亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        從馬肝臟提取純化RNA方法的探索

        2017-08-20 23:47:19沙仁高娃
        農(nóng)民致富之友 2017年15期
        關(guān)鍵詞:大分子異丙醇瓊脂糖

        沙仁高娃

        核酸是生物體的基本組成物質(zhì),是重要的生物大分子,從高等動物,植物到簡單的病毒都含有核酸。核酸分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)兩大類。RNA是基因表達(dá)中間產(chǎn)物,同時也是RNA病毒的遺傳物質(zhì),對RNA進(jìn)行操作在分子生物學(xué)中占有重要地位。RNA分離純化技術(shù)是分子生物學(xué)研究中的基本技術(shù),TRIZOL試劑法提取RNA既快速有高效,TRIZOL法適用于人類、動物、植物、微生物的組織或培養(yǎng)細(xì)菌從幾十毫克至幾克樣品中提取RNA。用TRIZOL法提取的總RNA無蛋白和DNA污染。本實驗對TRIZOL試劑法進(jìn)行改進(jìn),目的在于獲得快速高效提取馬肝臟總RNA的方法,為有關(guān)馬肝臟RNA分子生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。

        1.材料與試劑

        1.1材料

        馬肝臟

        1.2主要試劑

        無RNA酶滅菌水,氯仿,乙醇,TRIZOL試劑,液氮,DEPC水。

        1.3主要儀器

        冷凍臺式高速離心機,研缽,低溫冰箱,冷凍真空干燥器,電泳儀,紫外光檢測儀,電泳槽。

        1.4注意事項

        1.4.1全程必須戴一次性手套。皮膚經(jīng)常帶有細(xì)菌和霉菌,可能污染RNA的提取并成為RNA酶的來源。

        1.4.2使用滅菌的一次性塑料器皿避免使用公共儀器所導(dǎo)致RNA酶交叉污染。

        1.4.3在TRZOL中RNA是隔離在RNA酶污染之外而對樣品的后續(xù)操作要求用無RNA酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在150度的轟響中烘烤4小時。

        2.提取RNA

        1.把0.1g肝臟剪碎放入研缽中加入少量液氮.迅速研磨,待組織變軟再加液氮,再研磨,這樣三次后室溫放置5分鐘將樣品轉(zhuǎn)到2.0ml的離心管中。

        2.粉末溶化前加入1mlTRIZOL試劑.混勻。用力振蕩15/30s,平放離心管在冰板上5min。在4℃,12000g下離心10min。

        3.取上清2ml離心管中,加入與上清等體積的氯仿,上下顛倒混勻。在4℃,12000g下離心10min。

        4.取上清1.5ml離心管中,加入與上清等體積的異丙醇,混勻,室溫靜置10min。在4℃,12000g下離心10min。

        5.棄上清,加入1ml預(yù)冷的75%乙醇輕輕洗滌RNA沉淀。在4℃,12000g下離心1min。

        6.棄上清,用槍頭吸去剩余液體,室溫干燥10-15min。加入適量的DEPCH2O溶解RNA。

        7.在-70℃保存待用。

        8.與TRIZOL試劑說明書相比,改進(jìn)部分為;第2步的離心為增加的一步;第3步抽提蛋白時氯仿使用量0.2ml增加到1ml;第4步異丙醇沉淀RNA及75%乙醇洗滌RNA沉淀時,試劑經(jīng)預(yù)熱。

        3.RNA的完整性及質(zhì)量檢測

        3.1RNA的電泳分析

        RNA的非變性瓊脂糖凝膠電泳在1×TAE中進(jìn)行,瓊脂糖濃度為1%,上樣前凝膠須預(yù)電泳5min,隨后將樣品加入上樣孔,以5v/cm的電壓電泳1.5/2.0h,然后在紫外凝膠成像系統(tǒng)中觀察所提取RNA的完整性。

        3.2RNA純度鑒定

        開啟紫外分光光度計預(yù)熱穩(wěn)定30min再用DEPC處理水校正零點。取0.5ulRNA樣品用DEPC水稀釋100倍。將稀釋液轉(zhuǎn)到比色杯中讀取260nm。280nm處的紫外光吸收值。計算OD260/OD280用于純度分析。

