李子璇,李 勇,羅 超,白彩娟,扎 桑,聶麗娟△

(西藏大學(xué):1.醫(yī)學(xué)院;2.理學(xué)院,拉薩 850000)

高效液相法對不同廠家十八味黨參丸中黨參炔苷及沒食子酸水平的檢測研究*

李子璇1,李 勇2,羅 超1,白彩娟1,扎 桑1,聶麗娟1△

(西藏大學(xué):1.醫(yī)學(xué)院;2.理學(xué)院,拉薩 850000)

目的 探討高效液相法檢測不同廠家產(chǎn)十八味黨參丸中黨參炔苷和沒食子酸的水平。方法 色譜柱均為VP-DOS C18柱(4.6 mm×150.0 mm，5 μm)。黨參炔苷水平測定：流動相乙腈∶0.4%冰醋酸洗脫(21∶79)，流速1 mL/min,檢測波長267 nm,柱溫25 ℃，試樣進(jìn)樣量10 μL；沒食子酸水平測定：流動相甲醇∶0.4%冰醋酸洗脫(1∶99)，流速1 mL/min,檢測波長280 nm,柱溫25 ℃，試樣進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果 青海格拉丹東藏藥廠十八味黨參丸中黨參炔苷和沒食子酸水平分別是1.083 5、15.334 0 mg/g，西藏昌都藏藥廠為0.628 9、15.159 5 mg/g，西藏藏醫(yī)院為0.306 5、8.762 7 mg/g。結(jié)論 該方法重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確性好、操作簡單快速；不同生產(chǎn)廠家產(chǎn)的十八味黨參丸中黨參炔苷水平差異顯著，沒食子酸水平差別較大，可為十八味黨參丸質(zhì)量控制提供參考。

十八味黨參丸；黨參炔苷；沒食子酸

藏藥是中國民族醫(yī)藥中重要的組成部分,許多具有非常顯著的療效,尤其對于疑難雜癥更有一些其他藥物所無法比擬的治療效果[1]。藏藥與西藥不同，成分復(fù)雜且不清晰，其療效也不是眾多成分作用簡單的加合，由于現(xiàn)在對藏藥基礎(chǔ)研究較為薄弱,缺乏現(xiàn)代質(zhì)量控制方法,極大地制約了藏醫(yī)藥的發(fā)展[1]。十八味黨參丸是經(jīng)典的藏藥品種,由藏黨參、決明子、川貝、渣馴膏、高山紫堇、藏菖蒲、寬筋藤、手參、訶子、人工麝香、毛訶子、乳香、黃葵子、安息香、兒茶、巴夏嗄、木香、余甘子十八味藥組成。具有消炎止痛，愈瘡瘍、除黃水,用于痹病，“岡巴”病，四肢關(guān)節(jié)紅腫疼痛，伸屈不利，濕疹，牛皮癬，陷蝕癬，癘痛，亞瑪蟲病及麻風(fēng)病。目前國內(nèi)外對十八味黨參丸的研究甚少，僅限于對過敏性紫癜、風(fēng)濕病、關(guān)節(jié)炎、銀屑病、牛皮癬等疾病的影響[2-8]。藏黨參中的黨參炔苷對乙醇造成的胃黏膜損傷有較好的保護(hù)作用，為黨參胃黏膜保護(hù)作用的主要活性成分；余甘子的活性成分沒食子酸具有抑制并殺死腫瘤、抗菌抑菌、抗氧化性等作用。本文選取十八味黨參丸中專屬性成分黨參炔苷及主要藥效成分沒食子酸兩個指標(biāo)作為研究對象，對其水平進(jìn)行測定，為十八味黨參丸質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 HT2010A液相色譜(日本島津公司)；KT-250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；FA2004B萬分之一電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；XP6百萬分之一電子天平(瑞士MET-TLER TOLEDO 公司)；小型高速粉碎機(YS-08)；液相用容積過濾器(DL-01)。

1.1.2 藥品與試劑 甲醇(色譜純，韓國德山藥品工業(yè))；乙腈(色譜純，賽默飛世爾科技有限公司)；甲醇(分析純，成都金山化學(xué)試劑有限公司)；冰醋酸(成都金山化學(xué)試劑有限公司)；液相用水為娃哈哈瓶裝純凈水。黨參炔苷對照品(批號：20151028，北京生物科學(xué)與技術(shù)有限公司)，沒食子酸對照品(批號：20142019，中國藥品生物制品檢定所)。

