張?jiān)埽芴m，來國防

(云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，云南 昆明 650011)

?

HPLC測定魚鰾補(bǔ)腎丸(水蜜丸)中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量

張?jiān)埽芴m，來國防

(云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，云南 昆明 650011)

目的：建立高效液相色譜法(HPLC)用于魚鰾補(bǔ)腎丸(水蜜丸)中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量測定.方法：采用Agilent Zorbax SB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以甲醇-水為流動相，梯度洗脫，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為330 nm.結(jié)果：松果菊苷進(jìn)樣量在0.491～7.861 μg范圍內(nèi)，毛蕊花糖苷進(jìn)樣量在0.260～4.155 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好(r=0.9999)；松果菊苷平均加樣回收率為99.5%(RSD為1.3%，n=9)，毛蕊花糖苷平均加樣回收率97.2%(RSD為1.9%，n=9).結(jié)論：該法簡便，準(zhǔn)確，可用于魚鰾補(bǔ)腎丸(水蜜丸)的質(zhì)量控制.

魚鰾補(bǔ)腎丸(水蜜丸)；高效液相色譜；松果菊苷；毛蕊花糖苷

魚鰾補(bǔ)腎丸(水蜜丸)收載于國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)YBZ10932008及YBZ02192007，由魚鰾膠、杜仲、肉蓯蓉等15味藥制成，具有補(bǔ)腎益精的功效，主治腎陽虛弱，腎精虧損所致的頭昏，眼花，耳鳴，腰痛膝軟[1-2].本品現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)相對簡單，未收載肉蓯蓉等補(bǔ)腎陽關(guān)鍵藥味的檢測項(xiàng)目.因此本實(shí)驗(yàn)參考《中國藥典》2015年版一部及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[3-4]，建立了高效液相色譜法，用于魚鰾補(bǔ)腎丸(水蜜丸)中松果菊苷及毛蕊花糖苷的測定，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證.

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1200高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；BP211D電子天平(德國賽多利斯公司)；Ulupure超純水制備系統(tǒng)(成都優(yōu)普公司).

1.2 試藥

松果菊苷對照品(批號：17030701，含量為98.88%，成都曼斯特生物科技有限公司)，毛蕊花糖苷(批號：111530-201411，含量為94.4%，中國食品藥品檢定研究院)；魚鰾補(bǔ)腎丸(水蜜丸)樣品(云南騰藥制藥股份有限公司，批號：161031、170150、170249；云南良方制藥有限公司，批號16072101)；甲醇為色譜純，水為超純水.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent Zorbax SB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)以甲醇為流動相A，水為流動相B，流速：1.0 mL·min-1，梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?～10 min，26% A，10～13 min，26%～29% A，13～45 min，29% A；檢測波長為330 nm；柱溫30℃.

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液

取松果菊苷對照品及毛蕊花糖苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL含松果菊苷0.786 mg，毛蕊花糖苷0.415 mg的溶液，作為對照品溶液.

2.2.2 供試品溶液

取本品適量，研細(xì)，取約5.0 g，精密稱定，置100 mL棕色量瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，搖勻，稱定重量，浸泡30 min，超聲處理45 min(功率250 W，頻率35 kHz)，放冷，再稱定重量，加50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得.

2.2.3 缺肉蓯蓉陰性對照溶液

取除肉蓯蓉外的14味藥材，依處方制備缺肉蓯蓉陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法，制備缺肉蓯蓉陰性對照溶液.

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別吸取對照品溶液、供試品溶液及缺肉蓯蓉陰性對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖.供試品色譜圖中呈現(xiàn)與松果菊苷、毛蕊花糖苷對照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰，且與雜質(zhì)峰分離良好，陰性樣品無干擾，該方法專屬性較好，結(jié)果見圖1.

圖1 對照品溶液(A)、供試品溶液(B)及缺肉蓯蓉陰性對照溶液(C)色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下的對照品溶液，用50%甲醇逐級稀釋，制成系列混合對照品溶液，分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖.以質(zhì)量濃度(mg·mL-1)為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.結(jié)果松果菊苷在0.491～7.861 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好(r=0.9999)，回歸方程為Y=12686.304X-13.042；毛蕊花糖苷在0.260～4.155 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好(r=0.9999)，回歸方程為Y=17645.720X-26.853.

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下的對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖.計(jì)算松果菊苷及毛蕊花糖苷峰面積的RSD值，分別為0.7%及0.6%(n=6)，儀器精密度良好.

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號為170249的供試品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份.分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定并計(jì)算.結(jié)果松果菊苷平均含量為2.266 mg·g-1，RSD為1.3%(n=6)；毛蕊花糖苷平均含量為0.387 mg·g-1，RSD為1.8%(n=6)，重復(fù)性良好.

2.7 加樣回收試驗(yàn)

取批號為170249的供試品2.5 g，共9份，精密稱定，按“2.6”項(xiàng)下測得含量的50%，100%，150%，共3個水平，分別加入松果菊苷及毛蕊花糖苷對照品，每水平3份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法，制備供試品溶液.分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定并計(jì)算.結(jié)果松果菊苷平均回收率為99.5%，RSD為1.3%(n=9)；毛蕊花糖苷平均回收率為97.2%，RSD為1.9%(n=9)，方法準(zhǔn)確性良好(見表1).

