張永輝，王學(xué)昌，陳 晨，劉蓉春，周 莉，楊為民

（1．云南省第三人民醫(yī)院，云南 昆明 650011；2．昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500）

燈盞花乙素聯(lián)合硝普鈉對大鼠離體冠狀動(dòng)脈血管環(huán)的影響

張永輝1，王學(xué)昌1，陳 晨2，劉蓉春1，周 莉1，楊為民2

（1．云南省第三人民醫(yī)院，云南 昆明 650011；2．昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500）

目的 探討燈盞花乙素（Scutellarin，SCU）對硝普鈉（sodiumnitroprusside，SNP）舒張冠狀動(dòng)脈效應(yīng)的影響。方法 制備冠狀動(dòng)脈血管環(huán)，分為對照組，觀察組，應(yīng)用Myograph血管張力分析系統(tǒng)測定血管環(huán)的張力變化。對照組采用累積劑量法加入硝普鈉；觀察組用500 ?M的燈盞花乙素孵育15 min后，累積劑量法加入硝普鈉。研究對照組和觀察組對60 mmol/L高鉀溶液誘導(dǎo)血管收縮的舒張效應(yīng)。并制備缺血再灌注血管環(huán)模型。結(jié)果 在正常血管環(huán)上，觀察組Emax明顯低于對照組（P＜0.05）；在缺血再灌注模型血管環(huán)上，觀察組EC50顯著低于對照組（P＜0.05）。結(jié)論 SCU增加了SNP對冠狀動(dòng)脈的舒張效應(yīng)。

燈盞花乙素；硝普鈉；冠狀動(dòng)脈；血管張力

高血壓急癥是在某些誘因作用下，血壓急劇升高，病情急劇惡化，同時(shí)伴有急性心肌梗死、急性腦卒中、不穩(wěn)定性心絞痛等缺血性心腦血管病變[1]，甚至危及患者生命，必須及時(shí)處理。臨床用藥選擇，要求起效快、藥力強(qiáng)，同時(shí)不會(huì)對心率、心臟和腦部血流量造成不利影響。硝普鈉屬于血管擴(kuò)張藥物，作用機(jī)制是擴(kuò)張動(dòng)脈和靜脈的平滑肌，降低周圍血管阻力，而且對患者的心肌收縮沒有影響，常用于高血壓急癥迅速控制血壓。

燈盞花乙素（Scutellarin，SCU） 是從中藥燈盞花中提取的主要成分燈盞花素的活性成分，主要用于心腦血管疾病及高黏血癥的治療[2-3]。目前證據(jù)表明[4]，與單用西藥相比，聯(lián)合燈盞花乙素對心血管疾病的治療有較好的療效。本文就硝普鈉聯(lián)合燈盞花乙素與單用硝普鈉對大鼠離體冠脈血管環(huán)張力的影響進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Sprague-Dawley大鼠，體重200～250 g，雌雄兼用，許可證號(hào)：SYXK（陜）2007-003，購自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 藥品和試劑

SNP批號(hào)：13755-38-9（Sigma公司）；燈盞花乙素：昆明龍津藥業(yè)有限公司（99%）；其余試劑為市售國產(chǎn)分析純。

1.3 設(shè)備

SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；HJ-3數(shù)顯磁力加熱攪拌器，金壇市丹瑞儀器廠；AL104電子天平，Mettler Toledo公司；QL-902旋渦振蕩混勻器，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；HHS112恒溫水浴鍋，江蘇省醫(yī)療器械廠；可調(diào)節(jié)容量移液器，上?？迫A實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司；CQ-120超聲波清洗機(jī)，上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器械廠；Motic SMZ168-TL解剖顯微鏡，麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司；維納斯眼科剪，江蘇蘇科醫(yī)療器械有限公司；WA3010顯微鑷，上海醫(yī)療器械集團(tuán)；PH計(jì)，Mettler Toledo公司；Wire Myograph System DMT ，Danish Myo Technology Co；Powerlab數(shù)據(jù)記錄和分析系統(tǒng)，澳大利亞Adinstruments公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 主要試劑及藥物的配制

MOPS-PSS液（1L）含：NaCl8.18 g、KCl0.35 g、MOPS0.42 g、Na2HPO4·12H2O 0.43 g、Na2-EDTA·2H2O 0.007g，臨用前取Glucose·H2O 1.1 g， MgSO4?7H2O 0.30 g、CaCl2 0.18 g，再加水至1000 mL，預(yù)熱至37℃，調(diào)pH至7.4。

MOPS-KPSS液（1L）含60 mmol鉀：NaCl4.95 g、KCl4.48 g、MOPS0.42 g、Na2HPO4?12H2O 0.43 g、Na2-EDTA?2H2O 0.007 g，臨用前取Glucose·H2O 1.1 g，MgSO4?7H2O 0.30 g、CaCl2 0.18 g，再加水至1000 mL，預(yù)熱至37℃，調(diào)pH至7.4。

