易新健，劉 準(zhǔn)，凌云志，張翠翠，陳申秒

（山東濱州沃華生物工程有限公司，山東省動(dòng)物病原微生物工程實(shí)驗(yàn)室，山東 濱州 256600）

豬鏈球菌耐藥現(xiàn)狀分析及防控

易新健，劉 準(zhǔn)，凌云志，張翠翠，陳申秒

（山東濱州沃華生物工程有限公司，山東省動(dòng)物病原微生物工程實(shí)驗(yàn)室，山東 濱州 256600）

近年來，隨著豬場(chǎng)抗生素的大量、不合理使用，導(dǎo)致豬群細(xì)菌性病原的耐藥性非常嚴(yán)重。文章以臨床發(fā)病豬分離到的53株鏈球菌為研究對(duì)象，通過紙片法對(duì)其進(jìn)行了20種臨床常用抗生素的耐藥性分析。結(jié)果表明，豬鏈球菌對(duì)常用抗生素耐藥率高，耐藥情況復(fù)雜，特別是對(duì)四環(huán)素、鏈霉素、卡那霉素和林可霉素的耐藥率均在80%以上，而腦膜炎型鏈球菌必用的磺胺類藥物的耐藥率達(dá)到73.58%。針對(duì)鏈球菌耐藥嚴(yán)重的情況下，建議豬場(chǎng)進(jìn)行疫苗免疫，選用敏感抗生素用于治療。

豬鏈球菌；耐藥性；疫苗免疫；抗菌藥物

引起豬鏈球菌病鏈球菌種類有豬鏈球菌、馬鏈球菌獸疫亞種和類豬鏈球菌等，目前在國內(nèi)豬場(chǎng)主要流行的鏈球菌有豬鏈球菌2型、7型、9型和馬鏈球菌獸疫亞種[1-3]，主要臨床表現(xiàn)為敗血型、腦膜炎型、關(guān)節(jié)腫脹型和淋巴膿腫型等。

目前國內(nèi)對(duì)豬鏈球菌病的預(yù)防沒有足夠的重視，簡單地認(rèn)為使用抗生素治療就能解決鏈球菌問題。但在養(yǎng)殖過程中，大量不合理的添加抗生素用于促進(jìn)動(dòng)物生長和防治細(xì)菌性疾病的發(fā)生，使得豬鏈球菌對(duì)大部分臨床應(yīng)用的抗生素產(chǎn)生了不同程度的耐藥性[4-7]，且多重耐藥菌株不斷增加，導(dǎo)致疫病無法得到有效控制，豬鏈球菌的疫情也日趨嚴(yán)重。本文以臨床發(fā)病豬分離到的鏈球菌為研究對(duì)象，對(duì)其耐藥性進(jìn)行分析并結(jié)合臨床實(shí)際情況提供防治方案供養(yǎng)殖戶參考。

1 材料

1.1 培養(yǎng)基與試劑

新生牛血清購于浙江天杭生物科技有限公司；胰酪胨大豆瓊脂（TSA）培養(yǎng)基購于上海中科生物技術(shù)開發(fā)有限公司；藥敏紙片和細(xì)菌微量生化管購于杭州微生物試劑有限公司。

1.2 病料來源

病料來源于2016年全國各地送檢至山東省病原微生物工程實(shí)驗(yàn)室的327份樣品。無菌采集病死豬的腦、肝臟、脾臟、頜下淋巴結(jié)及關(guān)節(jié)積液等。

2 方法

2.1 細(xì)菌的分離鑒定

將病料接種于5%小牛血清TSA瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24 h，挑取表面光滑的小菌落進(jìn)行革蘭氏染色，如有成對(duì)或鏈狀球形革蘭氏陽性菌，則判定為可疑菌落，將細(xì)菌純培養(yǎng)后進(jìn)行生化鑒定。

2.2 藥敏試驗(yàn)

