董海霞

(山東標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)有限公司 ， 山東 濟(jì)南 250101)

HPLC法測(cè)定利格列汀的S-異構(gòu)體

董海霞

(山東標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)有限公司 ， 山東 濟(jì)南 250101)

目的 ： 建立高效液相色譜法測(cè)定利格列汀原料藥中S-異構(gòu)體的方法。方法： 采用AD-H色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相為乙醇-乙醇胺(100:0.1)，柱溫為35℃，流速為0.4mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。結(jié)果： 利格列汀S-異構(gòu)體在0.0899～0.6744μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9996)，低、中、高濃度平均回收率分別為101.8%、98.4%、96.0%，RSD分別為1.68%、1.63%、1.40%(n=3)，檢出限為0.18ng，日內(nèi)、日間精密度RSD分別為3.4%和4.6%(n=6)。結(jié)論： 該方法靈敏、準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可作為利格列汀原料藥中的S-異構(gòu)體含量測(cè)定方法。

利格列??；S-異構(gòu)體；高效液相色譜法

利格列汀是一個(gè)每日1次給藥的二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制劑(在中國(guó)獲批，歐唐寧)，可在飲食控制和體育鍛煉的基礎(chǔ)上改善2型糖尿病(T2DM)成年患者的血糖控制水平[1-5]。這一新型治療藥物僅需每日口服一次5mg，就可帶來顯著的、可靠的血糖水平的改善[6]。對(duì)于分離利格列汀中S-異構(gòu)體的HPLC法報(bào)道相對(duì)較少，本文建立了測(cè)定列格列汀S-異構(gòu)體的HPLC法，該方法簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠,利格列汀S-異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 利格列汀S-異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)式

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(紫外檢測(cè)器，美國(guó)Aglient 1260)、高效液相色譜儀(Waters e2695，UV2489檢測(cè)器，)；紫外-可見分光光度計(jì)(美國(guó)Aglient 8453型)；超聲波儀(美國(guó)Branson 3510)；電子分析天平(德國(guó)Sartorius BT25S)；pH計(jì)(美國(guó)梅特勒-托利多儀器有限公司 Seven Easy)；乙醇、正己烷(天津市康科德科技有限公司，色譜純)，乙醇胺(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純)；水為蒸餾水。

利格列汀S-異構(gòu)體(批號(hào)20161201，含量98.8%)，自制；利格列汀原料藥(批號(hào)20170101、20170102、20170103)，自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：AD-H色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙醇-乙醇胺(100:0.1)；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm；流速為0.4mL·min-1；柱溫為35℃；進(jìn)樣量：20μL。理論塔板數(shù)以利格列汀S-異構(gòu)體計(jì)算為≥1500。

2.2 溶液配制與測(cè)定

2.2.1 溶劑

無水乙醇-正己烷(1：1)。

2.2.2 對(duì)照品溶液

精密稱取利格列汀S-異構(gòu)體對(duì)照品約11.25mg，置100mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1.0mL，于25mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，做為儲(chǔ)備液(4.5μg·mL-1)；精密吸取1.0mL，于10mL量瓶中，加溶劑稀釋成0.45μg·mL-1的溶液作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液

論長(zhǎng)相，二狗伢當(dāng)然比寶玉爹差了一截。鄉(xiāng)黨們概括二狗伢有三句話，長(zhǎng)相歪里鱉佬，性格犟頭術(shù)佬，脾氣性里肏佬。二狗伢自己也說，誰能跟他比，站倒坐倒都像一主禮，一副嫖客相，爹娘給的。后面四個(gè)字說出了二狗伢的不服與不屑，意思很明白，你長(zhǎng)得標(biāo)致出眾沒什么了不起，那是爹娘造就的，要比比本事。

精密稱取本品75mg，置25mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻做為儲(chǔ)備液(3mg·mL-1)，精密吸取儲(chǔ)備液1.0mL，于10mL量瓶中，加溶劑稀釋成300μg·mL-1的溶液作為供試品溶液。

2.2.4 系統(tǒng)適用性溶液

分別精密量取列格列汀及利格列汀S-異構(gòu)體儲(chǔ)備液各1mL，于10mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性溶液。

取系統(tǒng)適用性溶液20μL注入液相色譜儀，色譜圖見圖2。利格列汀S-異構(gòu)體按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。

圖2 系統(tǒng)適用性HPLC色譜圖

2.3 定量限

取利格列汀S-異構(gòu)體對(duì)照品溶液(0.45μg·mL-1)適量，采用逐步稀釋法當(dāng)其信噪比(S/N)為10：1時(shí)，相應(yīng)的利格列汀S-異構(gòu)體質(zhì)量為0.18ng。

2.4 線性試驗(yàn)

分別精密量取“2.2.2”項(xiàng)下儲(chǔ)備液0.2、0.6、0.8、1.0、1.5mL置10mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，制成含利格列汀S-異構(gòu)體濃度分別為0.0899、0.2698、0.3597、0.4496、0.6744μg·mL-1的系列溶液。取上述系列溶液分別進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積A對(duì)濃度C進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A=379006.8C+1183.1，r=0.9996，表明利格列汀S-異構(gòu)體在0.0899～0.6744μg·mL-1與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

