑檢測(cè)總體陽(yáng)性率為95.14%（137/144），兩種方法的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。乳酸脫氫酶增高的患者占44.44%（64/144），與血檢方法比較統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論 該快速瘧原蟲(chóng)檢測(cè)試劑對(duì)瘧原蟲(chóng)鏡檢技術(shù)掌握不熟練的醫(yī)療機(jī)構(gòu)是一種較好的輔助檢測(cè)試劑。而臨床檢驗(yàn)乳酸脫氫酶增高患者作為判斷為瘧疾患者存在較大的差異。

[關(guān)鍵詞] 瘧疾；鏡檢；瘧疾快速診斷；乳酸脫氫酶

[中圖分類(lèi)號(hào)] R531.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2017）16-07-04

Comparison of the results of the rapid diagnostic kit for malaria with microscopic examination and detection of lactic dehydrogenase

LU Yuxin1 QIN Pi'en1 PAN Maohua1 SONG Qiling1 SU Zeqiang1 QIN Yucheng1 ZOU Chunyan2 HUANG Yaming3，4

1. Shanglin County Peoples Hospital of the Guangxi Zhuang Autonomous Region， Shanglin 530500， China； 2. The Guangxi Zhuang Autonomous Region Peoples Hospital， Nanning 530021， China； 3. The Guangxi Zhuang Autonomous Region Center for Disease Control and Prevention， Nanning 530028， China； 4. School of Life Science and Technology， Guangxi University， Nanning 530004， China

[Abstract] Objective To analyze the comparison of rapid malaria detection kit for detection of Plasmodium lactate dehydrogenase was used to detect lactate dehydrogenase in malaria patients and malaria parasites. Methods The migrant workers returned home to patients who had been hospitalized for malaria positive microscopy from Garnor during 2015 to 2016 were selected as the major observation object. At the same time， rapid detection of malaria parasites by reagent card test （colloidal gold method） and patient lactate dehydrogenase test were carried on. Malaria positive patients were grouped， analyzed and compared according to four species of plasmodium. Results A total of 144 malaria patients were observed， of whom 142 were positive and 2 were clinically negative. The positive rate of microscopy was 98.61%（142/144）. There were 108 cases of falciparum malaria， 9 cases of vivax malaria， three days malaria and 24 cases of oval malaria， 1 cases and two cases. The overall positive rate of rapid detection of Plasmodium parasites was 95.14%（137/144）， and the difference between the two methods was not statistically significant（P>0.05）. Lactic dehydrogenase increased in 44.44%（64/144）. Compared with blood test， the difference between the two methods was statistically significant（P<0.01）. Conclusion The rapid detection agent for Plasmodium falciparum is a better assistant detection reagent for the medical institutions with poor grasp of the microscopic examination technique of plasmodium. The clinical test shows that lactic dehydrogenase increased in patients with malaria as judged there was a big difference.endprint

[Key words] Malaria； Microscopy； Rapid diagnosis of malaria； Lactate dehydrogenase

廣西上林縣2013～2016年累計(jì)從非洲輸入的瘧疾患者共1582例，占廣西輸入性瘧疾患者總數(shù)的85%，住院治療共1007例，屬于國(guó)內(nèi)累計(jì)從非洲輸入性瘧疾病例數(shù)量最多且最集中的一個(gè)縣[1-3]。特別是2013年6～7月出現(xiàn)短期大量從加納返鄉(xiāng)務(wù)工人員，入院治療的瘧疾患者急劇增加，曾經(jīng)最多的一天達(dá)到18例瘧疾患者，每年均有重癥瘧疾患者（腦型瘧）入院進(jìn)行搶救，給臨床檢驗(yàn)和住院治療造成極大壓力，為評(píng)價(jià)瘧疾快速診斷試劑卡與瘧疾鏡檢及乳酸脫氫酶之間的關(guān)系，在部分瘧疾患者中進(jìn)行了比較觀察現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 觀察對(duì)象

上林縣2015～2016年在非洲加納務(wù)工返鄉(xiāng)人員因瘧疾發(fā)病入院治療患者作為觀察對(duì)象，瘧疾患者入院后治療前，經(jīng)顯微鏡鏡檢證實(shí)為瘧原蟲(chóng)陽(yáng)性患者，并做鏡檢瘧原蟲(chóng)蟲(chóng)種分類(lèi)。同時(shí)采用瘧原蟲(chóng)快速檢測(cè)試劑卡對(duì)血檢瘧原蟲(chóng)陽(yáng)性患者血樣做檢測(cè)?；颊哐獦訖z驗(yàn)科同時(shí)做乳酸脫氫酶檢驗(yàn)。

