孫華偉，盧鳳英，張敬峰，張曉曦，徐 凱，劉傳敏，張小飛＊

(江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所，農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇省農(nóng)科院動(dòng)物疫病診斷檢測(cè)中心，江蘇 南京 210014）

同一豬只圓環(huán)病毒抗體水平與病原檢出率之間的相關(guān)性分析

孫華偉，盧鳳英，張敬峰，張曉曦，徐 凱，劉傳敏，張小飛＊

(江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所，農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇省農(nóng)科院動(dòng)物疫病診斷檢測(cè)中心，江蘇 南京 210014）

為探索一種鑒別豬圓環(huán)病毒（PCV）疫苗抗體與野毒感染的ELISA檢測(cè)方法，本研究通過對(duì)江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物疫病診斷檢測(cè)中心臨床門診2017年1—4月接診的接種過PCV疫苗的30頭活豬同時(shí)進(jìn)行PCV抗體和病原的檢測(cè)，以分析抗體和病原之間的相關(guān)性。結(jié)果PCV抗體陽性率為100%，病原陽性率為30.0%（9/30)； 77.8%（7/9）病原陽性豬的PCV抗體S/P值大于1.8，70.0%（7/10）PCV抗體S/P值大于1.8的豬為PCV病原陽性；說明高PCV抗體豬與病原檢出率之間的相關(guān)性較高。即通過對(duì)群體的抗體檢測(cè)能較為準(zhǔn)確地判斷豬群是否感染了PCV野毒。由于檢測(cè)抗體遠(yuǎn)比活體檢測(cè)病原容易，本研究結(jié)果具有較高的實(shí)用價(jià)值，為江蘇省乃至全國(guó)豬圓環(huán)病毒的診斷與防控提供了有效數(shù)據(jù)參考，具有推廣價(jià)值。

豬圓環(huán)病毒；疫苗抗體；野毒感染；鑒別

豬圓環(huán)病毒 (porcine circoviru，PCV)是DNA病毒，屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，是當(dāng)前已知的最小動(dòng)物病毒之一[1]。1991年加拿大首次報(bào)道PMWS后，世界上許多國(guó)家相繼報(bào)道；2001年我國(guó)首次報(bào)道PCV感染，之后該病在我國(guó)的流行呈逐年上升趨勢(shì)[2]。PCV經(jīng)常和豬細(xì)小病毒、偽狂犬病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒混合感染，造成豬免疫機(jī)能下降、生產(chǎn)性能降低，是規(guī)模化豬場(chǎng)重要的經(jīng)濟(jì)性疫病[3]。PCV又是其他疾病的基礎(chǔ)疾病（“鑰匙病”），成為影響規(guī)?；i場(chǎng)發(fā)展的主要因素[4]。由于對(duì)同一頭豬同時(shí)進(jìn)行抗體和病原的檢測(cè)，分析二者之間相關(guān)性的文獻(xiàn)報(bào)道極少，遂對(duì)江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物疫病診斷檢測(cè)中心臨床門診2017年1—4月接診的接種過PCV疫苗的30頭活豬同時(shí)進(jìn)行PCV抗體和病原的檢測(cè)，旨在通過對(duì)比分析檢測(cè)豬只PCV的抗體水平和野毒感染之間的關(guān)系，進(jìn)而為PCV的快速診斷提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

來自江蘇省農(nóng)科院動(dòng)物疫病診斷檢測(cè)中心臨床門診2017年1—4月份接診的接種過圓環(huán)病毒疫苗的30頭活豬，在剖殺前進(jìn)行前腔靜脈采血，在剖殺后無菌采集肺臟、脾臟、淋巴結(jié)和肝臟。上述檢測(cè)于2017年5月在江蘇省農(nóng)科院獸醫(yī)所動(dòng)物疫病診斷檢測(cè)中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

表1 引物序列信息

表2 PCV抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 病料PCV病原檢測(cè)結(jié)果

圖1 部分樣品的PCR檢測(cè)結(jié)果

1.2 主要試劑及儀器

PCV抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自韓國(guó)JBT公司；基因組提取及PCR試劑盒等購(gòu)自上海Sangon公司；酶標(biāo)儀型號(hào)為寶特ExL808，美國(guó)寶特公司生產(chǎn)；冷凍離心機(jī)型號(hào)為Centrifuge5424R，產(chǎn)自德國(guó)；CAVOY型電泳儀；Tanon凝膠成像系統(tǒng)（2500）；其他化學(xué)試劑為進(jìn)口產(chǎn)品或國(guó)產(chǎn)分析純產(chǎn)品；各種規(guī)格移液器，購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司；恒溫箱水浴鍋等。

1.3 方法

1.3.1 抗體檢測(cè)

PCV抗體檢測(cè)嚴(yán)格按照韓國(guó)JBT公司生產(chǎn)的PCV抗體檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行相關(guān)操作。結(jié)果判定： PCV抗體檢測(cè)試劑盒的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：被檢樣品 S/P值＜0.30，判為陰性；0.3≤ S/P值＜0.40，判為可疑；S/P值≥0.4，判為陽性。

