曾上敏，秦斯民，曹華玲

(廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣東 廣州 510520)

β-環(huán)糊精包合厚樸、蒼術(shù)和枳實(shí)揮發(fā)油的工藝研究

曾上敏，秦斯民，曹華玲

(廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣東 廣州 510520)

目的: 優(yōu)選復(fù)芪益氣顆粒中揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合工藝。方法: 以揮發(fā)油利用率和包合物收得率作為綜合指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法對揮發(fā)油β-CD包合物的工藝進(jìn)行優(yōu)化，并采用TLC法和顯微法對包合物進(jìn)行了分析。結(jié)果: 當(dāng)油與β-環(huán)糊精的用量為1：8 ( mL：g)，包合溫度為45 ℃，包合時(shí)間為2h，β-CD與加水量的比例為1：10(g：mL)，所形成的包合物得到了TLC試驗(yàn)和顯微證實(shí)。結(jié)論: 本實(shí)驗(yàn)為確定厚樸、蒼術(shù)和枳實(shí)混合揮發(fā)油的合理包合工藝提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

厚樸；蒼術(shù)；枳實(shí)；揮發(fā)油；β-環(huán)糊精；包合工藝

復(fù)芪益氣顆粒為臨床經(jīng)驗(yàn)方，由黃芪、山藥、厚樸、蒼術(shù)、枳實(shí)等8味藥材組成，具有補(bǔ)脾固腎，益氣養(yǎng)陰之功效，用于氣陰不足、內(nèi)熱消渴、體倦乏力所致的消渴病。方中厚樸、蒼術(shù)和枳實(shí)均含較多量揮發(fā)油，是其重要的藥理活性成分之一[1-3]，具有抗胃潰瘍、抗病毒、抗炎、降糖[4]的作用。揮發(fā)油具有對光和熱不穩(wěn)定，為避免揮發(fā)油在制劑生產(chǎn)過程中的損失，增加制劑穩(wěn)定性，提高揮發(fā)油的利用率，本文采用飽和水溶液法制備揮發(fā)油的β-CD包合物，并采用正交試驗(yàn)法對各影響因素進(jìn)行考察，以揮發(fā)油利用率和包合物收得率作為綜合指標(biāo)對包合工藝進(jìn)行優(yōu)選，并且用薄層色譜法和顯微鏡法對包合物進(jìn)行驗(yàn)證。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

SHZ-D型循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限公司)；DF-101S集熱式溫?zé)峒訜岽帕嚢杵?鞏義市英嶼予華儀器廠)；RE旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀( 上海亞榮生化儀器廠)；揮發(fā)油提取器 (上海玻璃儀器廠)；DZF-6050型真空干燥箱(上海驚宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；BX51型奧林巴斯顯微鏡(日本奧林巴斯株式會社)。

1.2 試藥

2 方法與結(jié)果

2.1 厚樸、蒼術(shù)和枳實(shí)混合揮發(fā)油的制備

稱取一定量的厚樸、蒼術(shù)和枳實(shí)，加12倍體積水溶液浸泡0. 5 h，按《中國藥典》2015年版一部附錄[5]提取揮發(fā)油6h，收集揮發(fā)油成分，并用乙醚萃取提取液三次，加無水硫酸鈉脫水[6]，氮吹除去乙醚，最終得到棕黃色揮發(fā)油。

2.2 正交優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在單因素實(shí)驗(yàn)上，確定油與β-CD的比例(mL：g)、β-CD與加水量的比例(g：mL)、包合溫度(℃)和包合時(shí)間(h)為主要影響因素，以揮發(fā)油利用率、包合物率為綜合指標(biāo)，采用 L9(34) 正交試驗(yàn)法對上述四個因素進(jìn)行綜合考察，因素水平見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2.3 包合物的制備[7]

稱取相應(yīng)倍數(shù)量的β-CD，加入適量蒸餾水置于沸水浴加熱溶解成β-CD溶液，精密量取揮發(fā)油，用無水乙醇稀釋(油：醇=2：1)，用移液管將揮發(fā)油稀釋液注入β-CD飽和溶液中，恒溫?cái)嚢?，取出于冰箱冷?4h，抽濾，用石油醚I洗滌，凍干，得β-CD包合揮發(fā)油的包合物。

2.4 揮發(fā)油加標(biāo)回收試驗(yàn)

女人通過幾層關(guān)系找到了結(jié)識“田科”的途徑，她是在等待時(shí)機(jī)，必須是絕好的時(shí)機(jī)，不能失敗的時(shí)機(jī)，而且要一下子便抓住，這對于自己復(fù)仇計(jì)劃的成功是有好處的。

取揮發(fā)油的乙醇溶液(油：醇=2：1)置于250mL圓底燒瓶中，加200mL蒸餾水提取揮發(fā)油，至揮發(fā)油不增為止。平行提取3次，平均得油量0. 97 mL( n = 3) ，回收率為97. 0%。

2.5 揮發(fā)油利用率及包合物得率的測定

將干燥包合物精密稱定，置于裝有沸石的圓底燒瓶中，加水300 mL，按2. 1 項(xiàng)下方法連接揮發(fā)油測定器，加熱6 h，至油量不增時(shí)停止加熱，放冷0. 5 h時(shí)讀數(shù)，即得提取揮發(fā)油體積。揮發(fā)油提取率和包合率見表2，方差見表3。以揮發(fā)油提取率和包合率對試驗(yàn)條件進(jìn)行綜合評分。