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取批號為170249的供試品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計(jì)算松果菊苷及毛蕊花糖苷峰面積RSD值，分別為0.9%、0.8%(n=6)，表明供試品溶液在制備后12 h內(nèi)保持穩(wěn)定.

2.9 樣品測定

取魚鰾補(bǔ)腎丸(水蜜丸)樣品4批，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，測定并計(jì)算，結(jié)果見表2.

表2 供試品測定結(jié)果

3 討 論

3.1 提取方法的選擇

松果菊苷及毛蕊花糖苷為苯乙醇苷類化合物，穩(wěn)定性受光照、溫度等影響較大[5-7]，因此參考相關(guān)文獻(xiàn)，選擇浸泡30 min后超聲作為提取方法[3,8-9].比較不同比例甲醇水溶液等提取溶劑的提取效率，選擇效率較高，雜質(zhì)干擾少的50%甲醇水溶液作為提取溶劑.通過不同超聲提取時(shí)間對松果菊苷及毛蕊花糖苷提取效果的比較，最終確定超聲處理時(shí)間為45 min.

3.2 流動相的選擇

試用了甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸、乙腈-0.1%甲酸等不同的流動相組成，發(fā)現(xiàn)甲醇-水體系下，待測組分峰形對稱，與相鄰雜質(zhì)峰分離度高且操作簡便，故采甲醇-水為流動相.

3.3 含量測定結(jié)果分析

依處方制法計(jì)算，每1 g魚鰾補(bǔ)腎丸(水蜜丸)相當(dāng)于肉蓯蓉藥材0.05128 g(云南騰藥制藥股份有限公司)或0.0615 g(云南良方制藥有限公司).含量測定結(jié)果顯示，松果菊苷及毛蕊花糖苷總量約占肉蓯蓉藥材的4.8%～5.2%，未按干燥品計(jì)算，已符合《中國藥典》2015年版一部肉蓯蓉及飲片含量測定項(xiàng)下的限度規(guī)定，且同一來源樣品結(jié)果差異較小，質(zhì)量較為穩(wěn)定.

[1]國家食品藥品監(jiān)督管理局.魚鰾補(bǔ)腎丸國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)：YBZ10932008[S].2008.

[2]國家食品藥品監(jiān)督管理局.魚鰾補(bǔ)腎丸國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)：YBZ02192007[S].2007.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015年版(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2015：135.

[4]張思巨,劉麗,于江泳,等.HPLC同時(shí)測定肉蓯蓉藥材中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量[J].中國藥學(xué)雜志,2004,39(10)：740-741.

[5]楊素德,胡軍華,李家春,等.HPLC法同時(shí)測定蓯蓉總苷膠囊中松果菊苷、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷的含量[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2015,17(3)：609-613.

[6]彭素萍,鞏珺,苗瑞娟,等.連翹酯苷B與毛蕊花糖苷穩(wěn)定性研究[J].今日藥學(xué),2012,22(6)：326-328.

[7]劉雄,吳蓉,余曉暉,等.HPLC法測定不同產(chǎn)地肉蓯蓉中松果菊苷的含量[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,26(5)：42-44.

[8]田玉彪,楊廣安,黃維杰,等.HPLC測定肉蓯蓉微粉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(33)：171-173.

[9]錢浩,喻芳君,耿宗成,等.不同季節(jié)采收的肉蓯蓉中4種苯乙醇苷的含量比較研究[J].藥物分析雜志,2016,36(11)：1971-1976.

[10]曾建偉,張珍麗,鐘黎,等.HPLC波長切換法同時(shí)測定復(fù)方蓯蓉散中松果菊苷、毛蕊花糖苷和淫羊藿苷[J].中成藥,2016,38(1)：84-87.

[責(zé)任編輯：徐明忠]

Quantitative determination of echinacoside and verbascoside in Yubiao Bushen Pills (water-honeyed pills)using HPLC

ZHANG Yuanjie，ZHOU Lan，LAI Guofang

(Yunnan Institute for Food and Drug Control，Kunming 650011，China)

Objective To establish a method for quantitative determination of echinacoside and verbascoside in Yubiao Bushen Pills (water-honeyed pills) using high performance liquid chromatography(HPLC).Methods：The analyses were performed on a Agilent Zorbax SB-C18 column(4.6 mm×250 mm,5 μm)with gradient elution of methanol and water at a flow rate of 1.0 mL·min-1.The detection wavelength was set at 330 nm.Results：The calibration curves of echinacoside and verbascoside showed good linearity(r=0.9999) within the range of 0.491～7.861 μg and 0.260～4.155 μg，respectively.The average recoveries of echinacoside and verbascoside were 99.5%(RSD=1.3%,n=9)and 97.2%(RSD=1.3%,n=9).Conclusion：The method was simple and accurate for quality control of Yubiao Bushen Pills(water-honeyed pills).

Yubiao Bushen Pills(water-honeyed pills)；HPLC；echinacoside；verbascoside

2017-05-19

《中國藥典》藥品標(biāo)準(zhǔn)提高項(xiàng)目(319)

張?jiān)?1984—), 男, 云南玉溪人, 主管藥師, 主要從事藥品檢驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.

來國防(1973—),男,河南柘城人,主任藥師,博士，主要從事藥品檢驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.

O652.63

A

1672-3600(2017)09-0024-04