鄧康麗，葛利本，陳玉丙，閆文星，吳達(dá)軍

(1.三六三醫(yī)院體部伽馬刀治療中心，四川 成都 610041；2.吉林省人民醫(yī)院放療科，吉林 長(zhǎng)春 130021；3.吉林大學(xué)第二醫(yī)院放療科，吉林 長(zhǎng)春 130041)

白介素-17對(duì)人宮頸腺癌細(xì)胞株HeLa體外增殖的影響

鄧康麗1，葛利本2，陳玉丙3，閆文星3，吳達(dá)軍1

(1.三六三醫(yī)院體部伽馬刀治療中心，四川 成都 610041；2.吉林省人民醫(yī)院放療科，吉林 長(zhǎng)春 130021；3.吉林大學(xué)第二醫(yī)院放療科，吉林 長(zhǎng)春 130041)

目的觀察IL-17對(duì)人宮頸腺癌細(xì)胞株HeLa細(xì)胞體外增殖的影響，并探討可能的機(jī)制。方法分別采用0、1、10 、50 、100 ng/ml的rIL-17刺激人宮頸腺癌HeLa細(xì)胞24小時(shí)，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，根據(jù)篩選出的濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。用rIL-17(0、50、100 ng/ml)刺激經(jīng)饑餓誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞24小時(shí)，F(xiàn)CM法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；用rIL-17刺激細(xì)胞48小時(shí)，檢測(cè)促血管生成因子VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)量。結(jié)果rIL-17刺激細(xì)胞一定時(shí)間后，1、10及100 ng/ml濃度組細(xì)胞增殖無明顯變化，50 ng/ml組細(xì)胞增殖明顯增加(P< 0.01)；50 ng/ml組細(xì)胞的晚期凋亡率和總凋亡率較正常對(duì)照組均明顯下降(P< 0.01；P< 0.05)，100 ng/ml組細(xì)胞下降更為顯著(P< 0.01)；50 ng/ml和100 ng/ml兩組細(xì)胞內(nèi)VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)量均升高，以50 ng/ml組最為明顯(P< 0.05)。結(jié)論IL-17可能通過抑制細(xì)胞凋亡及上調(diào)VEGF mRNA和蛋白水平的表達(dá)促進(jìn)宮頸腺癌HeLa細(xì)胞體外增殖。

白細(xì)胞介素-17；宮頸腫瘤；細(xì)胞增殖；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

宮頸癌是全球女性第二大常見且死亡率極高的惡性腫瘤，每年有超過27萬人死于宮頸癌[1]。其中，宮頸腺癌約占宮頸癌總數(shù)的15%，預(yù)后較差，發(fā)病率穩(wěn)中有升，尤其在年輕女性[2]。其具有與鱗癌不同的生長(zhǎng)模式、分子基礎(chǔ)和放化療敏感性[3]，影響疾病的進(jìn)展及預(yù)后。因此，發(fā)現(xiàn)新的疾病監(jiān)測(cè)指標(biāo)和找到新的治療策略迫在眉睫。

