牛淑亮，楊 濤，王水泉，陳勝國△

1.新疆醫(yī)科大學(xué)(烏魯木齊830011)，2.新疆醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院(烏魯木齊830011)

消腫噴劑對(duì)急性骨骼肌損傷小鼠肌組織NO 、MDA、SOD表達(dá)的影響*

牛淑亮1，楊 濤2，王水泉1，陳勝國1△

1.新疆醫(yī)科大學(xué)(烏魯木齊830011)，2.新疆醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院(烏魯木齊830011)

目的：探討急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)小鼠肌組織NO 、MDA、SOD表達(dá)及消腫噴劑的干預(yù)作用。方法：打擊建立急性軟組織損傷(氣滯血瘀證)小鼠模型，分為空白組、模型組、正紅花油組和消腫噴劑組，觀察各組肌組織NO、MDA、SOD表達(dá)情況。結(jié)果：NO與MDA在急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)小鼠損傷肌組織中均有較高水平表達(dá)，消腫噴劑和正紅花油能降低其在損傷肌組織中的表達(dá)；SOD在急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)小鼠損傷肌組織中表達(dá)水平低，消腫噴劑能夠影響其在傷肌組織中的表達(dá)。結(jié)論：NO、MDA、SOD在急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)小鼠肌組織中表達(dá)具有較強(qiáng)敏感性，消腫噴劑可能通過干預(yù)其表達(dá)，促進(jìn)骨骼肌損傷修復(fù)。

急性骨骼肌損傷是日常生活中常見、多發(fā)損傷，主要原因包括機(jī)械性損傷、擠壓傷、拉挫傷等。外力損傷，致經(jīng)脈受損，氣血榮衛(wèi)不行，筋肉失于濡養(yǎng)，發(fā)為紅腫熱痛，活動(dòng)失利，辨證當(dāng)屬“氣滯血瘀證”。氣屬陽、血為陰，氣滯血瘀，陰陽失根，是本病的根本所在，故在治療根本上應(yīng)為調(diào)陰陽、和榮衛(wèi)，具體方法宜為涼血活血、化瘀行氣，以通經(jīng)和絡(luò)，濡養(yǎng)筋骨。本實(shí)驗(yàn)研究了氧化/抗氧化平衡相關(guān)指標(biāo)NO 、MDA、SOD在急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)小鼠肌組織中表達(dá)情況，報(bào)告如下。

材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠120只，雄性，體重20±2g(新疆醫(yī)科大學(xué)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。

2 實(shí)驗(yàn)儀器 采用自制骨骼肌損傷打擊器，Thermo生產(chǎn)MULTISKAN MK3酶標(biāo)儀，美國PRO* Multi-Prep多樣品均質(zhì)器，ESJ182-4電子天平，Hettich生產(chǎn)MIKRO 22R低溫離心機(jī)。

3 實(shí)驗(yàn)用藥 蘇木、桅子各30 g，生川烏24 g，姜黃、延胡索、生半夏、膽南星、三七各18 g，乳香、沒藥、血竭各12 g，冰片6 g，滌凈風(fēng)干后粉碎(血竭、冰片除外)，過20目篩，將藥粉以10倍75%酒精浸泡7×24 h，成棕紅色液體，過濾，取溶液即得消腫噴劑原液[1]，裝瓶備用。正紅花油為成都東洋百信制藥有限公司生產(chǎn)。

4 耗材與試劑 AR110096孔單條可拆式酶標(biāo)板，AR1103ELISA用ABC，AR1104TMB顯色劑，AR1105終止液，AR1107生物標(biāo)記素抗體，NO試劑盒、MDA試劑盒、SOD試劑盒等均購自武漢博士德生物工程有限公司。

5 實(shí)驗(yàn)造模 急性骨骼肌損傷模型參考文獻(xiàn)[2-3]方法，利用重力勢(shì)能E=mgh，以約0.2焦耳勢(shì)能自由落體沖擊小鼠右后肢股部肌肉(m=50 g，h=40 cm)，皮膚破損或骨折予以排除，造成小鼠急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)。

