高靜媛，楊雨旸，邢磊，李繼安

? 論著 ?

紅景天苷對(duì)糖尿病心肌病大鼠的影響

高靜媛1，楊雨旸2，邢磊1，李繼安2

目的 分析紅景天苷對(duì)糖尿病心肌?。―CM）大鼠的影響。方法 選取SD大鼠60只，雄性，隨機(jī)選取10只納入對(duì)照組，后制備糖尿病心肌病大鼠模型，隨機(jī)分為DCM組、低劑量組（50 mg/ kg）、中劑量組（100 mg/kg）及高劑量組（200 mg/kg），每組各10只。每日按規(guī)定劑量給予紅景天苷灌胃，DCM組給予同劑量的水，連續(xù)給藥12周。藥物干預(yù)12周后，測(cè)定白細(xì)胞介素-6（IL-6）和血管緊張素-Ⅱ（Ang-Ⅱ）水平。動(dòng)物處死后取心肌組織，經(jīng)固定、脫水、包埋后，制成4 μ m切片，行HE染色，光鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果 與對(duì)照組相比，DCM組及紅景天苷藥物干預(yù)組大鼠血清IL-6水平均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。隨著紅景天苷劑量增加，IL-6水平逐漸下降，但中劑量組與高劑量組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，DCM組及所有藥物干預(yù)組血清Ang-Ⅱ水平均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。與DCM組比較，隨著藥物劑量增加，Ang-Ⅱ水平明顯下降，除低劑量組外，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），呈劑量依賴性。HE染色結(jié)果，DCM組心肌組織結(jié)構(gòu)十分紊亂，可見(jiàn)大量片狀局灶性出血壞死，大量中性粒細(xì)胞聚集；低劑量組心肌組織結(jié)構(gòu)非常紊亂，有片狀局灶性出血壞死，有大量中性粒細(xì)胞聚集；中劑量、高劑量組可見(jiàn)少量點(diǎn)狀出血壞死，少量中性粒細(xì)胞聚集。結(jié)論 紅景天苷可明顯降低糖尿病心肌病大鼠白細(xì)胞介素-6和血管緊張素-Ⅱ水平，減輕心肌損傷，具有心肌保護(hù)作用。

紅景天苷；糖尿病心肌?。话准?xì)胞介素-6；血管緊張素-Ⅱ

糖尿病心肌病（DCM）為糖尿病主要的并發(fā)癥之一，也是糖尿病患者死亡的主要原因之一。紅景天苷是中藥紅景天最重要的有效成分之一，有研究顯示其具有改善心肌缺血、降血糖及抗氧化應(yīng)激等多種功能。本研究分析了紅景天苷對(duì)糖尿病心肌病大鼠的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組處理 選取SD大鼠60只，雄性，體重（250±50）g，購(gòu)自中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，許可證號(hào)：SCXK（軍）2009-003。隨機(jī)選取10只納入對(duì)照組，給予正常飲食。剩余50只制備糖尿病心肌病模型，成功制備43只，選取40只隨機(jī)分為：DCM組、低劑量組（50 mg/kg）、中劑量組（100 mg/kg）及高劑量組（200 mg/kg），每組各10只。每日按規(guī)定劑量給予紅景天苷（華北理工大學(xué)中醫(yī)學(xué)院藥理試驗(yàn)室提供）灌胃，DCM組給予同劑量的水，連續(xù)給藥12周。

1.2 糖尿病心肌病大鼠模型制備 高糖高脂飼料每100 g中含標(biāo)準(zhǔn)粉17.5 g、大豆粉10.0 g、麩皮 7.0 g、玉米粉12.0 g、魚(yú)粉2.5 g、食鹽0.5 g、酵母粉0.5 g、豬油15.0 g、蔗糖10.0 g、奶粉 5.0 g、麻油5.0 g、雞蛋10.0 g、花生5.0 g。將上述配料充分混勻后，攪拌、烘烤，壓制成形后喂養(yǎng)，喂養(yǎng)前1周配制。大鼠高糖高脂飲食4周，然后腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）40 m g/kg，以隨機(jī)血糖≥13.8 m m ol/L為糖尿病模型成功，持續(xù)高糖高脂飼料喂養(yǎng)。第12周末使用Philips 7500數(shù)字化超聲心動(dòng)圖儀測(cè)量心功能，心功能明顯改變認(rèn)為糖尿病心肌病模型成功[1,2]。