白細(xì)胞介素17(IL-17)是1993年發(fā)現(xiàn)的一種功能強(qiáng)大的炎癥因子，參與機(jī)體特異和非特異性免疫。研究表明其在多種惡性腫瘤中過表達(dá)。但在癌癥中的作用及內(nèi)在機(jī)制尚未完全闡明[4]，其發(fā)揮促瘤還是抑瘤作用，尚有爭(zhēng)議[4，5]。HPV病毒感染是宮頸癌最重要的致病因素，尤其是HPV-16/18基因型[6，7]，但只有少數(shù)HPV感染導(dǎo)致持續(xù)病變或進(jìn)展為惡性腫瘤，這意味著必定存在其他因素參與其發(fā)病機(jī)制[8]。目前研究認(rèn)為炎癥在腫瘤進(jìn)展中起重要作用[5]。國(guó)內(nèi)外關(guān)于IL-17與宮頸癌關(guān)系的報(bào)道甚少，尚未證實(shí)其是否可以促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖。本文通過體外實(shí)驗(yàn)，觀察IL-17對(duì)宮頸腺癌HeLa細(xì)胞增殖的影響，探討其可能的內(nèi)在機(jī)制，為IL-17在宮頸腺癌的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1主要材料及儀器人宮頸腺癌細(xì)胞株HeLa由吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院唐敖慶特聘教授實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)；重組人白細(xì)胞介素17(rIL-17)購自美國(guó)Peprotech公司；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)一抗、山羊抗兔二抗、山羊抗鼠二抗、β-Actin一抗購自美國(guó)ABGENT公司；流式細(xì)胞儀購自美國(guó)Sigma公司；RT-PCR 擴(kuò)增儀購自美國(guó)ABI公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) 用10%FBS的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，于5% CO2，37 ℃的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 實(shí)驗(yàn)前一天換液，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.2.2MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HeLa細(xì)胞增殖情況 選對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，按每孔4×103個(gè)細(xì)胞200 μl培養(yǎng)液的濃度接種于96孔板，按rIL-17的濃度設(shè)5個(gè)組：0 (空白對(duì)照組)、1、10、50、100 ng/ml，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。次日用不同濃度的rIL-17低血清培養(yǎng)液(含2% FBS的DMEM)200 μl繼續(xù)培養(yǎng)24 h，取出96孔板，每孔加入20 μl無菌MTT(5 mg/ml)孵育4 h，吸棄孔板內(nèi)的培養(yǎng)液，每孔中加入150 μl DMSO，在室溫下震蕩10 min，用酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm波長(zhǎng)處每孔的吸光度值(OD)，根據(jù)吸光度值，計(jì)算細(xì)胞相對(duì)增殖率(RGR)，RGR=(實(shí)驗(yàn)組OD值均值/空白對(duì)照組OD均值)×100%。

1.2.3FCM法檢測(cè)HeLa細(xì)胞凋亡情況 將細(xì)胞按每孔2.5 ml培養(yǎng)液中含2×105個(gè)細(xì)胞接種于6孔板，根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果篩選的IL-17刺激濃度，設(shè)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組(空白對(duì)照組、50 ng/ml rIL-17組、100 ng/ml rIL-17組)及3個(gè)調(diào)試組。調(diào)試組用于上機(jī)檢測(cè)前調(diào)試儀器，由3組正常細(xì)胞組成。次日，用含相應(yīng)濃度rIL-17的無血清培養(yǎng)液2.5 ml饑餓培養(yǎng)24 h。分別收集各組細(xì)胞，1 h內(nèi)完成上機(jī)檢測(cè)。

1.2.4RT-PCR法檢測(cè)HeLa 細(xì)胞VEGF mRNA表達(dá) 將細(xì)胞按每孔2.5 ml培養(yǎng)液中含1×105個(gè)細(xì)胞接種于6孔板中，同前設(shè)3個(gè)組，次日用不同濃度的rIL-17低血清培養(yǎng)液2.5 ml培養(yǎng)細(xì)胞48 h，分組收集細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA，將總RNA電泳和測(cè)定濃度后，用RT-PCR法擴(kuò)增目的基因片段。逆轉(zhuǎn)錄條件：37 ℃反應(yīng)1 h，將逆轉(zhuǎn)錄的cDNA作為模板，PCR擴(kuò)增獲得目的基因片段，人VEGF-A基因上游引物序列：ATGACGAGGGCCTGGAGTGTG，下游引物序列：CCTATGTGCTGGCCTTGGTGAG，產(chǎn)物91 bp；人 GAPDH(內(nèi)參)基因上游引物序列：TGTTGCCATCAATGACCCCTT，下游引物序列：CTCCACGACGTACTCAGCG，產(chǎn)物202 bp。PCR擴(kuò)增條件：94 ℃預(yù)變性2 min；94 ℃變性30 s、58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共30個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸7 min。PCR結(jié)束后，取產(chǎn)物電泳檢測(cè)，電泳結(jié)束，用BIO-RAD凝膠成像分析儀照相及Quantity One軟件進(jìn)行灰度分析，VEGF mRNA的表達(dá)量=VEGF條帶灰度值/GADPH(內(nèi)參)條帶灰度值。

