王貴平，胡曉通，劉 帥

（湖南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，湖南 長沙 410128）

豬流行性腹瀉和豬圓環(huán)病毒病混合感染的診治

王貴平，胡曉通，劉 帥

（湖南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，湖南 長沙 410128）

2017年1月，湖南省婁底市某規(guī)?；i場暴發(fā)了一場以新生仔豬腹瀉和嘔吐為主要癥狀的傳染病，從送檢腹瀉仔豬中經(jīng)PCR檢測到了豬流行性腹瀉病毒和豬圓環(huán)病毒2型。經(jīng)過調(diào)整免疫程序和對癥治療，該病得到了有效的控制，現(xiàn)報告如下。

1 發(fā)病情況

該場存欄經(jīng)產(chǎn)母豬500頭，母豬產(chǎn)前60天和30天注射了國產(chǎn)某公司的豬流行性腹瀉病毒活疫苗。上月（12月）下旬開始母豬產(chǎn)仔后第2天，整窩仔豬突然出現(xiàn)嘔吐和水樣噴射狀腹瀉。0～7日齡的仔豬腹瀉后大多數(shù)死亡，8～40日齡以后仔豬腹瀉后大多數(shù)經(jīng)過治療能康復，日齡越大死亡率越低。統(tǒng)計結果：2017年1月份產(chǎn)仔95窩998頭，發(fā)病881頭（占88.28%），死亡609頭（占61.02%）。

2 臨床癥狀及現(xiàn)場剖檢

3 病原檢測

采集6頭病豬的淋巴結、肺和腸等病料，送至湖南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院進行PCR檢查。根據(jù)流行病學、臨床癥狀和病理剖檢變化，初步確定檢查項目為豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）和豬流行性腹瀉病毒（PEDV）。

3.1 引物

參考相關文獻，送上海生工生物工程股份有限公司合成（表1）。

3.2 樣品處理

取病豬的腸道內(nèi)容物及腸系膜淋巴結和腹股溝淋巴結等組織約0.5 g，剪碎，加1 mL無菌PBS勻漿，加入無菌EP管中，-80℃反復凍融3次，10 000 r/min離心5 min，取100 μL上清液加入無菌EP管中。

表1 本試驗中所用到的引物

3.3 RNA提取及反轉(zhuǎn)錄

取上述上清液100 μL，按照RNA提取試劑盒操作說明提取總RNA，最后病料RNA溶于100 μL滅菌水中。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明進行反轉(zhuǎn)錄操作，獲得cDNA。

五是與中國農(nóng)業(yè)科學院合作，在小嶺鄉(xiāng)大路村建立了小麥苗情數(shù)字化遠程監(jiān)控監(jiān)測點，可適時了解當?shù)氐耐寥罍囟取穸?、風力、風向等環(huán)境因素以及小麥的長勢情況。對現(xiàn)代微電子技術和網(wǎng)絡信息技術改造傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)，適應現(xiàn)代農(nóng)業(yè)智能化、信息化發(fā)展要求，提升農(nóng)業(yè)科學決策水平意義深遠。

3.4 DNA提取

取上述上清液100 μL，按照DNA提取試劑盒操作說明提取總DNA，最后病料RNA溶于100 μL滅菌水中。

3.5 PCR反應（25 μL）

1.5 μmol/L上、下游引物各1.0 μL，模板（DNA或cDNA）3.0 μL，10×PCR Mix 2.0 μL，加無菌水至20.0 μL。94℃預變性5 min后，按94℃ 45 s，表1中退火溫度30 s，72℃45 s的循環(huán)程序進行30次循環(huán)，最后一個循環(huán)結束后72℃再延伸7 min，取PCR產(chǎn)物于含EB的0.8%瓊脂糖膠中電泳，紫外線燈下觀察分析。

4 防控措施

4.1 加強生物安全措施

全場封群：在疫情期間，嚴禁生產(chǎn)區(qū)工作人員出入，飼養(yǎng)員和生產(chǎn)工具嚴禁串舍。進出豬場的車輛都要進行嚴格清洗和消毒。豬舍外面場地和豬舍空欄用2%～3%的燒堿溶液噴灑消毒，沖洗干凈后，再用福爾馬林液徹底消毒，空欄至少7 d再進豬。豬舍內(nèi)每3 d用消毒水帶豬消毒1次，豬舍走廊和過道用福爾馬林液每3天消毒1次。病死豬都要經(jīng)過深埋或化糞池處置等無害化處理。

4.2 緊急接種疫苗和對癥治療

對全群母豬進行PEDV和PCV2緊急接種。然后對產(chǎn)前30 d的生產(chǎn)母豬進行PEDV和PCV2跟胎接種?？梢宰耘淇诜a液鹽，配方：氯化鈉4.5 g、氯化鉀1.5 g、碳酸氫鈉2.5 g、葡萄糖20 g，充分溶解于1 000 mL溫開水中即成；也可以用市售的口服補液鹽。將腹瀉欄的豬舍上游飲水開關關閉，下游飲水開關打開將管中水全部放完后關閉。從飲水管上游導入口服補液鹽，讓全豬群飲服。 即將分娩的母豬進產(chǎn)房前全身消毒，分娩前將會陰部和乳腺部仔細消毒后抹干。將新生腹瀉仔豬隔離，灌服奶粉和口服補液鹽和慶大霉素；用消毒藥水浸泡過的干燥抹布將仔豬嘔吐物和腹瀉物擦拭干凈。

