王黎，張護(hù)

（1.云南省蒙自市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，云南蒙自661100 2.紅河州畜牧技術(shù)推廣站）

影響種公豬精液品質(zhì)的因素分析

王黎1，張護(hù)2

（1.云南省蒙自市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，云南蒙自661100 2.紅河州畜牧技術(shù)推廣站）

以某豬場(chǎng)飼養(yǎng)的9頭成年種公豬為研究對(duì)象，分析年齡和保存時(shí)間對(duì)種公豬精液品質(zhì)的影響。結(jié)果表明隨著公豬年齡的增長(zhǎng)，采精量不斷增加，18月齡左右達(dá)到頂峰；隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)精子活力和活率呈逐步下降趨勢(shì)，而畸形率則逐步上升。

精子；活力；活率；畸形率；保存時(shí)間

豬人工授精技術(shù)是利用人工和器械方法采集公豬精液，對(duì)其進(jìn)行品質(zhì)檢查，稀釋保存等處理，再用器械把精液送到發(fā)情母豬生殖器官內(nèi)，從而使其受孕的一種配種方法。豬人工授精技術(shù)最大的優(yōu)點(diǎn)是減少群體中所需公豬的總數(shù)，增加優(yōu)良公豬的利用機(jī)會(huì)。很多學(xué)者對(duì)豬人工授精在實(shí)現(xiàn)豬場(chǎng)凈化、提高母豬產(chǎn)仔數(shù)方面給予了肯定。該試驗(yàn)研究了種公豬不同年齡階段、精液保存時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)種公豬精液品質(zhì)的影響。

1 材料與方法

1.1 供試動(dòng)物

供試種豬來(lái)源于紅河州某種豬場(chǎng)成年種公豬9頭。

1.2 公豬飼養(yǎng)管理

公豬全部單欄飼養(yǎng)，自由飲水，每天人工喂料兩次。按照豬場(chǎng)常規(guī)程序進(jìn)行保健，同時(shí)定期消毒。每頭公豬每周采精2次。

1.3 試驗(yàn)儀器與試劑

精液顯微鏡、可調(diào)溫加熱板、蓋玻片、載玻片、電子秤（百分之一精度）、兩根30 cm的溫度計(jì)、3個(gè)2 L塑料燒杯、500 ml量筒、水浴鍋、輸精瓶、瓶蓋、冰箱、雙蒸水儀、一次性輸精管、精液稀釋粉、采精杯、PE手套、濾紙、衛(wèi)生紙、橡皮筋。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 采精

10月齡以下，每周1次；10至12月齡，2 W3次；12月齡以上，每周2次；沒(méi)有配種需求的公豬每周至少采精1次。

1.4.1.1 精液稀釋液的配制將精液稀釋粉溶解于800 ml雙蒸水中，攪拌均勻后，加雙蒸水定容至1 L，置于37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱1 h備用。

1.4.1.2 采精杯的制備先在保溫杯內(nèi)襯1只一次性采精袋，再在杯口覆蓋兩層采精專用濾紙，用橡皮筋固定濾紙，用干凈溫度計(jì)下壓濾紙中心，使其中心凹陷2 cm左右，采精杯蓋與杯分開(kāi)放于37℃恒溫箱中30 min以上備用。

1.4.1.3 采精過(guò)程將待采精公豬趕至采精欄，擠出包皮積尿，用清水清洗腹部和包皮部，吸干；采精員采取兩腳一前一后，單腿蹲跪，以便在出現(xiàn)危險(xiǎn)時(shí)迅速跑開(kāi)；采精員按摩公豬的包皮部，待公豬爬上假畜臺(tái)后，手心朝下握緊伸出的龜頭（握緊“S”狀彎曲第一和第二摺處，避免讓公豬不舒服），順勢(shì)將公豬陰莖拉出（不可強(qiáng)拉）。陰莖充分伸出后，達(dá)到強(qiáng)直“鎖定”狀態(tài)，開(kāi)始射精。射精過(guò)程中不要松手，否則壓力減輕將導(dǎo)致射精中斷。

1.4.1.4 精液收集清亮部分和膠體部分，不要收集；濃厚精液部分，需要完全收集；要注意避免包皮液、尿液等其他異物混入到精液中。

1.4.2 精液品質(zhì)檢查

精液質(zhì)量檢查項(xiàng)目主要包括：精液量、顏色、氣味、精子活力、精子活率、畸形率等（整個(gè)檢查過(guò)程要迅速、準(zhǔn)確，15 min內(nèi)完成）。

1.4.2.1 精液量后備公豬的射精量一般為150～200 ml，成年公豬為200～600 ml，采精后稱重并測(cè)量體積。

1.4.2.2 顏色正常精液的顏色為乳白色或灰白色，凡發(fā)現(xiàn)精液顏色異常，均應(yīng)放棄使用，同時(shí)對(duì)公豬進(jìn)行檢查，并對(duì)癥治療，待精液檢查合格后才可使用。