A:黨參炔苷對照品；B:黨參炔苷樣品；C:黨參炔苷陰性對照；D:黨參炔苷空白對照；E:沒食子酸對照品；F:沒食子酸樣品；G:沒食子酸陰性對照；H:沒食子酸空白對照

圖1 十八味黨參丸中黨參炔苷和沒食子酸樣品、對照品及陰性對照的HPLC色譜圖

1.1.3 實驗材料 實驗用十八味黨參丸分別來自：西藏藏醫(yī)學(xué)院(生產(chǎn)批號：150405)、青海格拉丹東藏藥廠(生產(chǎn)批號：1507101)、西藏昌都藏藥廠(生產(chǎn)批號：150601)。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱均為VP-DOS C18柱(4.6 mm×150.0 mm，5 μm)。黨參炔苷水平測定：流動相乙腈∶0.4%冰醋酸洗脫(21∶79)，流速1 mL/min,檢測波長267 nm,柱溫25 ℃，試樣進(jìn)樣量10 μL；沒食子酸水平測定：流動相甲醇∶0.4%冰醋酸洗脫(1∶99)，流速1 mL/min,檢測波長280 nm,柱溫25 ℃，試樣進(jìn)樣量10 μL。

1.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黨參炔苷對照品3.680 mg置25 mL量瓶，加甲醇溶解并定容，得147.2 μg/mL的黨參炔苷儲備溶液。將該儲備溶液分別稀釋至58.88、29.44、14.72、11.78 μg/mL作為對照品溶液，低溫保存?zhèn)溆谩＞芊Q取沒食子酸對照品16.090 mg置于25 mL量瓶中，加入30%甲醇溶解并定容，得643.6 μg/mL的沒食子酸儲備溶液。將該儲備溶液分別稀釋至275.440 0、128.720 0、51.488 0、25.744 0、5.148 8 μg/mL作為對照品溶液，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 供試品溶液的制備 將十八味黨參丸樣品粉碎、過篩，作為供試樣品備用。精密稱取供試品2 g，加入甲醇20 mL，密封，稱定其質(zhì)量；超聲提取60 min(250 W，40 kHz)，放至室溫后再次稱定，加甲醇補足損失的質(zhì)量；提取液經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜過濾，即為黨參炔苷供試品溶液。精密稱取供試樣品0.25 g，加入30%甲醇20 mL，密封，稱定其質(zhì)量；浸泡提取24 h，再次稱定，加30%甲醇補足損失的質(zhì)量；提取液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即為沒食子酸供試品溶液。

2 結(jié) 果

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性實驗 按色譜條件進(jìn)行操作，分別取對照品和供試品進(jìn)行測定，并記錄色譜圖。

2.2 線性 黨參炔苷的回歸方程為:Y=5 043.8X-1 059.6，r2=0.999 93;表明黨參炔苷進(jìn)樣量在0.117～1.472 μg，線性范圍良好；沒食子酸的回歸方程為：Y=24 374X+32 571，r2=0.999 95；表明沒食子酸進(jìn)樣量在5.148 8～643.6 μg，線性范圍良好。

2.3 重復(fù)性試驗 取同一批樣品(西藏昌都藏藥廠，生產(chǎn)批號：150601)，制備6份樣品液，按色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果黨參炔苷及沒食子酸面積RSD分別為1.0%、0.5%，遠(yuǎn)小于中國藥典關(guān)于重復(fù)性的要求，表明重復(fù)性良好。

2.4 精密度實驗 取黨參炔苷和沒食子酸的對照品，按色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果黨參炔苷及沒食子酸面積RSD分別為0.6%、0.4%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取黨參炔苷樣品(西藏昌都藏藥廠，生產(chǎn)批號：150601)進(jìn)行提取，分別于0、1、2、3、4、5 d按色譜條件測定，測得黨參炔苷及沒食子酸面積RSD分別為：1.2%、1.8%，均小于中國藥典關(guān)于重現(xiàn)性的要求，結(jié)果表明待測成分5 d內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 陰性對照及空白對照實驗 按樣品處方比例分別制備不含藏黨參、余甘子的陰性樣品溶液，及純甲醇作為空白，色譜圖在對照品色譜峰停留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對照品及空白對照無干擾。見圖1。

2.7 加樣回收率實驗 取已知含量的十八味黨參丸成藥樣品6份(西藏昌都藏藥廠，生產(chǎn)批號：150601)，分別加入適量對照品儲備液，計算加樣回收率。黨參炔苷和沒食子酸RSD分別為3.1%、1.1%。表明檢測方法準(zhǔn)確度良好。見表1、2。