        4.結(jié)果

        4.1RNA的純度檢測

        用紫外光光分度計測的RNAA260。A280值(表1);其A260/A280值1。7/2。0間,說明RNA純度較高。

        4.2RNA的質(zhì)量檢測

        取0.5ulRNA樣品進(jìn)行非變性瓊脂糖凝膠電泳分析,結(jié)果表明28S。18S和5SrRNA帶型清晰,從圖1中清晰的看到28S。18SrRNA兩條主帶,跑在最前面的5SrRNA也隱約可見。以上結(jié)果說明提取的總RNA純度較高,無明顯降解,符合實驗要求(圖1)。

        5.討論

        本方法從提高RNA產(chǎn)率及減少TRIZOL降解入手。針對TRIZOL操作方法進(jìn)行優(yōu)化改良。與說明書提供的操作方法相比不同之處在于。

        5.1 加入TRIZOL試劑用力振蕩后平放試管。使得RNA更易被抽提;異丙醇。無水乙醇沉淀RNA及75%乙醇洗RNA沉淀都經(jīng)預(yù)冷。增加RNA沉淀從而提高RNA產(chǎn)率;

        5.2 增加了1次高速離心,能更為有效地除去不溶性的蛋白質(zhì)。多糖。多酚等大分子物質(zhì);但減少了分離相離心時間(由15min減至10min)??偺崛r間僅延長約5min。在提取RNA的過程中用有機溶劑沉淀RNA沉淀很多。復(fù)溶時大量沉淀不溶。本方法所提RNA溶解迅速,說明增加高速離心是一種簡單有效除去蛋白質(zhì)。多糖。多酚等大分子物質(zhì)的方法。此外。為了更徹底地去除多糖。多酚。也可在TRIZOL抽提后。離心前加入無水乙醇0.1/0.3ml(達(dá)到總體積的10%/30%),可增加多糖。多酚及DNA等大分子沉淀。而RNA仍溶解,從而提高RNA的純度。

        5.3 在抽提蛋白質(zhì)時增加了氯仿使用量。由0.2ml增加到1ml能夠更為有效地去除蛋白質(zhì)。

        (作者單位:011800內(nèi)蒙古烏蘭察布四子王旗草原工作站)

        猜你喜歡
        大分子異丙醇瓊脂糖
        異丙醇生產(chǎn)工藝研究進(jìn)展
        云南化工(2021年7期)2021-12-21 07:27:24
        基于膠原-瓊脂糖的組織工程表皮替代物構(gòu)建研究
        六氟異丙醇-水溶液中紅外光譜研究
        水乳化法制備羅丹明B接枝瓊脂糖熒光微球?
        水乳化法制備羅丹明B接枝瓊脂糖熒光微球?
        半柔性大分子鏈穿越微孔行為的研究
        瓊脂糖以及高分辨率瓊脂糖制備方法研究進(jìn)展*
        廣州化工(2016年11期)2016-09-02 00:42:59
        β分子篩的改性及其在甲苯與異丙醇烷基化反應(yīng)中的應(yīng)用
        微流控超快混合器及生物大分子折疊動力學(xué)應(yīng)用研究進(jìn)展
        如何用好異丙醇潤版液
        中文字幕乱码在线婷婷| 无码视频一区二区三区在线观看| 国产白丝网站精品污在线入口| 亚洲av无码成人精品区天堂| 日韩欧美精品有码在线观看 | 97se亚洲国产综合自在线观看| 99蜜桃在线观看免费视频网站| 国产91对白在线观看| 国产美女冒白浆视频免费 | а√天堂资源官网在线资源| 久久久久久久无码高潮| 国产 在线播放无码不卡| 亚洲中文字幕乱码一二三| 婷婷射精av这里只有精品| 乌克兰少妇xxxx做受6| 亚洲日韩精品A∨片无码加勒比| 亚洲区一区二区三区四| 色吧噜噜一区二区三区| 日日碰狠狠添天天爽无码 | 日本一区二区在线免费看| 日日碰狠狠添天天爽五月婷| 国产精成人品| 成年奭片免费观看视频天天看| 老熟妇嗷嗷叫91九色| 高潮内射主播自拍一区| 麻豆一区二区三区蜜桃免费| 精品国产一区二区三区19| 2020久久精品亚洲热综合一本| 国产精品一区二区三区蜜臀 | 亚洲av无码一区二区一二区| av无码人妻中文字幕| 2021国产精品视频| 日韩精品一区二区三区中文9| 极品少妇一区二区三区四区视频| 久久人人爽av亚洲精品| 久久精品亚洲乱码伦伦中文| 大白屁股流白浆一区二区三区| 青青草手机在线免费视频| 夹得好湿真拔不出来了动态图| 无码av免费精品一区二区三区 | 久久精品亚洲成在人线av|