1.4.2.3 氣味正常的公豬精液具有特有的微腥味，無(wú)腐敗惡臭氣味。有特殊臭味的精液不應(yīng)使用，同時(shí)對(duì)公豬進(jìn)行檢查，并對(duì)癥治療，待精液檢查合格后才可使用。

1.4.2.4 精子活力精子活力一般采用10級(jí)制，即在10× 20/40倍顯微鏡下觀察一個(gè)視野內(nèi)做直線運(yùn)動(dòng)的精子數(shù)，若有90%的精子呈直線運(yùn)動(dòng)則其活力為0.9；有80%呈直線運(yùn)動(dòng)，則活力為0.8，依次類推。先將載玻片放在37℃預(yù)熱的保溫板上3 min，滴上1小滴精液后，蓋上蓋玻片，鏡檢，新鮮精液的精子活力低于0.7不可使用。

1.4.2.5 畸形精子畸形精子包括：頭部畸形、頸部畸形、中段畸形、尾部畸形、未成熟、頂體畸形；公豬總的畸形精子率超過(guò)25%不可使用。

1.4.2.6 精子活率的測(cè)定將精液解凍后滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室內(nèi)，用0.9%生理鹽水稀釋，置顯微鏡下觀察。統(tǒng)計(jì)出4個(gè)角及中央共5個(gè)中方格的非直線運(yùn)動(dòng)的精子數(shù)，將計(jì)數(shù)板放入120℃的干燥箱中5 min，利用高溫殺死全部精子后，計(jì)數(shù)出4個(gè)角及中央共5個(gè)中方格的精子數(shù)。用公式：精子活率=（總精子數(shù)-非直線運(yùn)動(dòng)精子數(shù)）/總精子數(shù)，求出精子活率。

1.4.2.7 精子畸形率的測(cè)定用細(xì)玻璃棒取精液一滴，滴于載玻片一端，滴0.9%NaCl溶液，以另一載玻片的頂角呈35度，抵于精液滴上，向另一端拉去，將精液均勻涂抹于載玻片上。抹片于空氣中自然干燥，之后置于酒精固定液中固定5～6 min，取出水洗后，烘干，用藍(lán)墨水染色3～5 min，再用水沖洗，使之干燥后在顯微鏡下檢查。查數(shù)不同視野的500精子，計(jì)算出其中所含的畸形精子數(shù)，求出畸形精子百分率。

每份經(jīng)過(guò)檢查的公豬精液都要填寫《公豬精液品質(zhì)檢查記錄表》。

1.4.3 精液稀釋處理

精液處理盡量在恒溫環(huán)境中（采精實(shí)驗(yàn)室的恒溫管理）進(jìn)行，經(jīng)過(guò)品質(zhì)檢查后的精液和稀釋液都要在37℃預(yù)熱；精液采集后要盡快稀釋，未經(jīng)精液品質(zhì)檢測(cè)或檢測(cè)不合格的精液不可使用。處理步驟如下：①測(cè)量精液和稀釋液的溫度確保稀釋精液時(shí)，稀釋液與精液溫度一致（以精液的溫度為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)調(diào)節(jié)稀釋液的溫度，兩者溫差在1℃以內(nèi)）。②精液稀釋按頭份計(jì)算。人工授精的正常劑量一般為40億/頭份，體積為80 ml。例如，一份公豬的原精液密度為2億/ml，采精量為150 ml，稀釋后密度要求為40億／頭份。則此公豬精液可稀釋150×2/40＝7.5頭份，需加稀釋液80×7.5－150＝450 ml。③將采精袋轉(zhuǎn)移至2 L塑料大燒杯中，將稀釋液分3次沿杯壁緩緩加入精液中，每次加入后輕輕搖勻，才可再次加入。④稀釋后的精液靜置5 min后，再次檢查精液活力。⑤按每頭份80 ml分裝，在分裝時(shí)，需排掉瓶?jī)?nèi)空氣，并在包裝上貼好標(biāo)簽，注明公豬的品種、耳號(hào)、采精日期和采精時(shí)間段。⑥用具清洗、消毒：所有使用過(guò)的燒杯、玻璃棒、溫度計(jì)及時(shí)清洗，先用清水沖洗干凈后，再用蒸餾水浸潤(rùn)洗滌1次。⑦采精完畢后填寫《公豬采精登記表》，所有采精工作結(jié)束后及時(shí)沖洗采精區(qū)。

1.4.4 精液的保存

分裝好的精液應(yīng)平放（可疊放），不同品種精液應(yīng)分開(kāi)放置并粘貼標(biāo)簽。需保存的精液應(yīng)先在室溫下放置1 h后再轉(zhuǎn)入17℃冰箱中（或用幾層干毛巾包好后直接放入17℃冰箱中）。從放入冰箱開(kāi)始，每隔8 h輕輕顛倒混勻一次并做記錄。減少冰箱門的開(kāi)關(guān)次數(shù)，出現(xiàn)異常情況，必須重查精液品質(zhì)并做記錄。

