李宜樺，邰艷妮，吳獻(xiàn)，林青青，戴成球，謝瑞華，徐偉，褚克丹

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.福建承天藥業(yè)有限公司，福建南平353000）

閩產(chǎn)澤瀉收獲期不同部位萜類成分含量比較

李宜樺1，邰艷妮1，吳獻(xiàn)1，林青青1，戴成球1，謝瑞華2，徐偉1，褚克丹1

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.福建承天藥業(yè)有限公司，福建南平353000）

目的考察收獲期澤瀉不同部位萜類成分含量并進(jìn)行含量比較。方法以23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B為指標(biāo)，采用高效液相色譜法Agilent Technologies 1260系統(tǒng)，Ultimate XB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相乙腈∶水（75∶25），檢測波長208 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫30℃。結(jié)果收獲期澤瀉23-乙酰澤瀉醇B的含量為芽＞塊莖＞莖＞塊莖莖皮＞須根＞葉，而澤瀉醇B的含量為塊莖＞芽＞塊莖莖皮＞莖，須根和葉中未檢出。結(jié)論收獲期澤瀉不同部位在兩種萜類成分含量存有差異，其中塊莖和芽中23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B含量最高，其含量顯著高于其它部位，收獲期枯萎丟棄的莖和莖皮中也分布有23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B，說明其可能也具有一定的藥用價值，具有開發(fā)利用的潛在價值。

澤瀉；23-乙酰澤瀉醇B；澤瀉醇B；含量測定

澤瀉（Alismatis Rhizoma）來源于澤瀉科澤瀉屬植物東方澤瀉Alisma orientale（Sam.）Juzep.，其性甘、淡、寒，具有泄熱、利水滲濕等功效。臨床上經(jīng)過組方，常用于小便不利、痰飲眩暈、高脂血癥等［1］，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明澤瀉有降血脂、降糖、抗脂肪肝、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤等作用［2-4］?，F(xiàn)代化學(xué)研究表明澤瀉化學(xué)成分以三萜類為主［5］，藥理活性研究表明三萜類成分是澤瀉最主要的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)［6］，而活性報道比較多的為23-乙酰澤瀉醇B、澤瀉醇B、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇A。另據(jù)文獻(xiàn)Zhao［7］、趙萬里等［8］澤瀉三萜多成分的定性定量研究表明澤瀉中23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B是澤瀉的最主要有效成分，并且23-乙酰澤瀉醇B也是中國藥典中澤瀉的指標(biāo)性成分，因此23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B是常常作為評價澤瀉質(zhì)量的主要指標(biāo)［9-11］。

澤瀉自古以來藥用部位均為塊莖。冬季莖葉開始枯萎時采挖地下塊莖部分，洗凈，干燥，以除去須根和莖皮后的塊莖入藥。收獲期采收時，澤瀉地上部分沒有利用，除去的須根和莖皮中是否有澤瀉的有效成分，鮮有研究。因此為了評價收獲期建澤瀉不同部位的活性成分含量，本文采用HPLC法對采收期建澤瀉須根、塊莖莖皮、莖、葉、芽及塊莖6個部位中的23-乙酰澤瀉醇B及澤瀉醇B含量進(jìn)行測定研究，為綜合利用澤瀉資源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent Technologies 1260型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；Agilent Chem Station工作站；CPA225D型十萬分之一分析天平（德國Sartorius公司）；KQ－500E臺式超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q超純水儀（美國Milli-pore公司）；乙腈為色譜純（德國Merck公司）；水為超純水，其它試劑為分析純。23-乙酰澤瀉醇B對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111846-201504）；澤瀉醇B對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號：18649-93-9）。