綜合得分=揮發(fā)油提取率評分+包合率評分

揮發(fā)油提取率=包合物中揮發(fā)油量/(油的加入量×加標(biāo)回收率)×100%

揮發(fā)油利用率評分=(0.7/最大揮發(fā)油利用率×揮發(fā)油利用率)×100

包合物得率=包合物的質(zhì)量/(β-CD +投油量)×100%

包合物得率評分=(0.3/最大包合物得率含量×包合物得率)×100

表2 揮發(fā)油β-CD包合物制備工藝優(yōu)選正交試驗(yàn)安排及結(jié)果

表3 方差分析表

注：F0.05(2，2)=19.000

由表2直觀分析可知，影響包合效果的順序?yàn)锳>D>C>B，即油與β-CD的比例影響最大，其次是包合溫度，再其次是攪拌時(shí)間，最后是β-CD與加水量的比例；表3方差分析結(jié)果表明，油與β-CD用量比例對包合影響顯著，β-CD與加水量的比例，包合時(shí)間和包合溫度均無顯著性影響，因此，從節(jié)約原料和制備時(shí)間考慮，最終確定最佳包合條件為A2B2C2D1，即β-CD用量為揮發(fā)油的8倍量，包合溫度 45 ℃，包合時(shí)間2. 0 h，加水量為β-CD用量的10倍。

2.6 包合工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

按正交試驗(yàn)篩選出最佳工藝條件A2B2C2D1進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表4。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，正交試驗(yàn)所確定的β-CD包合揮發(fā)油工藝穩(wěn)定。

2.7 包合物的質(zhì)量研究[8-9]

2.7.1 薄層色譜法

取混合揮發(fā)油適量，按最佳包合工藝條件制備β-CD包合物。取混合揮發(fā)油β-CD包合物適量，加5mL乙酸乙酯浸泡30min，過濾后的溶液為包合物供試品溶液I；再取混合揮發(fā)油- β-CD包合物，按揮發(fā)油提取法提取揮發(fā)油，取0.1 mL揮發(fā)油加1 mL乙酸乙酯混勻制備成包合物供試品溶液II；取0.1mL混合揮發(fā)油加1.0 mL乙酸乙酯混勻?yàn)榛旌蠐]發(fā)油對照溶液Ⅲ；取β-CD適量，按包合物供試品溶液Ⅱ方法制備陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2]試驗(yàn)，分別吸取上述 5種溶液點(diǎn)于同一硅膠G板上，以石油醚 ( 60～ 90℃) - 醋酸乙酯 ( 9：1)展開, 取出，晾干，噴以5%香草醛-硫酸溶液, 105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。

見圖1。結(jié)果表明，供試品溶液Ⅱ在與對照品色譜相應(yīng)的位置具有相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，而供試品溶液Ⅰ與陰性對照品溶液色譜中均未見任何斑點(diǎn) (見圖 1) ，表明混合揮發(fā)油進(jìn)入了β-環(huán)糊精分子內(nèi)部形成了包合物。

2.7.2 顯微鏡法

分別取β-CD、揮發(fā)油包合物用水溶解，滴于載玻片上，用光學(xué)顯微鏡觀察。β-CD 在顯微鏡下呈板塊狀結(jié)晶，而揮發(fā)油包合物無明顯結(jié)晶狀，并呈不規(guī)則粉末狀，表明β-CD確實(shí)與揮發(fā)油形成包合物，結(jié)果見圖2。

圖2 β-CD和β-CD包合物的顯微鏡結(jié)果圖

4 討論

本實(shí)驗(yàn)采用飽和溶液法制備顆粒中揮發(fā)油的β-CD包合物，具有操作方便、包合率高、等優(yōu)點(diǎn)。將該包合技術(shù)應(yīng)用于揮發(fā)油包合于β-CD空腔內(nèi)，使揮發(fā)油由液態(tài)變?yōu)榉勰睿员阌谥苿┑闹苽?；此方法可以有效避免揮發(fā)油與外界分子接觸、有效的降低了揮發(fā)油揮發(fā)油在制劑中的擴(kuò)散， 提高了揮發(fā)油溶解性和穩(wěn)定性，保證了揮發(fā)油制劑的質(zhì)量。 揮發(fā)油與β-CD 投料比對工藝影響極為顯著，包合時(shí)間和包和溫度對工藝影響顯著。當(dāng)揮發(fā)油與β-CD 投料比為1∶8，包合溫度為45 ℃，包合時(shí)間為2 h時(shí)，揮發(fā)油包合物包合率最高，工藝穩(wěn)定性較好。并用TLC法證實(shí)揮發(fā)油β-CD 包合物已經(jīng)形成。

[1] 付梅紅，朱東海，方 婧，等. 蒼術(shù)的化學(xué)、分子生藥學(xué)和藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2009，34(20):2699-2672.

[2] 張 紅，孫明江，王 凌. 枳實(shí)的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中藥材，2009，32(11):1787-1790.

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(本文文獻(xiàn)格式：曾上敏，秦斯民，曹華玲，等.β-環(huán)糊精包合厚樸、蒼術(shù)和枳實(shí)揮發(fā)油的工藝研究[J].山東化工，2017，46(10)：52-54.)

2017-03-28

曾上敏(1988—)，助教，從事藥物制劑方面的研究。

R283.6

A

1008-021X(2017)10-0052-03