2 結(jié)果與分析

2.1 月齡對(duì)公豬精液品質(zhì)的影響

在該次精液品質(zhì)分析中由于涉及因素廣且時(shí)間長(zhǎng)，所以只用采精量來(lái)體現(xiàn)公豬不同月齡對(duì)精液品質(zhì)的影響。

結(jié)果顯示公豬從5月齡至8月齡開(kāi)始，采精量逐步上升，到18月齡左右達(dá)到頂峰。但有關(guān)專家認(rèn)為公豬精液量在18月齡后可一直維持到5歲才下降，該試驗(yàn)因時(shí)間關(guān)系暫不能證明。

2.2 保存時(shí)間對(duì)精子活力變化的影響

該研究測(cè)定了9份精液在0 h、24 h、48 h、72 h的精子活力等級(jí)，并統(tǒng)計(jì)了各等級(jí)階段的份數(shù)。

結(jié)果表明，隨著保存時(shí)間的推移精子活力呈下降趨勢(shì)，整體來(lái)看精子活力主要分布在0.8～0.9之間，但隨著時(shí)間推移，到24 h已經(jīng)有1瓶精子的活力低于0.9，到48 h已經(jīng)有1瓶精子的活力低于0.7。

2.3 保存時(shí)間對(duì)精子活率和畸形率變化的情況

測(cè)定了9份精液在不同保存時(shí)間下的精子活率和畸形率，試驗(yàn)過(guò)程中最大程度地保證了單一變量為時(shí)間，盡可能的排除由其他因素對(duì)精液品質(zhì)造成的影響，每一次測(cè)定過(guò)程都嚴(yán)格按照檢測(cè)程序進(jìn)行。影響情況如下圖所示：

圖 保存時(shí)間對(duì)公豬精子活率和畸形率的影響

結(jié)果表明，隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)精子活率在下降，畸形率在上升。由于精子活率低于70%和畸形率高于17%都不能再利用，而在該試驗(yàn)中保存72 h時(shí)的測(cè)量值中已有超過(guò)這兩個(gè)值的。

3 討論

遺傳是決定公豬精液品質(zhì)的最主要因素。有研究表明，公豬的睪丸大小、精子數(shù)量、性欲的遺傳力估值分別為0.4、0.3和0.2。而這些性狀對(duì)精液品質(zhì)影響較大，所以，子代的精液品質(zhì)受父母代影響較大。據(jù)郭應(yīng)琳和伏彭輝報(bào)道，不同的豬種精液品質(zhì)是不同的，一般是大白公豬最好，大約克次之，杜洛克最差［1］。

年齡對(duì)公豬精液品質(zhì)影響較大。老齡公豬的精子密度不如壯年公豬，青年公豬總精子數(shù)最少。提高飼糧粗蛋白水平能顯著增加采精量。但也有研究結(jié)果表明，過(guò)量的蛋白質(zhì)攝入會(huì)引起血液中氨和尿素濃度升高，進(jìn)而引起公豬精子畸形率的增加。王玉良和吳德標(biāo)的試驗(yàn)表明了日糧中的硒、鐵和鈷對(duì)公豬精液品質(zhì)具有不可忽視的影響［2］。其他的試驗(yàn)則表明，飼料中的各種維生素含量影響著公豬的精液品質(zhì)［3-5］。玉榮等對(duì)杜洛克、大白、長(zhǎng)白3個(gè)不同品種種公豬（各30頭分）的不同月齡段（8～12、12～18、18～30月齡）的精液品質(zhì)進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，3個(gè)品種種公豬精子活力都在8～12月齡段最強(qiáng)，隨著年齡增大種公豬精子活力下降。到12～18月齡段3個(gè)品種種公豬精液體積都處于高峰期，18月齡開(kāi)始下降。長(zhǎng)白種公豬在18～30月齡段精子密度極顯著高于另2個(gè)品種種公豬（P＜0.01），但精子活率比較低，平均活率小于75%［6］。

4 結(jié)論

筆者從不同年齡階段、精液不同的保存時(shí)間兩方面對(duì)精液品質(zhì)的影響進(jìn)行了分析。結(jié)果表明隨著公豬年齡的增長(zhǎng)，采精量不斷增加，18月齡左右達(dá)到頂峰；隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)精子活力和活率呈逐步下降趨勢(shì)，而畸形率則逐步上升。由于精子活率低于70%和畸形率高于17%都不能再利用，根據(jù)該試驗(yàn)建議，規(guī)模豬場(chǎng)一般當(dāng)天采精后可放入17℃專用冰箱，但僅留作第2天使用即可，最好超過(guò)48 h的精液不要使用。這些情況在今后種公豬人工授精工作中有一定的參考作用，能夠確保豬人工授精技術(shù)的順利推廣。

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