燈盞花乙素（99%），臨用前適量雙蒸水溶解配置成10 mM溶液。

SNP：臨用前以適量雙蒸水溶解至100 mM，再依次用雙蒸水稀釋配制成系列濃度：7 mM、2 mM、700 μM、200 μM、70 μM、20 μM、7 μM、2 μM、1 μM，避光保存。

1.4.2 受試血管環(huán)制備

大鼠斷頭處死后，迅速取出心臟置于4℃MOPS-PSS液中．體式解剖顯微鏡下，用維納斯剪小心剝離冠狀動(dòng)脈周圍組織，剪成1 mm長度的血管環(huán)，制備正常血管環(huán)。把未剝離周圍組織的冠狀動(dòng)脈放入事先通入N2的無糖MOPSPSS液的密閉容器中，并持續(xù)通入N2 1h后取出，剝離周圍組織，剪成1 mm長度的血管環(huán)，制備缺血再灌注血管環(huán)模型。

1.4.3 受試血管環(huán)平衡

體式解剖顯微鏡下，用2根60 m的金屬絲穿過血管環(huán)，分別掛置于DMT浴槽中，浴槽中盛MOPS-PSS液5 mL，恒溫37℃并且持續(xù)通通入95%O2和5%CO2的混合氣體，以模擬機(jī)體內(nèi)環(huán)境。待血管環(huán)全部置于DMT上后，調(diào)節(jié)微調(diào)裝置，預(yù)先給基礎(chǔ)張力1 mN．每隔15 min更換浴槽內(nèi)MOPSPSS工作液，平衡60 min后更換成60 mmol/L高鉀溶液，高鉀溶液能夠使冠狀動(dòng)脈收縮，待張力穩(wěn)定至一平臺(tái)期，以MOPS-PSS液充分洗凈（4次，每次間隔5 min）至張力恢復(fù)基線水平，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)兩次。前后兩次高鉀刺激后血管收縮幅度相差不超過10%進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)[5]。

1.4.4 燈盞花乙素對受試血管環(huán)的影響

冠狀動(dòng)脈平衡并檢測血管環(huán)活性合格后，加入10 mM SCU 250 μL，即以濃度500 μM 孵育血管環(huán)15 min，加入60 mM K+收縮血管，待收縮達(dá)到最大值且平衡后每隔5 min累加濃度法加入受試藥硝普鈉，對照組加入相應(yīng)體積的溶媒。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 燈盞花乙素對大鼠離體正常冠脈和模擬缺血再灌注冠脈的作用

60 mmol/L高鉀誘導(dǎo)血管收縮，待收縮達(dá)到最大值且平衡后累每隔5 min加入受試藥硝普鈉，使?jié)舛壤鄯e為0.001μM、0.003 μM、0.01 μM、0.03 μM、0.1 μM、0.3 μM、1 μM、3 μM、10 μM，對照組加入相應(yīng)體積的溶媒。結(jié)果觀察組Emax（16.75±2.13%）明顯低于對照組Emax（50.42±9.75%），由于對照組硝普鈉濃度的增加反而血管舒張效應(yīng)減弱，由于硝普鈉舒張效應(yīng)無法維持，對照組EC50值無法擬合。見表1、表2、圖1。

2.2 燈盞花乙素對大鼠缺血再灌注冠狀動(dòng)脈的舒張作用

在模擬缺血再灌注的血管環(huán)上，觀察組E C 5 0（0.1 3±0.0 3）μM明顯低于對照組（0.39±0.20）μM，觀察組和對照組Emax分別為（24.83±5.44）%、（44.92±6.46）%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3、表4、圖2

表1 硝普鈉對正常SD大鼠離體冠狀動(dòng)脈的舒張效應(yīng)（±s）

表1 硝普鈉對正常SD大鼠離體冠狀動(dòng)脈的舒張效應(yīng)（±s）

SNP（μM） Contraction（mM K+）vehicle（PSS） SCU（μM）0.001 98.94±0.73 99.41±0.90 0.003 96.81±1.71 97.99±1.80 0.01 92.50±3.30 94.66±3.00 0.03 85.00±4.06 86.50±4.06 0.1 67.37±4.50 70.41±5.62 0.3 48.36±4.39 50.58±4.72 1 37.99±4.39* 34.00±3.55 3 40.43±6.32 26.10±2.77 10 40.47±7.43 22.53±2.31 30 45.10±8.27 20.30±2.07 100 50.42±9.75 16.75±2.13*

表2 兩組EC50和Emax的比較（±s）

表2 兩組EC50和Emax的比較（±s）

Group EC50（μM） Emax（mM K+）vehicle（PSS） - 37.99±4.39 SCU（500 μM） 0.27±0.17 16.75±2.13

圖1 Concentration-response curves of SNP in SD rat normol coronary artery incubated with SCU(500 ?M).EC50 is compute by SigmaPlot 10.0.

