□ 王如影 四川省德陽(yáng)市食品藥品安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心

復(fù)合蛋白飲料中三聚氰胺高效液相色譜法的檢測(cè)

□ 王如影 四川省德陽(yáng)市食品藥品安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心

國(guó)家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則（2017年版）中飲料種類中要求含有乳制品的飲料都需要檢測(cè)三聚氰胺，本法用三氯乙酸溶液和乙腈提取，濾紙過(guò)濾方法檢測(cè)，線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，回收率在99%～110%，滿足實(shí)驗(yàn)檢測(cè)要求。

復(fù)合蛋白飲料；三聚氰胺；高效液相色譜法

蛋白質(zhì)是組成人體一切細(xì)胞、組織重要成分。蛋白質(zhì)主要成分為氨基酸，氮含量不超過(guò)30%，三聚氰胺中的分子式中氮含量為66%。現(xiàn)在普遍蛋白質(zhì)測(cè)定方法為“凱氏定氮法”，原理是通過(guò)測(cè)出含氮量來(lái)計(jì)算蛋白質(zhì)含量，因此，在食品中加入三聚氰胺會(huì)使蛋白質(zhì)檢測(cè)含量偏高，使不法商家在食品中加入三聚氰胺來(lái)增加蛋白質(zhì)含量。

三聚氰胺（化學(xué)式：C3N3(NH2)3），俗稱密胺、蛋白精，IUPAC命名為1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，屬于化工原料，白色單斜晶體，幾乎無(wú)味，微溶于水（3.1 g/L常溫），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油和吡啶等，不溶于丙酮和醚類，對(duì)身體有害，不可用于食品加工或食品添加物。因此，快速準(zhǔn)確檢測(cè)樣品中的三聚氰胺的殘留量，對(duì)保護(hù)消費(fèi)者的經(jīng)濟(jì)權(quán)益和人身安全有重要意義。三聚氰胺檢測(cè)方法包括重量法、電位滴定法和高校液相色譜法等[1]，本次檢測(cè)用是高效液相色譜法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 原理

試樣成分相對(duì)簡(jiǎn)單的樣品用三氯乙酸溶液-乙腈提取，濾紙過(guò)濾后用高效液相色譜法檢測(cè)，外標(biāo)法定量。

1.2 儀器與實(shí)驗(yàn)材料

島津高效液相色譜儀LC-2030（配有紫外檢測(cè)器）；冷凍離心機(jī)TGL-16A（轉(zhuǎn)速為5 000 r/min）；渦旋振蕩器；50 mL帶塞離心管；0.22 μm的微孔濾膜，有機(jī)相。

甲醇（色譜純）；乙腈（色譜純）；水（超純水）；檸檬酸（分析純）；三氯乙酸（1%）；甲醇水溶液（50∶50）；辛烷磺酸鈉（色譜純）；氨水（25%）；三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（含量99%，Dr. Ehrenstorfer GmbH）。

1.3 溶液的配制

流動(dòng)相A：乙腈；流動(dòng)相B：稱取檸檬酸2.10 g和辛烷磺酸鈉2.16 g于 1 000 mL容量瓶中，用超純水溶解，pH約為3。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品0.1 g（精確到0.1 mg）于100 mL容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容到刻度線，配制成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在4 ℃條件下避光保存。

用流動(dòng)相將三聚氰胺儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋到濃度為2、4、8、12、16、20 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.4 樣品前處理

稱取2 g（精確到0.01 g）的試樣于50 mL帶塞離心管中，加入15 mL三氯乙酸溶液和5 mL的乙腈，超聲提取10 min，冷凍離心。用濕潤(rùn)濾紙過(guò)濾，定容到25 mL。微孔濾膜過(guò)濾，供高效液相色譜用。

1.5 測(cè)定

高效液相色譜條件：C18柱4.6 mm×250 mm；流速為1.0 mL/min；柱溫為40 ℃；波長(zhǎng)為240 nm進(jìn)樣量10 μL。

2 結(jié)果分析

2.1 結(jié)果計(jì)算

試樣中三聚氰胺的含量按下式計(jì)算：X=(C×V×1000)/(m×1000)。

式中：X—試樣中三聚氰胺的含量，單位為mg/kg；

C—經(jīng)查標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所得進(jìn)樣液的濃度，單位為mg/L；

V—試樣總稀釋體積，單位為mL；m—樣品量，單位為g。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

三聚氰胺濃度在2～20 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為y=397 75x，相關(guān)系數(shù)為0.999 97。

2.3 方法的精密度

配置三聚氰胺濃度為20 μg/mL的溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

稱取復(fù)合蛋白飲料2.0 g測(cè)定，在樣品中加入已知的三個(gè)不同濃度三聚氰胺加標(biāo)樣，回收率在90%～110%，準(zhǔn)確度和精密度均符合實(shí)驗(yàn)分析要求。樣品添加回收率見(jiàn)表2。

表1 精密度（n=6）實(shí)驗(yàn)表

表2 復(fù)合蛋白飲料中樣品中三聚氰胺的回收率表

3 結(jié)論

三聚氰胺的動(dòng)物性實(shí)驗(yàn)表明，攝入量大或時(shí)間長(zhǎng)將會(huì)在泌尿系統(tǒng)形成結(jié)石，引起腎功能衰竭，甚至引起死亡。必須準(zhǔn)確測(cè)定食品中的三聚氰胺含量。

本方法利用高效液相色譜儀測(cè)定復(fù)合蛋白飲料中的三聚氰胺含量，本方法省去凈化環(huán)節(jié)，節(jié)約成本，操作簡(jiǎn)便快速，重現(xiàn)性好，精密度和準(zhǔn)確度均達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求，能滿足復(fù)合蛋白飲料中三聚氰胺的測(cè)定[2]。

[1]戚冬偉.電位滴定——聯(lián)機(jī)測(cè)試法對(duì)飼料中的三聚氰胺殘留量分析[J].畜牧與飼料科學(xué),2009,30(1):77-79.

[2]黃艷紅,丁健樺,邱昌福,等.液相微萃取-高效液相色譜法測(cè)定乳制品中的三聚氰胺[J].食品科學(xué),2010,31(2):161-164.