1.2.5Western blot法檢測(cè)HeLa細(xì)胞VEGF蛋白的表達(dá) 將細(xì)胞按每孔2.5 ml培養(yǎng)液中含2×105個(gè)細(xì)胞的密度接種至6孔板，同前設(shè)3個(gè)組。次日用相應(yīng)濃度的rIL-17低血清培養(yǎng)液2.5 ml繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞48 h，分別收集各組細(xì)胞，采用反復(fù)凍融的方法提取細(xì)胞總蛋白，蛋白定量后，行SDS-PAGE分離蛋白，并將蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜上，4 ℃封閉過夜后，根據(jù)蛋白Marker的指示，剪下目的條帶及β-actin內(nèi)參條帶所在的膜并標(biāo)記膜的正反面，目的條帶加入一抗兔抗人VEGF多克隆抗體(1：250稀釋)，搖床上37 ℃孵育2.5 h后，加入二抗辣根過氧化物酶(HPR)標(biāo)記山羊抗兔多克隆抗體(1：2000 稀釋)，搖床上37 ℃孵育2 h，以β-actin作為對(duì)照，β-actin內(nèi)參條帶加入內(nèi)參蛋白一抗(1：2000 稀釋)，搖床上37 ℃孵育2.5 h后，加入二抗HRP標(biāo)記山羊抗鼠多克隆抗體(1：2000 稀釋)，37 ℃孵育2 h，最后采用ECL顯色，通過Quantitiy One灰度分析軟件進(jìn)行分析，VEGF蛋白量= VEGF 條帶灰度值/β-actin(內(nèi)參)條帶灰度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩均數(shù)間比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HeLa細(xì)胞增殖情況實(shí)驗(yàn)組OD值均大于正常對(duì)照組，RGR均大于100%，其中50 ng/ml組OD值及RGR顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)，其它濃度對(duì)細(xì)胞的增殖影響不顯著(P> 0.05)，見表1。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并結(jié)合IL-17在其他瘤種的研究情況，選擇50、100 ng/ml兩個(gè)濃度組完成后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

表1 MTT法測(cè)定不同濃度rIL-17刺激24 h后HeLa細(xì)胞的增殖情況

與空白對(duì)照組相比，*P< 0.01

2.2FCM法檢測(cè)HeLa細(xì)胞凋亡情況50、100 ng/ml組細(xì)胞晚期凋亡率及總凋亡率均明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，50、100 ng/ml組的早期凋亡率，相比于對(duì)照組，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2，圖1)。

表2 FCM 法檢測(cè)rIL-17 刺激24 h后HeLa細(xì)胞的凋亡情況 (%)

與空白對(duì)照組相比，*P< 0.05，**P< 0.01

2.3VEGFmRNA和蛋白的表達(dá)情況實(shí)驗(yàn)組中細(xì)胞VEGF mRNA(表3，圖2a)及蛋白的表達(dá)量(表4，圖2b)均高于對(duì)照組，以50 ng/ml 組最為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)。

表3 rIL-17處理48 hVEGF的表達(dá)情況

與空白對(duì)照組比較，*P< 0.05

圖1 流式細(xì)胞儀測(cè)定rIL-17刺激 24 h后HeLa細(xì)胞凋亡情況

圖2 VEGFmRNA和蛋白的表達(dá)水平 a：RT-PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)；b：Western blot法檢測(cè)蛋白表達(dá) (1：空白對(duì)照組；2：50 ng/ml rIL-17組；3：100 ng/ml rIL-17組)

