慕楊娜于珊珊谷麗艷

葉酸片的溶出度及其含量測定

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目的建立葉酸片的溶出度及其含量測定的方法。方法采用紫外-可見分光光度法測定葉酸片的溶出度，同時使用高效液相色譜（HPLC）法測定其含量。結果溶出度：精密度 RSD=0.94%，穩(wěn)定性 RSD=0.80%，紫外分光光度回收率為99.85±0.76，溶出量均在75%以上。含量：精密度RSD=0.59%，穩(wěn)定性RSD=0.53%，重復性RSD=0.66%，準確度RSD=0.91%，HPLC法回收率為99.32±0.87。結論采用紫外-可見分光光度法與HPLC法測定葉酸片的溶出度及其含量簡便、準確可靠，可用于控制該制劑的質量。

葉酸片；含量測定；溶出度

葉酸片的主成分為葉酸（Folic acid），由蝶啶、對氨基苯甲酸和L-谷氨酸組成，是B族維生素的一種，亦稱為維生素 BC或維生素 M。葉酸是人體在利用糖分和氨基酸時的必要物質，也是機體細胞生長和繁殖的必須物質[1]。葉酸片在臨床上常用于治療葉酸缺乏及葉酸缺乏導致的巨幼紅細胞貧血[2]，慢性溶血性貧血所致的葉酸缺乏等，哺乳期、妊娠期婦女預防給藥[3]，本實驗主要針對葉酸片制劑的溶出度和含量測定方法進行研究。

1 材料與儀器

1.1 材料樣品：葉酸片，批號：20080401、20080402、20080403，市售樣品：北京北大藥業(yè)有限公司，批號：S080304。對照品：中國生物制品檢定所提供，批號：100074-20041；試劑為分析純。

1.2 儀器智能藥物溶出儀：天津創(chuàng)興電子設備制造有限公司；紫外分光光度計：日立機械有限公司；高效液相色譜儀：大連依利特有限公司。

2 方法與結果

2.1 溶出度

2.1.1 檢測方法與測定波長的選擇采用分光光度法測定溶出度。稱取葉酸適量，加磷酸鹽溶液（pH 6.8）溶液制成約含4 μg/ml的溶液，在200～400 nm范圍掃描。結果顯示：在281 nm處本品有最大吸收，因此選擇281 nm作為檢測波長，空白輔料無干擾。

2.1.2 線性范圍試驗精密稱取葉酸對照品5.01 mg，置于250 ml量瓶，加適量磷酸鹽溶液（pH 6.8）溶解并稀釋至刻度。分別取上述溶液 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 ml置 10 ml量瓶中，加磷酸鹽溶液（pH 6.8），溶液稀釋至刻度，搖勻，參照分光光度法，在281 nm的波長處測定吸收度，計算回歸方程，繪制標準曲線。結果：回歸方程為：y=0.0617x+0.0043，R=0.9996，本品在1.002～16.032 μg/ml的濃度范圍內呈良好的線性關系。

2.1.3 溶出液穩(wěn)定性溶出度測定的樣品溶液室溫下放置8 h，在不同的時間點測定其吸收度。結果顯示：本品在磷酸鹽溶液（pH 6.8）中8 h內基本穩(wěn)定，RSD為0.80%。

2.1.4 精密度試驗不同的實驗人員 3人，分別取溶出度測定的樣品溶液，按照溶出度測定法連續(xù)測定6次，結果溶出液精密度RSD為0.94%。

2.1.5 準確度試驗精密稱取葉酸原料8、10、12 mg各3份，分別置10 ml容量瓶中，加適量磷酸鹽溶液（pH 6.8）稀釋至刻度，精密量4 ml，置于1000 ml量瓶，加入輔料（按處方量配制），加適量磷酸鹽溶液（pH 6.8）稀釋至刻度，按照溶出度測定方法，配置對照品溶液，取上述 3種對照品溶液參照分光光度法（《中國藥典》2005版二部附錄IV A），在281 nm波長處測定吸收度，計算回收率。結果：回收率在98.91%～100.12%之間，回收率符合規(guī)定，方法準確可靠，誤差在允許的范圍內。

2.1.6 自制樣品和市售樣品溶出曲線及溶出度對比取自制3批樣品和市售樣品各6片，參照溶出度測定法分別在不同的時間點測定溶出量，以時間為橫坐標，溶出量為縱坐標，繪制3批樣品和市售樣品的溶出度曲線，見表 1。結果顯示：自制樣品與市售樣品溶出模式相似，30 min時主藥的溶出量基本一致。