參照CLSI的紙片擴(kuò)散法（K-B）進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。將分離純化的菌株制成菌懸液，用滅菌PBS將菌懸液濃度調(diào)整至含活菌數(shù)為107CFU/mL左右，取稀釋好的菌懸液100 μL均勻涂布在5%小牛血清TSA培養(yǎng)基上，用鑷子夾取藥敏紙片貼在培養(yǎng)基上。37℃培養(yǎng)16 h，用游標(biāo)卡尺測(cè)定抑菌圈直徑并記錄下來。根據(jù)CLSI藥敏試驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，即敏感、中敏、耐藥3種形式判斷豬鏈球菌對(duì)抗生素的耐藥性。

3 結(jié)果與分析

3.1 分離鑒定結(jié)果

通過革蘭氏染色和生化鑒定，從327份病料中分離到53株鏈球菌，分離率為16.21%。本機(jī)構(gòu)鏈球菌分離率為16.21%，明顯低于其他研究機(jī)構(gòu)的分離率（30%～40%）[1，8]，主要原因：一方面有部分病料送到檢測(cè)室已經(jīng)不同程度腐敗，導(dǎo)致分離時(shí)雜菌太多，無法分離純化；另一方面送至檢測(cè)室的病豬已經(jīng)用過不少抗生素治療（某些豬肝臟和腎臟明顯腫大），導(dǎo)致病料中病原菌很少。

3.2 藥敏結(jié)果

通過紙片擴(kuò)散法對(duì)分離到的53株鏈球菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明（表1），豬鏈球菌對(duì)常用抗生素耐藥率高，耐藥情況復(fù)雜，特別是對(duì)四環(huán)素、鏈霉素、卡那霉素和林可霉素的耐藥率均在80%以上，而腦膜炎型鏈球菌必用的磺胺類藥物的耐藥率達(dá)到73.58%；其次表現(xiàn)為中敏，對(duì)部分常用藥物介于耐藥與敏感之間，如慶大霉素、恩諾沙星、多黏菌素B等；而敏感的藥物非常少，主要對(duì)頭孢類藥物比較敏感。進(jìn)一步對(duì)其耐藥譜進(jìn)行分析，結(jié)果表明（表2），鏈球菌的耐藥譜非常廣，不同豬場(chǎng)耐藥情況不一樣，14～16重耐藥率最高，占總數(shù)的62.26%。

表1 53株鏈球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果 株

表2 53株鏈球菌耐藥譜

4 防控

4.1 營養(yǎng)與飼養(yǎng)管理

營養(yǎng)是豬群健康的基礎(chǔ)。目前養(yǎng)殖場(chǎng)特別是小規(guī)模的豬場(chǎng)，飼料中的霉菌毒素超標(biāo)現(xiàn)象嚴(yán)重，導(dǎo)致豬群健康度明顯下降。飼養(yǎng)管理是疫病防控的基礎(chǔ)，包括豬場(chǎng)清潔度、干燥度、溫度的控制、消毒、發(fā)病豬的隔離等，這些均與細(xì)菌性疾病的發(fā)生有著必然的聯(lián)系，這也是細(xì)菌性疾病被稱為環(huán)境性疾病的原因。