3 討論

大量研究證明炎癥在腫瘤進(jìn)展中起重要作用[5]，而IL-17作為功能強(qiáng)大的炎癥因子，在腫瘤的進(jìn)展中扮演著重要角色[9]。但關(guān)于IL-17與宮頸癌的關(guān)系，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道較少。1999年，Tartour 等[8]用IL-17cDNA轉(zhuǎn)染宮頸癌HeLa細(xì)胞再移植到裸鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)腫瘤顯著地生長(zhǎng)。Vidal 等[10]檢測(cè)宮頸癌標(biāo)本發(fā)現(xiàn)，相比于感染其它基因型，IL-17在感染HPV-16/18的宮頸癌組織中高表達(dá)。近年研究認(rèn)為[11]，IL-17和其它細(xì)胞因子如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)，IL-6，IL-23一起促進(jìn)Th17/Treg比值失衡，并通過影響Th17/Treg失衡促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。Zhang 等[12]研究同樣發(fā)現(xiàn)Th17/Treg失衡可能參與宮頸癌的發(fā)展進(jìn)程。但該研究并未闡明IL-17在此過程中的作用。Punt[13]在宮頸鱗癌的研究中發(fā)現(xiàn)IL-17的增高與疾病的不良預(yù)后顯著相關(guān)，而Th17細(xì)胞與宮頸鱗癌患者生存改善密切相關(guān)。國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)表明宮頸癌患者血清中IL-17的水平較健康對(duì)照組明顯升高，IL-17水平與腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)，與疾病分期成正相關(guān)[14]。HPV陽性宮頸癌患者血清中IL-17的含量比陰性患者明顯增高[15]。近年的研究更多集中在Th17細(xì)胞(IL-17的主要來源)。對(duì)于IL-17是否參與宮頸癌尤其是感染高危型HPV腺癌的發(fā)病機(jī)制還不清楚。

實(shí)驗(yàn)中，MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)各濃度組IL-17均可以促進(jìn)宮頸腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。然而，細(xì)胞表現(xiàn)為凈生長(zhǎng)的結(jié)果與凋亡關(guān)系密切，考慮OD值反應(yīng)的是活細(xì)胞的數(shù)量，所以根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們篩選出50、100 ng/ml 兩種濃度檢測(cè)IL-17對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種濃度均可明顯抑制細(xì)胞凋亡，并呈劑量依賴，提示IL-17可以促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡，與國(guó)外的多數(shù)研究結(jié)果一致。

對(duì)于IL-17如何促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，研究認(rèn)為，IL-17可以通過上調(diào)IL-6的表達(dá)促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)[8]。IL-17也可通過IL-17-MMP7信號(hào)軸促進(jìn)前列腺癌的發(fā)展，并且該信號(hào)軸是前列腺上皮內(nèi)瘤變進(jìn)展到前列腺癌所必需的[16]。Wang等[17]的研究證實(shí)，IL-17可直接刺激腫瘤細(xì)胞分泌IL-6，上調(diào)促血管生成因子VEGF的表達(dá)而促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。在結(jié)腸癌組織中，VEGF及其受體水平升高和微血管密度的變化，與IL-17和IL-17RA(IL-17A的受體)水平升高密切相關(guān)，外源性IL-17可以刺激多種結(jié)直腸癌細(xì)胞株上調(diào)VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)，并呈濃度依賴，表明IL-17可能是通過上調(diào)VEGF表達(dá)促進(jìn)腫瘤血管生成進(jìn)而促進(jìn)結(jié)直腸癌的演進(jìn)[18，19]。VEGF是現(xiàn)階段發(fā)現(xiàn)的效果最強(qiáng)的促血管生成因子，在啟動(dòng)及調(diào)節(jié)各種腫瘤新生血管形成過程中起關(guān)鍵性作用，該種促血管生成因子的表達(dá)水平反映了腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和腫瘤內(nèi)血管構(gòu)建的水平，可直接反映腫瘤的生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)移傾向，故我們選擇觀察VEGF的表達(dá)情況，以便更直觀的了解IL-17與宮頸癌細(xì)胞增殖的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)IL-17刺激48小時(shí)后，50 、100 ng/ml兩個(gè)濃度組細(xì)胞VEGF mRNA和蛋白水平的表達(dá)量均增高，以50 ng/ml組作用最為明顯(P< 0.05)。這與文獻(xiàn)報(bào)道的IL-17在結(jié)腸癌、鼠黑色素瘤等中的研究結(jié)果一致。