2.1.7 溶出度測定方法取本品，采用溶出度測定法（《中國藥典》2010版附錄Ⅹ C 第三法）[4]，使用磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）100 ml為溶出介質，轉速為每分鐘70轉，依法操作，經30 min，取溶液10 ml，濾過。取續(xù)濾液，采用紫外-可見分光光度法（中國藥典2005版二部附錄Ⅳ A），在281 nm處測定吸光度。取適量葉酸對照品，精密稱定，使用磷酸鹽緩沖液稀釋4 μg/ml的溶液[5]，同法測定吸光度，計算每片的溶出量[6]，見表2。結果顯示：本品3批樣品和市售樣品的溶出量均在 75%以上，現(xiàn)參考葉酸片國家標準的溶出度限度和本品的實測結果，暫定溶出限度為標示量的75%。

表1 自制樣品與市售樣品對比溶出試驗結果(%)

表2 3批樣品和市售樣品溶出度試驗結果

2.2 含量測定[7-9]

2.2.1 溶液的制備取葉酸50片，精密稱定，研細，精密稱取（相當于葉酸5 mg），置于25 ml量瓶，加0.5%氨溶液15 ml，置于熱水浴中加熱20 min，時時振搖溶解葉酸，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取5 mg葉酸對照品，精密稱定，置于25 ml量瓶，加0.5%氨溶液約15 ml，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為對照品溶液。

2.2.2 系統(tǒng)適應性試驗色譜條件：填充劑為十八烷基鍵合硅膠；流動相：磷酸二氫鉀6.8 g+0.1 mol/L氫氧化鉀70 ml，加水稀釋850 ml，調節(jié)pH值至6.3±0.1，加甲醇80 ml，用水稀釋至1000 ml。檢測波長：254 nm。取供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，理論塔板數(shù)按葉酸計算均不低于3000。

2.2.3 輔料干擾試驗取除去主藥的空白輔料配成空白輔料溶液，濾過，取續(xù)濾液10 μl，注入色譜儀。結果顯示：空白輔料對測定無干擾，見圖1。

圖1 HPLC圖譜

2.2.4 線性范圍考察精密稱取葉酸對照品10.01 mg，置25 ml的量瓶中，加入0.5%的氨溶液約15 ml，用水稀釋并刻度，分別精密量取上述溶液1、3、5、7、9 ml，置10 ml量瓶中，加入0.5%的氨溶液約6 ml，用水稀釋并刻度，精密量取10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，繪制標準曲線。結果：回歸方程為y=1E+0.7x－100 295，R=0.9990，進樣濃度在0.040 04～0.3604 mg/ml范圍內呈良好的線性關系。

2.2.5 精密度試驗不同的實驗人員 3人，分別取含量測定項下的供試品溶液，精密量取10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，連續(xù)測定 6次。結果：精密度符合規(guī)定，RSD為0.59%。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗取含量測定項下的供試品溶液，分別在不同的時間點，精密量取供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果：在8 h內穩(wěn)定，RSD為0.53%。

2.2.7 重復性試驗取本品 6份，按含量測定項下方法制成供試品溶液，精密量取10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算標示量。結果：重復性符合規(guī)定，RSD為0.66%。

2.2.8 準確度試驗精密稱取適量葉酸原料（葉酸40 mg、50 mg、60 mg）3份，分別置于10 ml量瓶，加0.5%氨溶液6 ml，加水稀釋至刻度，分別精密量取1 ml置25 ml量瓶中，加入處方量的相應輔料，參照含量測定方法操作，以測得量與加入量計算回收率。結果：本品的回收率在98.22%～101.49%之間，RSD為0.91%。

2.2.9 樣品含量測定試驗精密量取供試品溶液及對照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，按照外標法以峰面積計算，即得。三批樣品含量測定結果分別為 98.61%、100.96%、99.94%，市售樣品含量測定結果為97.68%。

3 結論

在本研究含量測定實驗中曾采用水作為葉酸的溶劑，結果發(fā)現(xiàn)，有關物質測定時保留時間在2～3 min有較大的溶劑峰出現(xiàn)，對葉酸的測定存在干擾，為此經實驗摸索確定采用流動相為葉酸的溶解試劑。實驗還發(fā)現(xiàn)，葉酸在流動相溶液中不穩(wěn)定，放置2天后雜質增加，為此測定時應在10 h內完成。

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10.12010/j.issn.1673-5846.2017.08.012

1遼寧中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院，遼寧沈陽 110034

2遼寧中醫(yī)藥大學，遼寧沈陽 110847

谷麗艷，E-mail：1458228050@qq.com