耿 乾

（海南醫(yī)學(xué)院，海南 ?？?570102）

丹參藥材水溶性成分的高效液相色譜指紋圖譜研究

耿 乾

（海南醫(yī)學(xué)院，海南 ?？?570102）

目的 利用高效液相色譜建立5個(gè)地區(qū)的丹參樣品的指紋圖譜。方法 儀器為HP1100高效液相色譜儀和C18色譜柱，進(jìn)樣量為20 uL，利用甲醇和7%磷酸水溶液進(jìn)行梯度洗脫，色譜柱溫度為30攝氏度，流速設(shè)置為1.0 ml/min，檢驗(yàn)波長(zhǎng)設(shè)置為280 mm。結(jié)果 通過(guò)中藥色譜圖相似系統(tǒng)評(píng)價(jià)軟件，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入和修剪建立對(duì)照指紋圖譜。5種來(lái)源的丹參指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行相似度比較，結(jié)果顯示相似度均大于0.997；5種來(lái)源的丹參指紋圖譜在保留時(shí)間上標(biāo)準(zhǔn)偏差最大為0.415%，而相對(duì)峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差最大為9.477%。結(jié)論 本研究建立5個(gè)地區(qū)的丹參樣品水溶性成分的指紋圖譜，峰分離度好，操作簡(jiǎn)單，大大減少檢驗(yàn)時(shí)間。具備良好的靈敏度和穩(wěn)定性，可用于丹參質(zhì)量控制。

丹參，高效液相色譜，指紋圖譜

隨著中藥學(xué)發(fā)展中藥質(zhì)量控制一直都是研究的熱點(diǎn)，中藥指紋圖譜是目前用于鑒定中藥質(zhì)量的方法之一[1]。指紋圖譜具備兩個(gè)特點(diǎn)第一為根據(jù)藥物的特征吸收峰來(lái)辨別藥物的真?zhèn)?，第二通過(guò)吸收峰面積來(lái)辨別藥物的質(zhì)量[2]。而丹參屬于唇形科植物，在臨床上常見(jiàn)于活血化瘀方和安神醒腦方中，按照其成分進(jìn)行分化可為脂溶性成分和水溶性成分[3]。水溶性成分在心臟方面具有增加冠脈灌注，保護(hù)心肌的作用，對(duì)于腎臟具有抗氧化，減少炎癥因子表達(dá)的作用。臨床上對(duì)其研究不斷深入，在臨床上應(yīng)用增加[4]。丹參可能受到產(chǎn)地、藥物管理和雜志等的影響真?zhèn)魏唾|(zhì)量好壞，從而影響患者病情控制[5]。所以本研究應(yīng)用高效液相色譜建立本院丹參的指紋圖譜對(duì)水溶性成分的峰敏感性和分離作用?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

儀器為HP1100高效液相色譜儀和C18色譜柱。研究中使用的乙氰、甲醇和磷酸均為色譜醇。

1.2 研究藥材編號(hào)及采購(gòu)

研究對(duì)照品原茶兒醛、丹參素鈉和丹參酚酸均從某生物制品鑒定所購(gòu)入。研究藥材編號(hào)及采購(gòu)原。見(jiàn)表1。

表1 藥材編號(hào)及采購(gòu)原

1.3 溶液配制

稱取不同樣本0.5 g，將丹參過(guò)40目篩。應(yīng)用鎖式提取加入25 mL純凈水，回流1 h。結(jié)束后以采用微孔濾膜濾過(guò)備用。對(duì)照品配制將干燥后的原茶兒醛、丹參素鈉和丹參酚酸精密稱取1 mg，加入純進(jìn)水50 mL進(jìn)行配置。取配制后溶液各1 mL，加入10 mL容量瓶中，加入純進(jìn)水配制到刻度待用。

1.4 高效液相色譜參數(shù)

進(jìn)樣量為20 uL，利用甲醇和7%磷酸水溶液進(jìn)行梯度洗脫，色譜柱溫度為30攝氏度，流速設(shè)置為1.0 ml/min，檢驗(yàn)波長(zhǎng)設(shè)置為280 mm。

2 結(jié) 果

2.1 指紋圖譜分析

通過(guò)中藥色譜圖相似系統(tǒng)評(píng)價(jià)軟件，將5種來(lái)源的丹參高效液相色譜數(shù)據(jù)進(jìn)行導(dǎo)入和修剪建立對(duì)照指紋圖譜。通過(guò)與對(duì)照品指紋圖譜進(jìn)行對(duì)比六種化學(xué)成分得到確認(rèn)。將5種來(lái)源的丹參指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行相似度比較，結(jié)果顯示相似度均大于0.997，見(jiàn)表2。