綜上，IL-17可能通過抑制細(xì)胞凋亡、上調(diào)VEGF mRNA和蛋白水平的表達(dá)的方式，間接促進(jìn)宮頸腺癌HeLa細(xì)胞的體外增殖。我們推測(cè)感染高危型HPV的宮頸腺癌，IL-17在其疾病進(jìn)展中起重要作用，IL-17可能通過抑制腫瘤細(xì)胞凋亡及促進(jìn)腫瘤血管生成的方式促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。但是IL-17能否作為預(yù)測(cè)宮頸腺癌進(jìn)展的良好指標(biāo)，以及是否可以通過抗IL-17靶向治療宮頸腺癌，還需要大量的基礎(chǔ)及臨床研究。

[1] Yang B，Lu Y，Zhang A，et al.Doxycycline Induces Apoptosis and Inhibits Proliferation and Invasion of Human Cervical Carcinoma Stem Cells[J].PLoS One，2015，10(6)：e0129138.

[2] Punt S，van Vliet ME，Spaans VM，et al.FoxP3(+) and IL-17(+) cells are correlated with improved prognosis in cervical adenocarcinoma[J].Cancer Immunol Immunother，2015，64(6)：745-753.

[3] Gien LT，Beauchemin MC，Thomas G.A denocarcinoma：a unique cervical cancer[J].Gynecol Oncol，2010，116(1)：140-146.

[4] Hayata K，Iwahashi M，Ojima T，et al.Inhibition of IL-17A in tumor microenvironment augments cytotoxicity of tumor-infiltrating lymphocytes in tumor-bearing mice[J].PLoS One，2013，8(1)：e53131.

[5] Parajuli P，Mittal S.Role of IL-17 in glioma progression[J].J Spine Neurosurg，2013，Suppl 1：S1-004.

[6] Meloni A，Pilia R，Campagna M，et al.Prevalence and molecular epidemiology of human papillomavirus infection in italian women with cervical cytological abnormalities[J].J Public Health Res，2014，3(1)：157.

[7] Bateman AC，Katundu K，Polepole P，et al.Identification of human papillomaviruses from formalin-fixed，paraffin-embedded pre-cancer and invasive cervical cancer specimens in Zambia：a cross-sectional study[J].Virol J，2015，12：2.

[8] Tartour E，F(xiàn)ossiez F，Joyeux I，et al.Interleukin 17，a T-cell-derived cytokine，promotes tumorigenicity of human cervical tumors in nude mice[J].Cancer Res，1999，59(15)：3698-3704.

[9] Kuang DM，Zhao Q，Wu Y，et al.Peritumoral neutrophils link inflammatory response to disease progression by fostering angiogenesis in hepatocellular carcinoma[J].J Hepatol，2011，54(5)：948-955.

[10]Vidal AC，Skaar D，Maguire R，et al.IL-10，IL-15，IL-17，and GMCSF levels in cervical cancer tissue of Tanzanian women infected with HPV16/18 vs.non-HPV16/18 genotypes[J].Infect Agent Cancer，2015，10：10.

[11]Chen Z，Ding J，Pang N，et al.The Th17/Treg balance and the expression of related cytokines in Uygur cervical cancer patients[J].DiaqnPathol，2013，8：61.

[12]Zhang Y，Ma D，Zhang Y，et al.The imbalance of Th17/Treg in patients with uterine cervical cancer[J].ClinChim Acta，2011，412(11-12)：894-900.