6 分組與給藥 昆明種小鼠120只，分為空白組，模型組，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組?？瞻捉M，正常飼養(yǎng)，不予造模和給藥。其余各自均已前述造模方法予以打擊造模，造模后，模型組自我康復(fù)，不予給藥。對(duì)照組于造模后24 h給予正紅花油外用，6 h/次，4次/d，連續(xù)給藥 5 d。實(shí)驗(yàn)組于造模后24 h給予消腫噴劑外用，6 h/次，4次/d，連續(xù)給藥5 d。各組于給藥后第1 d、第 3 d、第5 d(末次給藥后4 h)，分別取小鼠10 只脫頸處死，取股部傷處肌肉，置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

7 指標(biāo)測(cè)定 NO、MDA表達(dá)水平和SOD活性嚴(yán)格按照NO試劑盒、MDA試劑盒、SOD試劑盒說明書步驟方法，進(jìn)行測(cè)定。

8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異性通過兩樣本t檢驗(yàn)比較，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 兩組NO與MDA指標(biāo)變化比較 NO與MDA在急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)小鼠損傷肌組織中均有較高水平表達(dá)，實(shí)驗(yàn)藥物消腫噴劑和對(duì)照藥物正紅花油均能降低其在損傷肌組織中的表達(dá)，且兩種藥物具有相似作用，見表1，表2。

2 兩組SOD指標(biāo)變化比較 SOD在急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)小鼠損傷肌組織中表達(dá)水平低，消腫噴劑能夠較早的影響其在傷肌組織中的表達(dá)，而促進(jìn)創(chuàng)傷恢復(fù)，見表3。

表1 損傷局部骨骼肌NO表達(dá)情況(nmol/g)

注：與模型組比較，#P<0.05，*P<0.01

表2 損傷局部骨骼肌MDA表達(dá)情況(nmol/g)

注：與模型組比較，#P<0.05，*P<0.01

表3 損傷局部骨骼肌SOD活性表達(dá)情況(U/L)

注：與模型組比較，#P<0.05，*P<0.01

討 論

急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)屬于中醫(yī)“筋傷”范疇，“損傷之癥，腫痛者，乃瘀血凝結(jié)作痛也”，“忽然閃挫，必氣為之震，震則激，激則雍”。跌撲閃挫，致經(jīng)脈受損，氣機(jī)失利。氣機(jī)失利，陰陽失和，人體正常的氧化還原狀態(tài)遭到破壞，是急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)重要病理因素。消腫噴劑君藥蘇木“主破血”，具有活血療傷、驅(qū)瘀通經(jīng)之功；桅子“解熱瘀，行結(jié)氣”，可涼血解瘀，消腫止痛。臣藥姜黃辛散溫通，活血力強(qiáng)；延胡索“能行血中氣滯，氣中血滯”，專治一身上下諸痛；乳香、沒藥“散血消腫、定痛生肌”，共助行氣血、祛瘀腫之功。佐以生川烏、生半夏、膽南星，散結(jié)通絡(luò)止痛；三七“止血、散血、定痛”；血竭“散滯血諸痛”。 使以冰片，“透骨熱”、“性走而不守”，引諸藥歸病所。諸藥合奏，可使氣血調(diào)暢，陰陽平和，恢復(fù)傷肢正常功能?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究也證明，蘇木提取物能夠降低血清MIP-1β 水平，而MIP-1β不僅能夠促進(jìn)炎性反應(yīng)，而且還能促進(jìn)活性氧簇ROS可誘導(dǎo)細(xì)胞粘附分子的表達(dá)[4]；梔子苷發(fā)酵物梔子藍(lán)色素有較好的自由基清除能力[5]。所含姜黃等也具有清除氧自由基作用[6]。

實(shí)驗(yàn)中，模型組損傷肌組織第1 d，第3 d，第5 d，NO 表達(dá)水平較空白組均具有顯著差異性，說明NO在急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)骨骼肌具有很強(qiáng)的敏感性，并能反映急性骨骼肌損傷的炎癥水平。內(nèi)源性NO是左旋精氨酸(L-Arg) 的信號(hào)分子，在還原性輔酶Ⅱ(NADPH )等因子輔助下，由一氧化氮合酶(NOS) 催化合成，生成的NO具有細(xì)胞毒作用[7]，參與介導(dǎo)免疫反應(yīng)，可引起細(xì)胞和組織的損傷。實(shí)驗(yàn)藥物消腫噴劑與對(duì)照藥物正紅花油在均能通過降低急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)小鼠肌組織NO表達(dá)，以促進(jìn)損傷愈合。

