黃萃園，張洪，白瑞丹

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院藥學(xué)部，湖北武漢430060)

·薈萃分析·

TLR4基因多態(tài)性與冠心病易感性相關(guān)性Meta分析

黃萃園，張洪，白瑞丹

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院藥學(xué)部，湖北武漢430060)

目的研究TLR4(1196C/T)基因多態(tài)性與冠心病(CAD)易感性的相關(guān)性。方法計(jì)算機(jī)檢索中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)(CNKI)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、VIP、Pubmed、Web of Science、Science direct以及Wiley online library等數(shù)據(jù)庫(kù)，檢索TLR4 1196C＞T基因多態(tài)性與冠心病相關(guān)性的病例對(duì)照研究，檢索文獻(xiàn)均為建庫(kù)至2016年9月17日。由兩名評(píng)價(jià)員按照納入與排除標(biāo)準(zhǔn)單獨(dú)進(jìn)行文獻(xiàn)篩選及資料提取，采用RevMan5.0和Stata11.0軟件對(duì)納入的文獻(xiàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果共納入7篇文獻(xiàn)累積7 891例冠心病和4 018例健康對(duì)照。Meta分析結(jié)果表明TLR4 1196C＞T基因多態(tài)性與CAD風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[等位基因模型T/C：OR=1.02，95%CI(0.77～1.34)，P=0.91；顯性模型CT+TT/CC：OR=1.01，95%CI(0.76～1.35)，P=0.92；隱性模型CC+CT/TT：OR=1.03，95%CI(0.61～1.75)，P=0.91；共顯性模型CT/CC：OR=1.02，95%CI(0.76～1.36)，P=0.91；共顯性模型CC/TT：OR=1.05，95%CI(0.62～1.77)，P=0.87]。各基因模型均無(wú)發(fā)表偏倚。結(jié)論TLR4 1196C＞T基因多態(tài)性與CAD易感性無(wú)明顯相關(guān)性，受納入文獻(xiàn)數(shù)量限制，上述結(jié)論尚需開(kāi)展更多研究予以驗(yàn)證。

TLR4；基因多態(tài)性；冠心?。籑eta分析

冠心病(coronary artery disease，CAD)是一種由冠狀動(dòng)脈器質(zhì)性狹窄或阻塞引起的心肌缺血缺氧(心絞痛)或心肌壞死(心肌梗塞)的心臟病。目前，在全世界范圍內(nèi)，尤其是發(fā)達(dá)國(guó)家，CAD已成為導(dǎo)致人類(lèi)死亡的主要原因之一[1]。有研究報(bào)道，CAD患者的家族成員通常含有許多的易感基因[2]，而之前就有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道自然免疫系統(tǒng)的遺傳變異與心血管疾病的易感性及發(fā)展具有重要的聯(lián)系[3]。Toll樣受體4(Toll-like receptor 4，TLR4)是模式識(shí)別受體家族中最重要的一類(lèi)受體蛋白，在先天性免疫反應(yīng)和獲得性免疫反應(yīng)中發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用[4]。TLR4介導(dǎo)的炎癥信號(hào)通路與動(dòng)脈粥樣硬化的起始、發(fā)展具有密切的聯(lián)系[5]，而越來(lái)越多的研究表明，TLR4基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈疾病的形成有關(guān)[6-8]。TLR4基因中的2個(gè)錯(cuò)義突變位點(diǎn)(896A＞G、1196C＞T)會(huì)導(dǎo)致TLR4蛋白表面性質(zhì)的改變，從而影響TLR4與配體的結(jié)合[9]，對(duì)疾病的發(fā)生或發(fā)展產(chǎn)生影響。相關(guān)研究揭示了896A＞G與CAD易感性的關(guān)系[10]，但有關(guān)1196 C＞T與CAD易感性的Meta分析尚未見(jiàn)報(bào)道。1196C＞T位點(diǎn)多態(tài)性可導(dǎo)致第399位氨基酸由蘇氨酸變?yōu)楫惲涟彼?，從而改變TLR4的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致急性期反應(yīng)物、可溶性粘附分子以及促炎細(xì)胞因子水平的降低，使促動(dòng)脈硬化作用下降。為了探索TLR4(1196C/T)基因多態(tài)性與CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性，我們收集相關(guān)文獻(xiàn)后采用Meta分析方法探討TLR4(1196C/T)基因多態(tài)性與CAD易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)收集采用自由詞和主題詞組合的方式進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，以TLR4、Toll樣受體4、基因多態(tài)性、冠心病、急性冠脈綜合征、心肌梗死等為檢索詞在CNKI、VIP和萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)檢索中文文獻(xiàn)；以TLR4 or Toll-like receptor 4、mutation or polymorphism or variant、coronary heart disease or CHD or coronary artery disease or CAD or cardiovascular disease or CVD or myocardial infarction or MI為英文關(guān)鍵詞在Pubmed、Web of Science、Science Direct以及Wiley online library數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索。為了避免遺漏文獻(xiàn)，查閱檢索結(jié)果中所附相似文獻(xiàn)及參考文獻(xiàn)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)(1)文獻(xiàn)采用病例-對(duì)照研究，語(yǔ)言為中文或英文；(2)研究TLR4 1196C＞T(rs4986791)基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系；(3)研究病例必須確診CAD、心肌梗死或急性冠脈綜合征；(4)文中報(bào)告數(shù)據(jù)完整。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)(1)研究數(shù)據(jù)不完整或無(wú)法獲取數(shù)據(jù)的文獻(xiàn)；(2)重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)；(3)綜述性的文獻(xiàn)；(4)對(duì)照組基因不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)；(5)目的基因不包含TLR4 1196C＞T位點(diǎn)；