按照GAP生產(chǎn)規(guī)范，收獲期澤瀉采自福建建甌吉陽澤瀉GAP基地（2017年1月16日，北緯27° 7′，東經(jīng)118°7′，福建承天藥業(yè)有限公司），在種植基地內(nèi)隨機(jī)采集6個位置點(diǎn)，每個點(diǎn)不少于6株。所有樣品匯總后，地上部分分為莖和葉，地下部位收集最外層塊莖莖皮、塊莖須根、干凈塊莖及塊莖的頂芽，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物實(shí)驗(yàn)室范世明高級實(shí)驗(yàn)師鑒定為澤瀉科澤瀉屬植物東方澤瀉（Alisma orientale（Sam.）Juzep.），樣本存放于福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥用植物學(xué)標(biāo)本室。收獲期澤瀉各個部位經(jīng)過干燥，粉碎，過65目篩，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液制備取澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B對照品適量，精密稱定，加入乙腈分別制備含60 μg·mL-1、79.6 μg·mL-1的單一對照品溶液。

2.2 供試品溶液制備精密稱取收獲期澤瀉不同部位（莖、葉、塊莖莖皮、須根、塊莖及芽）粉末各0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入乙腈25 mL，密塞，超聲處理30 min（功率250 W，頻率50 kHz），放冷，稱定超聲處理前后兩次的重量，用乙腈補(bǔ)足超聲提取減失的重量；搖勻，0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得測試樣品。

2.3 色譜條件采用Ultimate XB-C18（4.6 mm× 150 mm，5 μm）色譜柱；以乙腈-水（75∶25）為流動相，柱溫：30℃，流速：1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量：10 μL。該色譜條件下色譜峰分離良好，見圖1～圖3。

圖1 澤瀉醇B對照品HPLC色譜圖

圖2 23-乙酰澤瀉醇B對照品HPLC色譜圖

圖3 澤瀉樣品HPLC色譜圖

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性與范圍分別精密吸取澤瀉醇B和 23-乙酰澤瀉醇B對照品溶液，用乙腈稀釋制備澤瀉醇B質(zhì)量濃度為0.60、3、6、15、30、60 μg·mL-1，23-乙酰澤瀉醇B質(zhì)量濃度為0.796、3.98、7.96、19.9、39.8、79.6 μg·mL-1的6種不同質(zhì)量濃度對照品溶液，按“2.3”色譜條件下進(jìn)行分析，分別記錄檢測峰面積，以峰面積（Y）對待測成分質(zhì)量濃度（X，μg·mL-1）進(jìn)行線性回歸，得澤瀉醇B的線性方程為：Y＝78.43X＋19.75（r＝0.999 4），23-乙酰澤瀉醇B的線性方程為：Y＝78.29X＋15.45（r＝0.999 7）。結(jié)果表明在考察的線性范圍內(nèi)，待測成分峰面積和質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好。

2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B對照品溶液，在“2.3項(xiàng)”色譜條件下進(jìn)行分析，連續(xù)檢測6次，記錄澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的峰面積，計算兩者RSD分別為0.72%和0.47%，表明實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取澤瀉塊莖供試品0.5 g，按照“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，分別于1、2、4、8、12、24 h在“2.3項(xiàng)”色譜條件下對樣品進(jìn)行分析，記錄澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的峰面積，計算兩者RSD分別為1.02%和1.38%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同批次澤瀉塊莖供試品0.5 g，按照“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，平行操作6份，分別于“2.3項(xiàng)”色譜條件下對樣品進(jìn)行分析，記錄澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的峰面積，計算兩者含量，兩者含量的RSD分別為2.14%和2.05%，表明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.4.5 回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)批次澤瀉樣品0.25 g，6份，根據(jù)含量加入近似1∶1的澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B對照品，按照“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，分別于“2.3項(xiàng)”色譜條件下對樣品進(jìn)行分析，記錄澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的峰面積，計算回收率及RSD，結(jié)果見表1。表1表明檢測方法回收率實(shí)驗(yàn)符合分析要求。

表1 加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.5 樣品含量測定精密稱取收獲期澤瀉塊莖莖皮、須根、莖、葉、芽及塊莖各0.5 g，按“2.2項(xiàng)”下方法制備供試品溶液，每個部位制備3份供試品液，分別于“2.3項(xiàng)”色譜條件下對樣品進(jìn)行分析，記錄澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的峰面積，計算其含量，見表2。