1.3.2 病原檢測(cè)

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)設(shè)計(jì)引物，引物由南京思普金生物科技有限公司合成，該對(duì)引物的擴(kuò)增目的片段大小為569 bp，見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清PCV抗體檢測(cè)結(jié)果

30頭接種過豬圓環(huán)病毒疫苗現(xiàn)場(chǎng)剖殺活豬血清的PCV抗體結(jié)果見表2。

由表2可知：30頭現(xiàn)場(chǎng)剖殺的接種過豬圓環(huán)病毒疫苗豬血清的PCV抗體檢測(cè)結(jié)果均為陽性，抗體陽性率為100%，抗體S/P平均值為1.27。對(duì)上述豬只剖殺后采集病料，進(jìn)行PCV的PCR檢測(cè)，以分析抗體和病原之間的相關(guān)性。

2.2 病料PCV病原檢測(cè)結(jié)果

30頭現(xiàn)場(chǎng)剖殺的接種過豬圓環(huán)病毒疫苗的豬只病料病原檢測(cè)結(jié)果見表3和圖1。

由表2、表3可知：上述30頭豬中有9頭PCR檢測(cè)結(jié)果為陽性，病原陽性率為30.0%（9/30)； 其中77.8%（7/9）病原陽性豬的PCV抗體S/P值大于1.8，70.0%（7/10）的PCV抗體S/P值大于1.8豬為PCV病原陽性；說明高PCV抗體豬與病原檢出率之間的相關(guān)性較高。從本次的檢測(cè)可以看出：僅僅根據(jù)抗體檢測(cè)，雖不能精確地判定豬群是否感染了野毒，但通過對(duì)群體的檢測(cè)能大概率地判斷豬群是否感染了野毒。

3 討論

江蘇省農(nóng)科院動(dòng)物疫病診斷檢測(cè)中心在日常的抗體檢測(cè)和PCR檢測(cè)中通過對(duì)同一頭豬同時(shí)進(jìn)行豬瘟、豬藍(lán)耳病、PCV的抗體和病原的檢測(cè)，以分析抗體和病原之間的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCV的相關(guān)性最好，即高抗體豬只對(duì)應(yīng)病原的PCR檢出率最高，具體原因可能是豬瘟疫苗和豬藍(lán)耳病疫苗都是活疫苗，而豬圓環(huán)病毒是滅活疫苗，滅活疫苗產(chǎn)生抗體的能力弱于活疫苗。

通過對(duì)上述30頭臨床門診接診豬只同時(shí)進(jìn)行PCV的抗體檢測(cè)和病原檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，如果檢測(cè)豬只抗體的S/P值大于1.8（韓國(guó)JBT公司生產(chǎn)的PCV抗體檢測(cè)試劑盒），則檢測(cè)豬只存在PCV野毒感染的可能性較大，該1.8的數(shù)值是根據(jù)本次檢測(cè)得出的一個(gè)大概的值，如果檢測(cè)的樣本量足夠大，該數(shù)值可能會(huì)小幅度的上下浮動(dòng)。目前獸醫(yī)臨床上除豬偽狂犬病病毒 gpI 抗體(野毒)檢測(cè)試劑盒外，其余抗體檢測(cè)試劑盒尚不能區(qū)分檢測(cè)到的抗體來自于疫苗免疫還是野毒感染，在本中心日常的臨床檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，健康狀況正常或良好豬群的PCV抗體S/P值絕大部分小于1.8。因此，如果能夠?qū)ΤＲ?guī)的檢測(cè)方法進(jìn)行摸索、創(chuàng)新和改進(jìn)，將會(huì)是對(duì)目前檢測(cè)技術(shù)非常有益的補(bǔ)充[5]。

[1] 殷震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)[M].2版.北京：科學(xué)出版社，1997.

[2] 李玲，李國(guó)新，周艷君.等.2008-2011年中國(guó)部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2012，20（2）：1-10.

[3] 蔡高峰，李凱，張黎，等.豬圓環(huán)病毒2型江西株的全基因組克隆和序列分析[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2017，44（3）：790-798.

[4] 邵萌，呂亞輝，杜謙，等.2010-2012年陜西地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型分子流行病學(xué)調(diào)查[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2013，41（10）：19-26.

[5] 孫華偉，張敬峰，趙永前，等.一種鑒別豬偽狂犬母源抗體與野毒感染的檢測(cè)方法的建立[J].豬業(yè)科學(xué)，2016，33（7）：48-49.

2017-05-21）

江蘇省科技成果轉(zhuǎn)化與推廣資金【編號(hào)：KF(17)1033】

孫華偉（1981- ），男，碩士，助理研究員，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，主要從事豬病的臨床診斷及重大疾病流行規(guī)律、診斷、監(jiān)測(cè)和控制技術(shù)研究。E-mail：sunhuawei66@163.com

*通訊作者：張小飛