1.4 數(shù)據(jù)提取和方法學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)的篩選及提取由2名評(píng)議員按上述納入及排除的標(biāo)準(zhǔn)單獨(dú)進(jìn)行，并相互核對(duì)。對(duì)存在歧義的文獻(xiàn)由第三方評(píng)議員進(jìn)行核查確認(rèn)。提取內(nèi)容包括：第一作者姓名、發(fā)表年份、研究地域、研究人種、疾病分型、基因型檢測(cè)方法和疾病組與對(duì)照組基因型數(shù)量等。按照Newcastle Ottawa Scale(NOS)標(biāo)準(zhǔn)[11]對(duì)納入的文獻(xiàn)進(jìn)行方法學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)。NOS對(duì)文獻(xiàn)質(zhì)量的評(píng)價(jià)采用了星級(jí)系統(tǒng)半量化原則，包括3個(gè)部分：①研究人群選擇；②病例組和對(duì)照組的可比性；③暴露因素的測(cè)量。得分≥7分為高質(zhì)量研究。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用RevMan5.0軟件進(jìn)行Meta分析，選取5種主要的基因模型計(jì)算比值比(OR)值及95%可信區(qū)間(95%CI)：等位基因模型(C/ T)、顯性模型(CC/CT+TT)、隱形模型(CC+CT/TT)以及共顯性模型(CC/CT和CC/TT)。運(yùn)用χ2檢驗(yàn)和I2檢驗(yàn)評(píng)估異質(zhì)性，若P≥0.05且I2＜50%，提示各合并的研究數(shù)據(jù)無(wú)顯著的異質(zhì)性，采用固定效應(yīng)模型，否則采用隨機(jī)效應(yīng)模型。計(jì)算各研究及合并數(shù)據(jù)的OR值及其95%CI，繪制森林圖。運(yùn)用Stata11.0軟件進(jìn)行敏感性分析。運(yùn)用Begg漏斗圖及Egger′s檢測(cè)評(píng)估發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 納入文獻(xiàn)與方法學(xué)評(píng)價(jià)通過(guò)文獻(xiàn)檢索，查找到了61篇相關(guān)文獻(xiàn)。通過(guò)進(jìn)一步閱讀摘要及全文進(jìn)行逐層篩選，最終納入7篇文獻(xiàn)[12-18]，累積病例7 891例，對(duì)照組4 018例。納入文獻(xiàn)的基本信息及方法學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)見(jiàn)表1。

表1 納入文獻(xiàn)的基本信息及方法學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.2 Meta結(jié)果分析對(duì)納入研究進(jìn)行Meta分析，在等位基因模型T/C、顯性模型CT+TT/CC以及共顯性模型CT/CC下存在明顯的異質(zhì)性(P＜0.05，I2＞50%)，故采用隨機(jī)效應(yīng)模型。而隱性模型CC+CT/TT及共顯性模型CC/TT同質(zhì)性較好，因此采用固定效應(yīng)模型。結(jié)果表明，在五種基因模型下TLR4 1196C＞T基因多態(tài)性與冠心病易感性的相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各基因模型合并OR值及95%CI分別為等位基因模型T/C：OR=1.02，95%CI(0.77～1.34)，P=0.91；顯性模型CT+TT/CC：OR=1.01，95%CI(0.76～1.35)，P= 0.92；隱性模型CC+CT/TT：OR=1.03，95%CI(0.61～1.75)，P=0.91；共顯性模型CT/CC：OR=1.02，95%CI (0.76～1.36)，P=0.91；共顯性模型CC/TT：OR=1.05，95%CI(0.62～1.77)，P=0.87，見(jiàn)圖1～圖5。