表3 硝普鈉對SD大鼠離體缺血再灌注冠狀動(dòng)脈的舒張效應(yīng)（±s）

表3 硝普鈉對SD大鼠離體缺血再灌注冠狀動(dòng)脈的舒張效應(yīng)（±s）

SNP（μM） Contraction（mM K+）vehicle（PSS） SCU（μM）0.001 100.06±2.33 97.26±2.01 0.003 100.31±3.76 95.88±3.67 0.01 96.84±4.23 94.25±5.01 0.03 82.58±5.84 91.22±5.90 0.1 69.21±5.82 80.21±6.95 0.3 43.48±6.36 59.39±7.27 1 29.79±4.60 43.31±5.99 3 28.39±3.64 33.16±4.77 10 29.26±4.48 30.15±4.33 30 36.05±5.38 28.21±4.42 100 44.92±6.46 24.83±5.44

表4 觀察組和對照組EC50和Emax的比較（±s）

表4 觀察組和對照組EC50和Emax的比較（±s）

Group EC50（μM） Emax（mM K+）Vehicle（PSS） 0.13±0.03 28.39±3.64 SCU（μM） 0.39±0.20 24.83±5.44

圖2 Concentration-response curves of SNP in SD rat ischemiareperfusion coronary artery incubated with SCU(500 ?M).EC50 is compute by SigmaPlot 10.0.

3 討 論

燈盞花乙素是燈盞花素的有效成分，研究表明，燈盞花乙素能夠擴(kuò)張微小血管，改善微循環(huán)，抗血小板聚集，降低血液粘度[6-7]，對心腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用[8]。因此，廣泛應(yīng)用于缺血性心腦血管疾病的治療。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)燈盞花能夠舒張大鼠離體心臟冠狀動(dòng)脈[9]。

燈盞花素通過多種效應(yīng)發(fā)揮內(nèi)皮保護(hù)作用[10]，進(jìn)而擴(kuò)張血管。另有研究表明，在常規(guī)西藥治療的基礎(chǔ)上，加用燈盞花乙素治療缺血性心血管病效果明顯[4，11-12]，可以通過激活JAK2/STAT3信號(hào)通路對心肌缺血再灌注損傷起保護(hù)作用[13]。

結(jié)果顯示，燈盞花乙素能夠增加硝普鈉對高鉀誘導(dǎo)的冠狀動(dòng)脈血管環(huán)的舒張效應(yīng)，燈盞花乙素孵育后的血管環(huán)Emax為（16.75±2.13）%，明顯低于對照組（50.42±9.75）%。在缺血再灌注血管環(huán)模型上，燈盞花乙素孵育后的EC50（0.13±0.03）μM明顯低于對照組（0.39±0.20）μM。Emax反映了冠脈的舒張程度，Emax數(shù)值小，表明對冠脈舒張效應(yīng)明顯。實(shí)驗(yàn)中，燈盞花乙素孵育后的血管環(huán)，Emax明顯低于對照組。燈盞花乙素在擴(kuò)血管藥物基礎(chǔ)上可有效舒張離體大鼠冠狀動(dòng)脈，并維持穩(wěn)定的有效舒張效應(yīng)。這與燈盞花乙素?cái)U(kuò)張血管、改善循環(huán)作用密切有關(guān)。在缺血再灌注動(dòng)脈環(huán)模型上，燈盞花乙素孵育后的EC50明顯低于對照組，表明燈盞花乙素對缺血再灌注冠脈有保護(hù)作用，與類似文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]。但燈盞花乙素孵育組的Emax與對照組無明顯差異，可能是由于缺血再灌注可導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙，而硝普鈉可以改善存在功能障礙的血管環(huán)的內(nèi)皮功能[14]，而對功能正常的血管內(nèi)皮無保護(hù)作用。結(jié)合實(shí)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)，SCU增強(qiáng)SNP的舒血管效應(yīng)，可能與保護(hù)血管內(nèi)皮有關(guān)，但參與內(nèi)皮保護(hù)的機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究。

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本文編輯：吳宏艷

An experimental study of scutellarin combined with sodium nitroprusside on isolated coronary artery rings in rats

ZHANG Yong-hui1,WANG Xue-chang1,CHEN Chen2,LIU Rong-chun1,ZHOU Li1,YANG Wei-min2
(1.The third people's Hospital of Yunnan Provincet,Yunnan Kunming 650011,China; 2.Yunnan College of pharmacy and Key Laboratory of natural medicine pharmacology of Kunming Medical University,Kunming Medical University,Yunnan Kunming 650500,China)

Objective To determine the effects of SNPon constrictions of isolated coronary artery rings when combined with SCU.Methods Isolated coronary artery rings were mounted in a Multi Myograph system. The control group was treated with cumulative dose of SNP,the observation group was pre-incubation with 500?M SCUfor 15 minutes. Normol and IR rings were pre-contraction with 60 mmol/L KCl to obtain their dose-response curves.Results The observation group have significant vasodilation with lower Emax on normol arteries,(P＜0.001)and lower EC50 on IR arteries,(P＜0.05).Conclusion SCU increased the vasodilation function of SNP on coronary arteries.

Scutellarin;Sodium nitroprusside;Coronary artery;Vasodilation

R914

B

ISSN.2095-6681.2017.14.28.03