1.3 指標(biāo)的測(cè)定 藥物干預(yù)12周后，禁食12 h，抽取頸靜脈竇血1.5～2 ml，分離血清，用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定白細(xì)胞介素-6（IL-6）和血管緊張素-Ⅱ（Ang-Ⅱ），檢測(cè)試劑盒由上海江萊生物科技有限公司提供。動(dòng)物處死后取心肌組織，經(jīng)固定、脫水、包埋后，制成4 μ m切片，行HE染色，光鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間均數(shù)的比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠IL-6、Ang-Ⅱ水平比較 與對(duì)照組相比，DCM組及紅景天苷藥物干預(yù)組大鼠血清IL-6水平均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。隨著紅景天苷劑量增加，IL-6水平逐漸下降，但中劑量組與高劑量組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，DCM組及所有藥物干預(yù)組血清Ang-Ⅱ水平均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。與DCM組比較，隨著藥物劑量增加，Ang-Ⅱ水平明顯下降，除低劑量組外，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），呈劑量依賴性（表1）。

2.2 病理學(xué)染色結(jié)果 病理學(xué)切片觀察顯示：與對(duì)照組相比，DCM組心肌組織結(jié)構(gòu)十分紊亂，可見(jiàn)大量片狀局灶性出血壞死，大量中性粒細(xì)胞聚集；低劑量組心肌組織結(jié)構(gòu)非常紊亂，有片狀局灶性出血壞死，有大量中性粒細(xì)胞聚集；中劑量、高劑量組可見(jiàn)少量點(diǎn)狀出血壞死，少量中性粒細(xì)胞聚集（圖1）。

表1 各組大鼠IL-6、Ang-Ⅱ水平比較

圖1 HE染色結(jié)果 （A：對(duì)照組；B：DMC組；C：低劑量組；D：中劑量組；E：高劑量組；n=10）

3 討論

糖尿病心肌病的發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，包括炎癥反應(yīng)、腎素-血管緊張素系統(tǒng)過(guò)度激活、氧化應(yīng)激等[3]。主要為高糖導(dǎo)致的心肌損傷。紅景天苷為抗氧化藥物越來(lái)越受到人們關(guān)注。譚洪玲等[4]培養(yǎng)原代SD大鼠心肌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)紅景天苷可通過(guò)激活EKR通路保護(hù)缺氧心肌損傷。李停等[5]低氧處理原代大鼠心肌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)紅景天苷可以抑制低氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。龐勇軍等[6]動(dòng)態(tài)觀察不同濃度紅景天苷對(duì)原代大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響，發(fā)現(xiàn)紅景天苷與增強(qiáng)心肌收縮能力有關(guān)。本研究中，大鼠處死后行心肌組織HE染色，DCM組大鼠的心肌組織結(jié)構(gòu)極其紊亂，可見(jiàn)大量片狀局灶性出血壞死，有大量中性粒細(xì)胞聚集，考慮為高糖環(huán)境引起心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)改變。紅景天苷藥物干預(yù)后，大鼠心肌結(jié)構(gòu)紊亂減輕，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)減少，提示紅景天苷有心肌保護(hù)作用。

IL-6可作用于不同細(xì)胞和組織，發(fā)揮刺激造血、防御等生物學(xué)作用[7]。Espesito等[8]研究顯示，IL-6使殺傷性T淋巴細(xì)胞克隆過(guò)度激活，從而產(chǎn)生細(xì)胞毒作用，引起胰島B細(xì)胞大量死亡。邢茂娟等[9]研究認(rèn)為，IL-6可能參與了糖尿病心肌病的發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)，所有模型組的IL-6水平均高于對(duì)照組，即使經(jīng)過(guò)藥物干預(yù)后，IL-6水平也未降至正常水平，提示IL-6與糖尿病大鼠心肌病變相關(guān)。分析不同劑量的紅景天苷對(duì)IL-6的影響，發(fā)現(xiàn)低劑量及中劑量明顯降低IL-6水平。Ang-Ⅱ能夠激活PK信號(hào)通路誘導(dǎo)結(jié)締組織生長(zhǎng)因子表達(dá)，刺激心肌成纖維細(xì)胞的增殖，促進(jìn)膠原合成，導(dǎo)致心肌間質(zhì)的重構(gòu)，促進(jìn)心肌纖維化的發(fā)展，是糖尿病心肌病變的重要影響因子[10]。本研究發(fā)現(xiàn)所有模型組Ang-Ⅱ水平明顯高于對(duì)照組。隨著紅景天苷劑量增加，Ang-Ⅱ水平明顯下降，提示紅景天苷可能抑制了RAS系統(tǒng)。

[1] 劉群. 實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病心肌病大鼠模型建立的方法[J]. 臨床心血管病雜志, 2014,30(3):254-7.