5 結果與分析

5.1 臨床癥狀

腹瀉嚴重仔豬脫水，皮膚無彈性；被毛蓬亂，精神萎靡，水樣腹瀉，糞便呈水泥漿樣或黃色，體表常被稀糞污染。長期腹瀉仔豬極度消瘦最后死亡。將發(fā)病仔豬倆后腿往上提，發(fā)現(xiàn)仔豬腹股溝淋巴結明顯腫大，呈青紫色。

5.2 剖檢病變

腹瀉死亡仔豬小腸腸管內(nèi)容物稀薄，呈黃色充滿黃色液體；腸壁變薄，常充滿氣體，腸系膜水腫、充血或出血變化，腸系膜淋巴結腫脹；有的腸系膜淋巴結有勻質(zhì)蒼白色變化；漿膜可見到斑網(wǎng)狀變化。胃內(nèi)充滿未消化的乳糜，胃壁呈現(xiàn)暗紅色於血，其他臟器無顯著一致性病變。

5.3 PCR檢測結果

用PCR方法從送檢的 6份病料中檢測到PEDV核酸片段（約450 bp，圖1）和PCV2核酸片段（約630 bp，圖2）的條帶，與預期大小一致。其中PEDV的檢出率為100%（6/6，圖1），PCV2的檢出率為50%（3/6，圖2）。

圖1 PEDV-PCR結果

圖2 PCV2-PCR結果

5.4 防控結果

經(jīng)1個多月的綜合防控，新發(fā)腹瀉仔豬逐漸明顯減少，死亡率也大幅度降低至10%以內(nèi)。45 d后恢復正常生產(chǎn)秩序。

6 討論

本次腹瀉主要發(fā)生于0～15日齡仔豬，尤其1～7日齡仔豬死亡率極高，幾乎達到100%。病料經(jīng)疫苗公司檢測發(fā)現(xiàn)，豬瘟病毒（CSFV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬藍耳病病毒（PRRSV）以及豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）等均為陰性，可排除其他常見病毒致病的可能。根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變及（RT）PCR檢測，最終確定為PEDV和PCV2混合感染引起的仔豬腹瀉。

豬圓環(huán)病毒感染可以加重流行性腹瀉病毒感染程度，這一點可以在病原學PCR結果和臨床癥狀中得到證明，PCV2-PCR檢測為陰性者，PEDV-PCR檢測陽性條帶較弱，并且病豬淋巴結組織學變化不明顯；PCV2-PCR檢測陽性病豬的淋巴結病變嚴重[3]。感染圓環(huán)病毒2型的仔豬有可能受到免疫抑制，從而對流行性腹瀉病毒等其他病毒或細菌的易感性增加[4]。這些研究結果提示豬場應重視圓環(huán)病毒2型的預防工作，以免因其引起免疫抑制繼發(fā)其他病毒或細菌感染導致豬場出現(xiàn)嚴重疾病造成極高的仔豬死亡率。

一旦豬場出現(xiàn)比較嚴重的、死亡率較高的傳染病，首先應考慮的是及時隔離和消毒，然后及時準確地采集病料檢測，在參考實驗室檢測的結果上進行及時診斷。然后立即制定治療方案，包括綜合防控方案及特異性對癥治療措施，包括生物安全防控、對病豬群體進行全群緊急免疫及全群投藥、對個體病豬進行對癥治療。

混合感染案例提示應做好PCV2和PRRSV等導致機體免疫抑制病原的預防工作，以減少復雜疫病的發(fā)生。

[1]胡嘉彥.PCR技術在豬圓環(huán)病毒2型檢測中的應用[J].畜牧與飼料科學，2015，36（1）：7-9.

[2]于新友，李天芝，王金良，等.一步法RT-PCR快速檢測豬流行性腹瀉病毒[J].養(yǎng)豬，2014（5）：118-120.

[3]劉洋，庫旭鋼，劉曉麗，等.豬流行性腹瀉病和豬圓環(huán)病毒病混合感染的診治[J].中國畜牧獸醫(yī)，2015，42（10）：2753-2761.

[4]Hirai T,Nunoya T,Ihara T,et al.Dual infection with PCV-2 and porcine epidemic diarrhea virus in neonatal piglets[J].Vet Rec,2001,148(15):482-484.

（編輯：柳青）

S858.285.3

A

1002-1957(2017)04-0124-02

2017-06-18

湖南省教育廳優(yōu)秀青年基金資助科研項目（13B050）；湖南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院2015年大學生創(chuàng)新性實驗項目（dycx1513）作者簡介：王貴平（1973-），男，湖北咸寧人，副教授，博士，研究方向為豬傳染病防控.E-mail：wanggp003@163.com