4.2 疫苗免疫

疫苗免疫是豬場(chǎng)鏈球菌控制的必要措施。原因一，目前各養(yǎng)殖場(chǎng)使用細(xì)菌性疫苗防疫意識(shí)較差，很多豬場(chǎng)通過添加抗生素來預(yù)防豬鏈球菌，導(dǎo)致豬鏈球菌的耐藥性日趨嚴(yán)重復(fù)雜，而等鏈球菌病發(fā)生之時(shí)，已經(jīng)無藥可用；原因二，隨著國家對(duì)肉制品安全的控制，對(duì)抗生素使用嚴(yán)格監(jiān)管以及對(duì)無抗養(yǎng)殖的推廣；原因三，豬鏈球菌主要表現(xiàn)為腦膜炎型、敗血型、關(guān)節(jié)腫脹型及淋巴膿腫型，而腦膜炎型和敗血型屬于急性型，大部分一發(fā)現(xiàn)就屬于疫病晚期，無法治療；原因四，目前藍(lán)耳病特別穩(wěn)定的養(yǎng)殖場(chǎng)較少，而藍(lán)耳病能夠增加鏈球菌病和副豬嗜血桿菌病的發(fā)病率。目前市面上有3種疫苗，第一種豬鏈球菌三價(jià)滅活疫苗，該疫苗血清型覆蓋面廣，含豬鏈球菌2型、7型、馬鏈球菌獸疫亞種；第二種豬鏈球菌二價(jià)滅活疫苗，該疫苗含豬鏈球菌2型和馬鏈球菌獸疫亞種；第三種豬敗血型鏈球菌活疫苗，由于鏈球菌血清型眾多，活疫苗容易導(dǎo)致細(xì)菌重組與變異，因此不推薦使用鏈球菌活疫苗。豬鏈球菌血清型復(fù)雜，各血清型之間交叉保護(hù)能力差，而國內(nèi)鏈球菌主要流行的血清型為2型、7型、9型及馬鏈球菌獸疫亞種，因此豬鏈球菌三價(jià)滅活疫苗具有絕對(duì)的優(yōu)勢(shì)。

4.3 藥物治療

在做好疫苗防控后，針對(duì)個(gè)別發(fā)病豬采用藥物治療。藥物采用豬場(chǎng)較少使用的抗生素用于治療，效果較好。豬場(chǎng)特別是大規(guī)模豬場(chǎng)，需要對(duì)自己豬場(chǎng)細(xì)菌的藥物敏感性進(jìn)行摸底，篩選出比較敏感的藥物，而這種藥物只用在發(fā)病豬的治療上，在平常的預(yù)防保健禁止使用（這一方案在之前豬場(chǎng)是無法做到，原因是藥物多為復(fù)方抗生素和飼料中的藥物添加，而目前國家對(duì)藥物中違規(guī)添加查處較嚴(yán)，抗生素均屬于單方藥物，且大養(yǎng)殖場(chǎng)均有自己的飼料加工場(chǎng)可以嚴(yán)格控制飼料中抗生素的種類）。

[1]王宇婷，王云光，吳丹丹，等.2007-2015年黑龍江省豬鏈球菌病分子流行病學(xué)調(diào)查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2016（9）：109-111.

[2]鞠愛萍.蘇中地區(qū)豬鏈球菌分子流行病學(xué)調(diào)查及豬鏈球菌2型反應(yīng)調(diào)控因子RevS缺失株的構(gòu)建[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

[3]王巍.四川地區(qū)豬鏈球菌流行調(diào)查及其病原特性研究[D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2015.

[4]劉志科，張秋雨，陳創(chuàng)夫.豬鏈球菌病原的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J].養(yǎng)豬，2017（2）：105-108.

[5]馬國福.豬鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國動(dòng)物保健，2016（9）：80-81.

[6]張維誼，王曉旭，寧昆，等.豬源豬鏈球菌耐藥情況分析[J].中國農(nóng)業(yè)信息，2016（6）：101-103.

[7]龔團(tuán)蓮.26株豬鏈球菌對(duì)抗菌藥物的敏感性分析[J].畜牧與飼料科學(xué)，2016，37（1）：16-17.

[8]Liu H S,Zhao Z Q,Xi X J,et al.Occurrence of Pasteurella multocida among pigs with respiratory disease in China between 2011 and 2015[J].Irish Veterinary Journal,2017,70(2):2-6.

（編輯：郭玉翠）

S858.28

A

1002-1957(2017)04-0107-02

2017-07-05

易新?。?988-），男，湖南長沙人，碩士，主要從事動(dòng)物傳染病學(xué)研究工作.E-mail：yixinjian2007@163.com

陳申秒（1983-），男，助理研究員，碩士，主要從事動(dòng)物傳染病的診斷與防治工作.E-mail：csmiao.science@163.com