圖1 等位基因模型T/C的Meta分析森林圖

圖2 顯性模型CT+TT/CC的Meta分析森林圖

圖3 隱性模型CC+CT/TT的Meta分析森林圖

圖4 共顯性模型CT/CC的Meta分析森林圖

圖5 共顯性模型CC/TT的Meta分析森林圖

2.3 敏感性分析運(yùn)用State 11.0進(jìn)行敏感性分析。敏感性分析結(jié)果表明Kolek等[7]的研究對(duì)合并效應(yīng)量OR的影響最大，剔除該研究后，OR及異質(zhì)性發(fā)生顯著變化，提示此可能是異質(zhì)性存在的主要原因。等位基因模型T/C中剔除該研究后，合并OR值由1.02 (95%CI：0.77～1.34，P=0.91)變?yōu)?.134(95%CI：0.922～ 1.393，P=0.233)，同時(shí)異質(zhì)性由P=0.0006，I2=75%變?yōu)镻=0.051，I2=54.6%；在顯性模型CT+TT/CC中剔除該研究后，合并OR值由1.01(95%CI：0.76～1.35，P=0.92)變?yōu)?.136(95%CI：0.904～1.428，P=0.274)，異質(zhì)性由P=0.0006，I2=75%變?yōu)镻=0.031，I2=59.2%；在共顯性模型CT/CC剔除該研究后，合并OR值由1.02(95%CI：0.76～1.36，P=0.91)變?yōu)?.127(95%CI：0.887～1.433，P= 0.328)，異質(zhì)性由P=0.001，I2=73%變?yōu)镻=0.024，I2= 61.4%。隱性模型CC+CT/TT和共顯性模型CC/TT的同質(zhì)性較好，剔除該研究后OR分別由1.03(95%CI：0.61～1.75，P=0.91)變?yōu)?.849(95%CI：0.468～1.541，P= 0.590)、1.05(95%CI：0.62～1.77，P=0.87)變?yōu)?.840 (95%CI：0.463～1.526，P=0.567)。

2.4 發(fā)表偏倚分析TLR4(1196C/T)基因多態(tài)性與冠心病易感性相關(guān)性Meta分析發(fā)表偏倚見(jiàn)表2。Begg′s漏斗圖可見(jiàn)所有的研究基本對(duì)稱，呈倒置漏斗形(圖6)。Egger′s test分析顯示，t=-0.22，P=0.834＞0.05，95%CI為(-5.37，4.52)包含0(圖7)，因此本研究無(wú)發(fā)表偏倚。

表2 各遺傳模型發(fā)表偏倚結(jié)果

圖6 等位基因模型T/C Begg漏斗圖

圖7 等位基因模型T/C Egger's線性回歸

3 討論

CAD的基礎(chǔ)病理變化是冠狀動(dòng)脈的粥樣硬化，而TLR4可以通過(guò)激活NF-κB、MAPK信號(hào)通路釋放炎癥因子，刺激炎癥細(xì)胞的增殖和遷移以及影響動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中單核細(xì)胞的聚集[19-21]。CAD造成人類(lèi)發(fā)病和死亡的比例正逐漸上升，常規(guī)致病因素如高血糖、高血壓、高血脂、吸煙、飲酒等不能完全解釋其發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，而遺傳因素在CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)中的作用正在逐漸被揭示，許多基因多態(tài)性被證明與CAD的發(fā)展相關(guān)[22-23]。TLR4基因位于9號(hào)染色體，包括4個(gè)外顯子，其第399位(1196C＞T)氨基酸發(fā)生錯(cuò)義突變(由蘇氨酸變?yōu)楫惲涟彼?會(huì)改變TLR4受體蛋白的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致促炎癥因子和可溶性粘附分子表達(dá)降低，從而抑制動(dòng)脈硬化作用。有關(guān)1196C＞T單核甘酸多態(tài)性(SNP)與CAD易感性的關(guān)系，國(guó)內(nèi)外已有相關(guān)研究探討，但尚無(wú)定論。王珺楠等[18]的研究認(rèn)為，TLR4 1196C＞T突變型基因較野生型基因冠心病發(fā)生率明顯下降，對(duì)冠心病的發(fā)病具有保護(hù)作用。同時(shí)，也有相關(guān)研究[13-14，16]認(rèn)為T(mén)LR4 1196C＞T SNP與CAD發(fā)生無(wú)關(guān)聯(lián)。為此，我們進(jìn)行了本次Meta分析。