表2 各樣品中2種成分的平均含量（n＝3，mg／g）

3 討論

本研究通過對澤瀉萜類成分文獻(xiàn)分析，最終選擇活性明顯、含量較高的澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B作為檢測指標(biāo)；色譜條件經(jīng)過考察，發(fā)現(xiàn)Ultimate色譜柱分離效果最佳，乙腈-水作為流動相優(yōu)于甲醇-水的分離效果；采用光電二極管陣列檢測器，對澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B對照品溶液進(jìn)行全波長掃描（190～400 nm），表明澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B在掃描波長范圍內(nèi)為末端吸收，故采用208 nm波長作為檢測波長。

本次的測定結(jié)果顯示：收獲期澤瀉不同部位中澤瀉醇B含量在0.065～0.531 mg／g（其中須根和葉中含量最低且須根和葉中的澤瀉醇B含量無法檢出），而23-乙酰澤瀉醇B含量則在0.089～2.781 mg／g，不同部位23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B的含量存在顯著性差異，澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B含量在塊莖和芽中高，分別達(dá)到0.531、1.578 mg／g與0.459、2.781 mg／g，遠(yuǎn)高于須根、莖皮、莖和葉。收獲期澤瀉23-乙酰澤瀉醇B的含量高低依次為芽＞塊莖＞莖＞塊莖莖皮＞須根＞葉，而澤瀉醇B的含量為塊莖＞芽＞塊莖莖皮＞莖，須根和葉中未檢出。

查閱文獻(xiàn)，目前對于收獲期澤瀉的不同部位萜類成分含量比較鮮有研究報道，但是對于澤瀉采收期塊莖的萜類活性成分的積累已有研究：1998年文紅梅等［12］研究川澤瀉最佳采收期后認(rèn)為：萜類成分在1-3月基本一致，而4月以后含量升高；2007年劉紅昌等［13-14］對不同育苗期、移栽期和采收期川澤瀉萜類成分積累、質(zhì)量變化進(jìn)行細(xì)致研究后認(rèn)為：澤瀉最佳采收期為12月下旬；而蔣軼倫等［15］采用指紋圖譜和萜類成分含量測定相結(jié)合的方法，考察了閩產(chǎn)GAP基地建澤瀉移栽之后80～144 d共計10個采樣點(diǎn)的動態(tài)變化，結(jié)果表明指紋圖譜在澤瀉移栽122～144 d，即1月初到1月末的時候，指紋圖譜趨于穩(wěn)定，從兩種萜類成分含量積累來看，同樣也是122～144 d，即1月初到1月末的時候含量積累達(dá)到最高值。因此，根據(jù)文獻(xiàn)的調(diào)研結(jié)果及GAP基地的生產(chǎn)規(guī)范，本研究取地上部分及不同部位研究的時間選擇吉陽GAP采收規(guī)范的采收期時間（1月中旬），采樣時間滿足收獲期樣品的實(shí)驗(yàn)要求，同時為了使研究樣品的具有足夠代表性，本實(shí)驗(yàn)樣品取自種植基地示范田的6個隨機(jī)位置，每個位置不少于6株，所有收集的樣品進(jìn)行匯總?cè)訙y定，能夠反映本年度基地收獲期澤瀉的不同部位萜類成分分布情況。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果，對于收獲期澤瀉的莖皮和莖，雖然兩者澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的含量偏少，但是這兩部分的生物量均較多，因此也可能具有一定的藥用價值，可以作為澤瀉萜類開發(fā)利用或棄物再利用的潛在部位。

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2017-07-05

國家中醫(yī)藥管理局項(xiàng)目（ZYBZH-Y-FJ-09）；福建省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項(xiàng)目（2017）

李宜樺（1993—），女，2015級中藥學(xué)專業(yè)碩士研究生，主要從事中藥質(zhì)量控制研究。

褚克丹（1963—），女，教授。E-mail：chukd5917@163.com