MDA是LPO的主要產(chǎn)物，MDA在骨骼肌量能夠反映局部細(xì)胞受到自由基攻擊的嚴(yán)重程度[8]。SOD為機(jī)體專一清除氧自由基的特異性抗氧化酶，可反映機(jī)體清除自由基能力[9]，通過有效清除體內(nèi)過多的氧自由基，保持氧化狀態(tài)的動(dòng)態(tài)平衡，避免因自由基的產(chǎn)生與清除脫節(jié)，導(dǎo)致的一系列病理反應(yīng)。急性骨骼肌損傷后損傷局部肌組織發(fā)生充血和缺氧，使得細(xì)胞線粒體傳遞鏈發(fā)生脫偶聯(lián)，損傷局部氧化/抗氧化平衡失衡，自由基的產(chǎn)生與清除脫節(jié)，大量氧自由基堆積于損傷局部，低濃度氧自由基為機(jī)體維持生命活動(dòng)所必需，但當(dāng)濃度過高時(shí)，自由基能攻擊生物膜磷脂中的不飽和脂肪酸，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化，并形成大量過氧化產(chǎn)物L(fēng)PO。實(shí)驗(yàn)中，與模型組對(duì)照，實(shí)驗(yàn)藥物消腫噴劑第1天，第3天和第5天，均能顯著降低急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)小鼠肌組織MDA表達(dá)，以減輕自由基對(duì)局部細(xì)胞的攻擊程度實(shí)驗(yàn)藥物消腫噴劑第1天，第3天，顯著提高了急性骨骼肌損傷(氣滯血瘀證)小鼠肌組織SOD活性，保護(hù)細(xì)胞免受氧自由基損傷。

[1] 牛淑亮,王水泉,伊斯拉伊力.消腫噴劑化瘀作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].陜西中醫(yī),2015,36(8):1088-1090.

[2] McBrier N M,LeKan J M,Druhan L J,etal. Therapeutic ultrasound decreases mechano-growth factor messenger ribonucleic acid expression after muscle contusion injury[J].Arch Phys Med Rehabil，2007,88(7):936-940.

[3] 劉 勇,柏 合,徐世文.復(fù)方中藥軟膏對(duì)小鼠急性軟組織損傷中炎性因子的影響[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志,2015,10(3):10-11.

[4] 張 芯,楊建飛.蘇木乙酸乙酯提取物對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠血清MIP-1β的影響[J].中醫(yī)藥信息,2013,(4):22-24.

[5] 尹 燕,黃相中,關(guān)小麗.梔子藍(lán)色素的制備及其抗氧化活性研究[J].云南民族大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2014,23(4):243-247.

[6] 王中曉.姜黃提取物對(duì)腦缺血-再灌注大鼠一氧化氮及氧自由基的影響[J].臨床合理用藥雜志,2012,5(30):21-21.

[7] 封 敏,師曉莉,苗 娜,等.乙醇誘導(dǎo)急性胃炎大鼠NOS的表達(dá)研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,36(7):927-929.

[8] 周晶晶,黃小民.脫氫紫堇堿對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠心肌NF-κB和SOD、MDA的影響[J].中國中醫(yī)急癥,2014,23(7)，1231-1232.

[9] 米志寬,韓繼明,阮彩蓮.有氧運(yùn)動(dòng)延緩大鼠腦組織衰老的實(shí)驗(yàn)研究[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2016,47(4):389-390.

(收稿：2017-03-29)

*新疆維吾爾自治區(qū)十二五教育規(guī)劃課題項(xiàng)目(142061)新疆醫(yī)科大學(xué)創(chuàng)新基金項(xiàng)目(XJC201333)

△通訊作者

創(chuàng)傷和損傷/中醫(yī)藥療法 肌肉 血瘀氣滯 @消腫噴劑

R685

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.08.076