[13]Punt S，F(xiàn)leuren GJ，Kritikou E，et al.Angels and demons：Th17 cells represent a beneficial response，while neutrophil IL-17 is associated with poor prognosis in squamous cervical cancer[J].Oncoimmunology，2015，4(1)：e984539.

[14]宋利.宮頸癌患者血清中IL-17水平的檢測(cè)及臨床意義[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，39(19)：4966-4967.

[15]張哲雄，徐承來，曹永濤.高危型人乳頭狀病毒和IL-17在宮頸病變患者宮頸脫落細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性和臨床意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2012，16(2)：252-254.

[16]Zhang Q，Liu S，Ge D，et al.Interleulin-17 promotes formation and growth of prostate adenocarcinoma in mouse models[J].Cancer Res，2012，72(10)：2589-2599.

[17]Wang L，Yi T，Kortylewski M，et al.IL-17 can promote tumor growth through an IL-6-Stat3 signaling pathway[J].J Exp Med，2009，206(7)：1457-1464.

[18]Xie Z，Qu Y，Leng Y，et al.Human colon carcinogenesis is associated with increased interleukin-17-driven inflammatory responses[J].Drug Des Devel Ther，2015，9：1679-1689.

[19]Liu J，Duan Y，Cheng X，et al.IL-17 is associated with poor prognosis and promotesangiogenesis via stimulating VEGF production of cancer cells incolorectal carcinoma[J].Biochem Biophys Res Commun，2011，407(2)：348-354.

EffectofIL-17onproliferationofhumancervicaladenocarcinomacelllineHeLainvitro

DENGKang-li1，GELi-ben2，CHENYu-bing3，YANWen-xing3，WUDa-Jun1

(1.DepartmentofBodyGammaKnifeTreatmentCenter，363Hospital，Chengdu610042，China；2.DepartmentofRadiotherapy，JilinProvincialPeople’sHospital，Changchun130021，China；3.DepartmentofRadiotherapy，TheSecondHospitalofJilinUniversity，Changchun130041，China)

ObjectiveTo explore the effect of IL-17 on proliferation of human cervical adenocarcinoma cell line HeLa in vitro and the underlying mechanisms of the effect.MethodsFirst，human cervical adenocarcinoma cell line HeLa was stimulated with varying concentrations of rIL-17 (0，1，10，50 to 100 ng/ml) for 24 hours.The proliferation rate was detected by a MTT assay.Then，following experiments were carried out according to the selected concentrations of rIL-17.The induced apoptosis cells by starvation were stimulated with rIL-17 (0，50 and 100 ng/ml) for 24 h，the apoptosis was detected by flow cytometry.RT-PCR and Western blot were used to detect the expression of VEGF at mRNA and protein levels after 48 h of cell stimulation by rIL-17.ResultsAfter stimulation by rIL-17 for a certain period of time，cells proliferation in the 1，10 and 100 ng/ml concentration groups of rIL-17 had no significant changes，but proliferation rate in the 50 ng/ml group was increased significantly (P< 0.01).The late apoptosis rate and total apoptosis rate in 50 ng/ml group were significantly decreased when compared with the normal control group (P< 0.01 and < 0.05，respectively)，and the late apoptosis and total apoptosis rate of cells in the 100 ng/ml group were decreased more significantly (allP< 0.01).The production of VEGF mRNA and protein in both the 50 ng/ml and 100 ng/ml，especially in 50 ng/ml group，were increased when compared with the control group (P< 0.05).ConclusionIL-17 could promote the proliferation of cervical adenocarcinoma cell line HeLa in vitro by inhibiting apoptosis and up-regulating the production of VEGF mRNA and protein.

Interleukin-17(IL-17)；Cervical neoplasia；Cell proliferation；Vascular endothelial growth factor

R737.33

A

1672-6170(2017)05-0070-04

2016-12-11；

2017-06-23)