表2 樣品相似度

2.1 兩組療效指標(biāo)對(duì)比

根據(jù)五種來(lái)源的丹參高效液相色譜峰匹配結(jié)果顯示共有22個(gè)共有峰，考慮到共有峰的穩(wěn)定性，選取其中12個(gè)作為特有峰，包括原茶兒醛、丹參素鈉和丹參酚酸的參照峰。計(jì)算五種來(lái)源丹參指紋圖譜的峰保留時(shí)間和相對(duì)面積。見(jiàn)表3表4。

將研究樣本與對(duì)照品指紋圖譜對(duì)比結(jié)果可見(jiàn)12個(gè)特有峰的保留時(shí)間和相對(duì)面積浮動(dòng)較小，結(jié)果顯示在保留時(shí)間上標(biāo)準(zhǔn)偏差最大為0.415%，而相對(duì)峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差最大為9.477%。說(shuō)明研究中的五種來(lái)源丹參指紋圖譜相對(duì)穩(wěn)定，有利于質(zhì)量的控制。

表3 指紋圖譜的峰保留時(shí)間對(duì)比

表4 指紋圖譜的峰面積對(duì)比

3 討 論

本研究對(duì)丹參水溶性成分建立指紋圖譜，考察高效液相色譜對(duì)丹參水溶性成分峰的分離靈敏性。結(jié)果顯示5種來(lái)源的丹參指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行相似度高，且保留時(shí)間上標(biāo)準(zhǔn)偏差最大為0.415%，而相對(duì)峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差最大為9.477%。提示高效液相色譜是一種可作為丹參水溶性成分質(zhì)量控制的方法。在操作中需注意以下幾點(diǎn)：

①色譜柱的選擇決定了丹參峰的敏感性和分離情況，本研究使用的是C18色譜柱。有研究顯示C18色譜柱能有效的分離丹參水溶性成分[6]。這也是本研究實(shí)現(xiàn)峰良好分離的關(guān)鍵之一。

②不同檢驗(yàn)波長(zhǎng)對(duì)生成丹參指紋圖譜的信息量有差距，本研究選用280 mm的原因在于，在研究之前采用不同波長(zhǎng)檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在280 mm下可獲得信息量最大的指紋圖譜。

③目前梯度洗脫的方案有甲醇和磷酸水溶液，另一種為乙氰和磷酸水溶液，從試劑價(jià)格上考慮乙氰要貴于甲醇，同時(shí)甲醇較乙氰而言其毒性較低[7]。所以本研究采用的是甲醇和磷酸水溶液。

總上所述，利用高效液相色譜建立丹參水溶性成分的指紋圖譜，對(duì)于成分的敏感性和分離作用較好，指紋圖譜特征峰明顯，可用于丹參水溶性成分質(zhì)量控制。

[1] 劉東方,趙麗娜,李銀峰,等.中藥指紋圖譜技術(shù)的研究進(jìn)展及應(yīng)用[J].中草藥,2016,47(22):4085-4094.

[2] 甄漢深,范秀春,丘琴,等.中藥指紋圖譜研究的一些問(wèn)題探討[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2015(8):1960-1961.

[3] 丁曉彥,劉 青,胡萬(wàn)峰,等.丹參水溶性成分HPLC指紋圖譜與化學(xué)模式識(shí)別研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2015(8):1479-1481.

[4] 陳俞材,方蓮花,杜冠華.丹參水溶性化合物抗心肌缺血作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2015(2):162-165.

[5] 趙志剛,郜舒蕊,侯俊玲,等.不同產(chǎn)地加工方法對(duì)山東丹參藥材質(zhì)量的影響[J].中國(guó)中藥雜志,2014,39(8):1396-1400.

[6] 張 珺,程月發(fā),張愛(ài)兵.丹參膠囊水溶性成分的高效液相色譜指紋圖譜分析[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2015,34(1):89-94.

[7] 時(shí)正媛,曾蔚欣,楊 麗,等.HPLC梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定地麻滴鼻液中2種組分的含量[J].實(shí)用藥物與臨床,2015,18(3):313-315.

本文編輯：趙小龍

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ISSN.2095-8242.2017.24.4709.02