照“2.2”項(xiàng)下方法，配制對(duì)照品溶液及6份供試品溶液，精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20μL注入液相色譜儀，同日內(nèi)各連續(xù)測(cè)定；按相同方法，連續(xù)進(jìn)樣6d，測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示利格列汀S-異構(gòu)體的日內(nèi)、日間含量的平均值分別為0.008%和0.009%；RSD分別為3.4%和4.6%(n=6)，表明本方法的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將供試品溶液于室溫放置，分別于0，2，4，6，8，10，12h進(jìn)樣，記錄色譜圖，考察供試品溶液的穩(wěn)定性。測(cè)得RSD為0.82%(n=7)，說明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn)

分別取“2.2.3”項(xiàng)下供試品儲(chǔ)備液個(gè)1.0mL，置3個(gè)10mL量瓶中，分別量取"2.2.2"項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2，1.0，1.5mL，分別置上述3個(gè)量瓶中，即得0.03%、0.15%、0.225%雜質(zhì)限度的混合液，平行配制3份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，按外標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果低、中、高濃度平均回收率分別為101.8%、98.4%、96.0%，RSD分別為1.68%、1.63%、1.40%(n=3)。

2.8 耐用性試驗(yàn)

調(diào)整試驗(yàn)條件，分別考察流動(dòng)相比例、柱溫變化、流速變化時(shí)，測(cè)定結(jié)果的變化。在各條件下進(jìn)樣，利格列汀與S-異構(gòu)體均能與主峰有效分離，故本色譜條件適合利格列汀S-異構(gòu)體檢查。

2.9 樣品測(cè)定結(jié)果

HPLC法分別測(cè)定自制3批樣品(批號(hào)：20170101、20170102、20170103)，結(jié)果見表1，三批樣品結(jié)果均控制在0.15%以內(nèi)。

表1 HPLC法測(cè)定結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)HPLC法測(cè)定利格列汀的S-異構(gòu)體進(jìn)行了方法學(xué)研究，用手性色譜柱【填料為三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸)纖維素酯鍵合硅膠CHIRALPAK?AD(250mm×4.6mm，5μm)】，以乙醇-乙醇胺(100:0.1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，流速為0.4 mL·min-1，利格列汀S-異構(gòu)體于利格列汀峰的相對(duì)保留時(shí)間分別約為0.86和1.0；利格列汀S-異構(gòu)體和利格列汀峰的分離度大于3.0。系統(tǒng)適用性、專屬性、線性和范圍、定量限與檢測(cè)限、準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性均符合檢測(cè)要求，故該方法可用于測(cè)定利格列汀的S-異構(gòu)體。

[1] 喬玉清.HPLC法測(cè)定利格列汀原料藥的有關(guān)物質(zhì)[J].海峽藥學(xué)，2016，28(1)：62-63.

[2] FDA . FDA Approves type 2 diabetes drug from boehringer ingelheim and lilly[EB/OL].(2011-05-03).http://www.genengnews.com/gen-newshigh-lights/fda-approves-type-2-diabetesdrug-from-boehringer-ingelheim-andlilly/81245092.

[3] Del Prato S,Barnett A H,Huisman H.Effect of linagliptin monotherapy on glycaemic control and markers of B-cell function in patients with inadequately controlled type 2 diabetes:a randomized controlled trial[J].Diabetes Obes Metab 2011,13:193-287.

[4] Barnett A H,Harper R.Linagliptin monotherapy improves glycaemic control in type 2 diabetes patients for whom metformin therapy is inappropriate[C].46th Annual Meeting of the European Association for the Study of Diabetes.Stockholm,2010: 823.

[5] Chen Y X，Du J B，Zhang Y F，et al. The enantioselective phar?macokinetic study of desvenlafaxine sustained release tablet in Chinese healthy male volunteers after oral administration[J].Acta Pharm Sin，2015，50(4)：486-491.

[6] Lai Zengwei, Li Chunhong, Sun Hongbin et al.Discovery of highly potent DPP-4 inhibitors by hybrid compound design based on linagliptin and alogliptin[J].European Journal of Medicinal Chemistry, 2014, 83:547-560.

(本文文獻(xiàn)格式：董海霞.HPLC法測(cè)定利格列汀的S-異構(gòu)體[J].山東化工，2017，46(10)：89-91.)

Determination of S-isomer in Linagliptin by HPLC

DongHaixia

(Shandong Standard and Test Technology Co.,Ltd.,Jinan 250101,China)

To determine S-isomer in linagliptin by HPLC.Methods :The chromatography separation was performed on a CHIRALPAK AD-H column(250mm×4.6mm，5μm)at 35℃,The flow rate was at 0.4 mL·min-1,The mobile phase was ethanol-ethanolamine=100:0.1.The detection wavelength was 220nm.Results: S-isomer showed a good linearity at 0.0899～0.6744μg·mL-1.The average recovery of low,medium,high concentration of S-isomer was 101.8%,98.4% and 96.0%,RSD was 1.68%,1.63%and1.40%(n=3),respectively.The limit for determination was 0.18ng and the RSD of intra-day and inter-day was 3.4% and 4.6%(n=6),respectively.Conclusion: The method is simple and accurate for the determination of S-isomer in linagliptin.

linagliptin;S-isomer;HPLC

2017-03-22

董海霞(1979—)，女，山東濟(jì)南人，助理工程師，主要從事醫(yī)藥研發(fā)工作。

O657.7+2

A

1008-021X(2017)10-0089-03

分析與測(cè)試