[2] 董世芬,洪纓,孫建寧,等. 實(shí)驗(yàn)性糖尿病心肌病大鼠模型建立及心臟功能和結(jié)構(gòu)相關(guān)性分析[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào),2010,18(16):457-62.

[3] 武琦,徐彤彤,呂祥威,等. 糖尿病性心肌病發(fā)病機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J]. 山東醫(yī)藥,2011,51(43):114-5.

[4] 譚洪玲,馬增春,肖成榮,等. 紅景天苷對(duì)心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧的保護(hù)作用[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2010,26(3):194-7.

[5] 李停,張董,李琳. 紅景天有抑制低氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程,2011,24(1):21-4.

[6] 龐勇軍,孫莉,謝文娟,等. 紅景天苷促進(jìn)培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞肌質(zhì)網(wǎng)鈣離子的釋放[J]. 中國(guó)病理生理雜志,2011,27(10):2021-3,2026.

[7] 鄭娟,毛芝芩. 心力衰竭患者血清BNP、IL-6和IL-8檢測(cè)的臨床意義[J]. 放射免疫學(xué)雜志,2012,25(3):263-4.

[8] Espesito K,NaPPo F,Marfella R,et al. Inflammation cytokine Concentrations are acutely increased by hyperglycemia in human: role of oxidative stress[J]. Circulation, 2002,106(16):2067-72.

[9] 邢茂娟,袁志剛,張海文,等. Visfatin、IL-6、TNF-α與2型糖尿病的相關(guān)研究[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2011,11(24):4908-11.

[10] 謝芳,呂祥威,徐彤彤. 瘦素對(duì)糖尿病心肌病大鼠血清IL-6和Ang-Ⅱ水平的影響[J]. 華夏醫(yī)學(xué),2014,27(3):1-4.

本文編輯：姚雪莉

Influence of salidroside on rats with diabetic cardiomyopathy

GAO Jing-yuan*,YANG Yu-yang,XING Lei, LI Ji-an.*Department of Geriatrics, Affiliated Hospital of North China University of Science and Technology, Tangshan 063000, China.

YANG Yu-yang, E-mail: yang311605@126.com

Objective To analyze the influence of salidroside on rats with diabetic cardiomyopathy (DCM). Methods Male SD rats (n=60) were chosen, and 10 were included into control group. After DCM model was successfully established in 40 rats, they were randomly divided into DCM group, low-dose salidroside group (50 mg/kg), mid-dose salidroside group (100 mg/kg) and high-dose salidroside group (200 mg/kg, each n=10). All salidroside groups were given orally salidroside in corresponding dose and DCM group was given water in the same dose for 12 wk continuously. The levels of interleukin-6 (IL-6) and angiotensin Ⅱ (Ang Ⅱ) were detected after 12 wk. The samples of myocardial tissue were collected for making sections (4 μ m), and then the morphological changes of myocardial cells were observed by using light microscope after HE staining. Results The level of serum IL-6 increased significantly in DCM group and all salidroside groups compared with control group (all P<0.05). As the dose of salidroside increased, level of IL-6 decreased gradually, while the difference between mid-dose salidroside group and high-dose salidroside group had no statistical significance (P>0.05). The level of serum Ang-Ⅱ increased significantly in DCM group and all salidroside groups compared with control group (all P<0.05). As the dose of salidroside increased, level of Ang-Ⅱ decreased significantly in all salidroside groups compared with DCM group, showed a dose dependency, and the difference had statistical significance among all groups except of low-dose salidroside group (all P<0.05). The results of HE staining showed that structure of myocardial tissue was disorder, and serious splinter and focal hemorrhage and necrosis and neutrophil aggregation were observed in DCM group. The structure of myocardial tissue was disorder, and splinter and focal hemorrhage and necrosis and serious neutrophil aggregation were observed in low-dose salidroside group. Only mild punctuate hemorrhage and necrosis and neutrophil aggregation were observed in mid-dose and high-dose salidroside groups. Conclusion Salidroside can reduce significantly the levels of serum IL-6 and Ang II, relieve myocardial damage and has myocardial protective effect in rats with DCM.

Salidroside; Diabetic cardiomyopathy; Interleukin-6; Angiotensin Ⅱ

R587.1

A

1674-4055(2017)07-0810-03

河北省衛(wèi)生廳項(xiàng)目(2013062)

1063000 唐山,華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院老年病科;2063000 唐山,華北理工大學(xué)中醫(yī)學(xué)院

楊雨旸,E-mail:yang311605@126.com doi：10.3969/j.issn.1674-4055.2017.07.11