本文共納入7篇病例-對(duì)照研究進(jìn)行Meta分析，探討TLR4(1196C/T)基因多態(tài)性與CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。研究結(jié)果表明在以上5種遺傳模型中，TLR4 1196C＞T基因多態(tài)性與冠心病易感性的相關(guān)性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Begg漏斗圖和Egger檢驗(yàn)表明在各個(gè)遺傳模型中均無(wú)發(fā)表偏倚，因此結(jié)果較為可靠。敏感性分析表明，各個(gè)研究存在一定的異質(zhì)性，該異質(zhì)性的來(lái)源可能是種族、性別、年齡的不同導(dǎo)致的。受納入文獻(xiàn)數(shù)量的限制，本文未進(jìn)行亞組分析；同時(shí)，由于各文獻(xiàn)于缺乏基因-基因、基因-環(huán)境相互作用的數(shù)據(jù)使得無(wú)法評(píng)估其交互作用的影響；納入文獻(xiàn)均為已發(fā)表的文獻(xiàn)，缺乏灰色文獻(xiàn)等，以上原因使得結(jié)果存在一定的局限性。目前有關(guān)TLR4基因多態(tài)性與冠心病關(guān)系研究較少，其基因位點(diǎn)的突變頻率在各個(gè)種族不同，產(chǎn)生的結(jié)果也可能不同。開(kāi)展TLR4基因多態(tài)性與CAD關(guān)系的研究可以為臨床治療提供新的藥物作用靶點(diǎn)和方向。

總之，本研究結(jié)果表明TLR4(1196C/T)基因多態(tài)性與CAD的風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)?；诒狙芯康木窒扌裕枰喔哔|(zhì)量、大樣本的病例對(duì)照研究進(jìn)一步證實(shí)，并適時(shí)在本Meta分析的基礎(chǔ)上更新，以期進(jìn)一步研究TLR4 1196C＞T SNP與CAD風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系。

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Association between the 1196(C/T)polymorphism of TLR4 and susceptibility of coronary artery disease:a meta-analysis.

HUANG Cui-yuan,ZHANG Hong,BAI Rui-dan.Department of Pharmacy,Renmin Hospital of Wuhan University,Wuhan 430060,Hubei,CHINA

ObjectiveTo investigate the association between TLR4 1196(C/T)gene polymorphism and susceptibility of coronary artery disease(CAD).MethodsThe case-control studies of TLR4 1196 C＞T gene polymorphism and susceptibility of coronary artery disease were searched in CNKI,Wanfang database,VIP,Pubmed,Web of Science, Science direct and Wiley online library,which were published up to September 17,2016.According to the inclusion and exclusion criteria,literature selection and data extraction were performed independently by two reviewers.RevMan5.0 and Stata11.0 software were used for statistical analysis of the literatures.ResultsA total of 7 studies involving 7 891 patients and 4 018 controls were analyzed in the study.The results of meta-analysis showed that TLR4 1196C＞T gene polymorphism and CAD risk had no statistically significant correlation(allele model T/C:OR=1.02,95%CI(0.77-1.34, P=0.91);dominant model CT+TT/CC:OR=1.01,95%CI(0.76-1.35,P=0.92);recessive model CC+CT/TT:OR=1.03, 95%CI(0.61-1.75),P=0.91;co-dominant model CT/CC:OR=1.02,95%CI(0.76-1.36,P=0.91);co-dominant model of CC/TT:OR=1.05,95%CI(0.62-1.77),P=0.87).There was no publication bias in each gene model.ConclusionThere is no significant correlation between TLR4 1196C＞T gene polymorphism and CAD susceptibility.Due to the limited number of documents included in the literature,the above conclusions still need to carry out more research to be verified.

TLR4;Gene polymorphism;Coronary artery disease(CAD);Meta-analysis

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.15.048

R541.4

A

1003—6350（2017）15—2550—05

2017-03-01)

張洪。E-mail：cuiandli92@163.com