表1 黨參炔苷加樣回收實驗結(jié)果

2.8 樣品測定 黨參炔苷和沒食子酸的水平見表3。

表2 沒食子酸加樣回收實驗結(jié)果

表3 不同生產(chǎn)廠家樣品中黨參炔苷和沒食子酸的水平比較

3 討 論

本實驗就十八味黨參丸中黨參炔苷和沒食子酸的提取方法和色譜條件中流動相系統(tǒng)進(jìn)行了考察。由于傳統(tǒng)醇類回流提取耗時較長、操作相對繁雜，本實驗采取了超聲方法和浸泡的方法提取黨參炔苷和沒食子酸。在考察黨參炔苷的提取方法時，結(jié)合查閱的文獻(xiàn)[9-11]，采用是否浸泡再超聲、不同量的甲醇及不同的提取時間進(jìn)行提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)提取效率較高，針對所選用的色譜柱,流動相選用乙腈∶0.4%冰醋酸水溶液(21∶79)，分離度最好，能用于十八味黨參丸中黨參炔苷水平檢測。在考察沒食子酸的提取方法時，用30%、50%、75%甲醇進(jìn)行提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用30%甲醇提取效果最好，結(jié)合所查文獻(xiàn)[12-14]，針對所選用的色譜柱，選用甲醇∶0.4%冰醋酸水溶液(1∶99)分離度最好，可用于沒食子酸的水平測定。

本實驗的結(jié)果表明不同廠家的十八味黨參丸中這兩種有效成水平差別較大，說明不同廠家可能在源頭上選用的中藥材質(zhì)量存在著差異，或是生產(chǎn)設(shè)備及工藝參數(shù)等的不同導(dǎo)致有效成分提取不完全，從而造成這樣的差異。這些差異很可能不同程度影響著藥品的療效。提示必須進(jìn)一步加強對民族藥品質(zhì)量控制研究，增加有針對性的檢驗項目，尤其對配方中的名貴藥味。本實驗由于實驗材料購買不便，所用不同藥廠的藥品均只有一批，按照本文的檢測方法，是否同一藥廠藥品原本就存在較大的批間差異尚需進(jìn)一步驗證。

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Study on content determination of lobetyolin and gallic acid in Eighteen Flavors Dangshen Pill from different factories*

LiZixuan1,LiYong2,LuoChao1,BaiCaijuan1,ZhaSang1,NieLijuan1△

(1.MedicalCollege;2.SchoolofScience,TibetUniversity,Lasha,Tibet850000,China)

Objective To develop a HPLC method for determining the contents of lobetyolin and gallic acid in Eighteen Flavors Dangshen Pill( EFDSP) produced by different factories.Methods The HPLC analysis was performed on a VP-DOS C18 column (4.6 mm×150 mm，5 μm).The mobile phase was acetonitrile and 0.4% glacial acetic acid(21∶79) in the determination of lobetyolin content.The detection wavelength was 267 nm and the flow velocity was 1 mL/min.the column temperature was25 ℃ and the sample size was10 μL.The mobile phase was methanol and 0.4% glacial acetic acid(1∶99) in the determination of gallic acid content.The detection wavelength was 280 nm.The column temperature was 25 ℃ and the sample size was 10μL.Results The contents of lobetyolin and gallic acid in EFDSP were 1.0835mg·g-1and 15.334 0 mg/g for Qinghai Gela Dandong Tibetan Pharmaceutical Factory;0.628 9 mg/g and 15.159 5 mg/g for Changdu Tibet Medicine Factory;0.306 5 mg/g and 8.762 7 mg/g for Tibetan Hospital of Tibet.Conclusion This method has the advantages of good reproducibility,good accuracy,simple and fast operation.The contents of lobetyolin and gallic acid in EFDSP produced by different manufacturers are significantly different.The gallic acid content has greater difference.It provides the reference for quality control of EFDSP

eighteen flavors dangshen pill;obetyolin;gallic acid

西藏大學(xué)青年培育基金(ZDPJZK1511)；西藏自治區(qū)自然科學(xué)基金資助項目(2016ZR-15-10)。 作者簡介：李子璇(1979-)，講師，碩士，主要從事藥用植物方面的研究。△

，E-mail:771310824@qq.com。

?術(shù)與方法·

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.20.024

R286

A

1671-8348(2017)20-2809-03

2017-02-13

2017-04-25)