1.2 瘧原蟲(chóng)鏡檢

取臨床診斷瘧疾患者耳垂血或靜脈血，用干凈的載玻片制作成厚、薄血膜，待自然干燥后，用甲醇固定薄血膜后，采用3%～4%吉姆薩染液染色25～30min，用清水緩慢沖去染液，自然晾干后顯微鏡油鏡頭下鏡檢，對(duì)鏡檢瘧疾陽(yáng)性樣品同時(shí)進(jìn)行瘧原蟲(chóng)分類(lèi)，對(duì)厚血膜全部鏡檢完未發(fā)現(xiàn)瘧原蟲(chóng)判斷為陰性，對(duì)臨床瘧疾癥狀典型而血檢陰性患者同樣做瘧原蟲(chóng)快速檢測(cè)試劑檢測(cè)。

1.3 瘧原蟲(chóng)快速檢測(cè)試劑卡

試劑為廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的瘧原蟲(chóng)檢測(cè)試劑（膠體金法），產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)YZB/國(guó)4201-2011，2015年采購(gòu)該試劑，有效期為24個(gè)月，均在有效期使用。該產(chǎn)品試劑條上主要包被有瘧原蟲(chóng)的乳酸脫氫酶單克隆抗體。檢測(cè)方法和結(jié)果判斷均按照使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。醫(yī)院檢驗(yàn)科對(duì)瘧原蟲(chóng)鏡檢陽(yáng)性血樣同時(shí)采用瘧原蟲(chóng)檢測(cè)試劑卡進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果判斷試劑卡對(duì)照C條顯示為試劑正常，單獨(dú)T1條顯示為惡性瘧原蟲(chóng)感染，單獨(dú)T2條顯示為間日瘧原蟲(chóng)或三日瘧及卵形瘧原蟲(chóng)感染，T1和T1同時(shí)顯示為惡性瘧合并其它三種瘧原蟲(chóng)任何一種或幾種瘧原蟲(chóng)感染。

1.4 乳酸脫氫酶檢驗(yàn)

采用酶速率法進(jìn)行檢測(cè)，試劑為上海執(zhí)誠(chéng)生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒（IFCC推薦方法（L→P）。此方法基于乳酸脫氫酶可以作用試劑中的乳酸和輔酶Ⅰ氧化型反應(yīng)得到丙酮酸和輔酶Ⅰ還原型，故可以在340nm處測(cè)定輔酶Ⅰ還原型特定吸收的上升速率進(jìn)而計(jì)算出樣品中乳酸脫氫酶的活力。乳酸脫氫酶正常值110～240u/L

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

患者血檢瘧原蟲(chóng)陽(yáng)性及瘧原蟲(chóng)快速檢測(cè)試劑卡檢測(cè)和乳酸脫氫酶檢驗(yàn)陰陽(yáng)性均樣品按照瘧原蟲(chóng)種種類(lèi)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用Excel 2003版軟件對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并制作統(tǒng)計(jì)表，同時(shí)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié)果

2.1 觀察對(duì)象

瘧疾患者共144例，全部來(lái)自上林縣在非洲加納務(wù)工返鄉(xiāng)人員，返鄉(xiāng)人員在國(guó)外務(wù)工期間反復(fù)瘧疾發(fā)作并反復(fù)多次進(jìn)行過(guò)抗瘧藥治療。

2.2 瘧原蟲(chóng)鏡檢陽(yáng)性

144例瘧疾中有142例血檢陽(yáng)性，總陽(yáng)性率為98.61%（142/144）。患者中惡性瘧占75%（108/144），間日瘧占6.25%（9/144），三日瘧占0.69%（1/144），卵形瘧占 16.67%（24/144），其中2例患者臨床癥狀典型而鏡檢為陰性占1.39%（2/144），見(jiàn)表1。

2.3 快速診斷試劑卡檢測(cè)

鏡檢惡性瘧陽(yáng)性患者108例經(jīng)快速診斷試劑卡檢測(cè)結(jié)果，總的瘧原蟲(chóng)檢出陽(yáng)性率為96.30%（104/108），單純惡性瘧患者為51例，惡性瘧混合其它瘧原蟲(chóng)感染為44例，合計(jì)為95例，陽(yáng)性率為87.96%（95/108）。值得注意的是鏡檢4例陽(yáng)性惡性瘧患者經(jīng)反復(fù)鏡檢為陽(yáng)性但反復(fù)快速診斷試劑卡測(cè)試均為陰性，同樣的問(wèn)題在卵形瘧的檢測(cè)中也一樣出現(xiàn)。對(duì)142例鏡檢陽(yáng)性及2例鏡檢陰性但瘧疾臨床癥狀典型患者血樣采用快速檢測(cè)試劑卡檢測(cè)總的陽(yáng)性達(dá)到95.14%（137/144），鏡檢和快速診斷試劑卡檢測(cè)的陽(yáng)性率，兩種方法的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

2.4 瘧疾患者乳酸脫氫酶檢驗(yàn)

鏡檢瘧原蟲(chóng)陽(yáng)性的144例瘧疾患者同時(shí)進(jìn)行乳酸脫氫酶檢測(cè)結(jié)果顯示，只有44.44%（64/144）瘧疾患者存在乳酸脫氫酶增高，與血檢方法比較統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見(jiàn)表1，因此，臨床檢驗(yàn)乳酸脫氫酶增高患者作為判斷為瘧疾患者存在較大的差異。

3 討論

據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）《2015年世界瘧疾報(bào)告》2015年全世界瘧疾病例數(shù)和死亡病例數(shù)與2000年相比有明顯的下降，但瘧疾病例數(shù)仍然有2.14億例，受瘧疾威脅人群為32億，瘧疾死亡病例

數(shù)為43.8萬(wàn)人，有88%的瘧疾病例和90%瘧疾死亡病例均在非洲區(qū)域[4]。中國(guó)自2008年開(kāi)始從非洲輸入性瘧疾患者逐年增多[5]，到2013年廣西輸入性瘧疾患者疫情呈現(xiàn)爆發(fā)性增多[6]，輸入性瘧疾患者主要集中在上林縣，直到目前該縣仍然是廣西輸入性瘧疾患者最多的地方，給當(dāng)?shù)氐寞懠卜乐渭叭朐褐委煰懠不颊叩募皶r(shí)診斷和早治療帶來(lái)巨大的挑戰(zhàn)。國(guó)內(nèi)在本世紀(jì)初就開(kāi)始現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試國(guó)外生產(chǎn)的瘧疾快速診斷試劑產(chǎn)品[7-8]，所測(cè)試目標(biāo)物質(zhì)為瘧原蟲(chóng)的蛋白和代謝過(guò)程所產(chǎn)生的酶，蛋白為富含組氨酸蛋白II（HRP II），酶為醛縮酶（ALD&ALS）和乳酸脫氫酶（pfLDH &panLDH）兩種，這些瘧原蟲(chóng)抗原用其制成單克隆抗體后包被在硝酸纖維膜上來(lái)檢測(cè)瘧疾患者血中的蛋白或酶[9]。目前國(guó)內(nèi)報(bào)道現(xiàn)場(chǎng)使用的產(chǎn)品分為國(guó)內(nèi)和國(guó)外兩種產(chǎn)品，同時(shí)分有檢測(cè)HRP II 和p-LDH檢測(cè)試劑卡及pfLDH和panLDH試劑卡兩種快速檢測(cè)試劑卡，HRP II 抗原為瘧原蟲(chóng)合成的一種水溶性蛋白，即使血液中蟲(chóng)體被清除后，該蛋白仍然會(huì)在血液中存在一段時(shí)間，據(jù)臨床觀察15d仍然檢測(cè)為陽(yáng)性[10]，而pLDH是瘧原蟲(chóng)的一種循環(huán)抗原，僅有活性蟲(chóng)體產(chǎn)生，pLDH 的活性與瘧原蟲(chóng)血癥水平一致，在抗瘧藥治療后2～4d，采用pLDH快速檢測(cè)試劑卡檢測(cè)結(jié)果為陰性[11]。本研究對(duì)鏡檢和快速檢測(cè)試劑卡檢測(cè)陽(yáng)性患者同時(shí)檢測(cè)了患者血液中的乳酸脫氫酶，初步的研究顯示，乳酸脫氫酶增高的患者僅為44.44%，這或許與患者體內(nèi)瘧原蟲(chóng)密度高低有關(guān)以及患者其它疾病引起該酶的增高，作為判斷為瘧疾患者存在較大的差異。關(guān)于快速檢測(cè)試劑卡檢測(cè)142例鏡檢陽(yáng)性患者中出現(xiàn)7例陰性患者也可能由于瘧原蟲(chóng)密度過(guò)低相關(guān)。本次研究檢測(cè)顯示，瘧疾患者采用鏡檢與快速診斷試劑卡兩種方法比較統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，該快速瘧原蟲(chóng)檢測(cè)試劑對(duì)瘧原蟲(chóng)鏡檢技術(shù)掌握不熟練的醫(yī)療機(jī)構(gòu)是一種較好的輔助檢測(cè)試劑。國(guó)外與國(guó)內(nèi)瘧原蟲(chóng)快速檢測(cè)試劑檢測(cè)效果國(guó)內(nèi)學(xué)者進(jìn)行過(guò)現(xiàn)場(chǎng)比較研究，結(jié)果顯示兩者無(wú)差異[12-13]。采用瘧疾快速診斷試劑盒對(duì)國(guó)內(nèi)外瘧疾患者的檢測(cè)觀察結(jié)果表明[14-15]，與瘧原蟲(chóng)鏡檢相比該診斷試劑盒的優(yōu)勢(shì)是操作簡(jiǎn)單、無(wú)需任何儀器設(shè)備、檢測(cè)所需時(shí)間短、檢測(cè)結(jié)果判斷容易，對(duì)瘧原蟲(chóng)鏡檢技術(shù)掌握不熟練的醫(yī)療機(jī)構(gòu)及基層醫(yī)院是一種瘧疾患者診斷較好的輔助檢測(cè)試劑。endprint

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（收稿日期：2017-05-15）endprint