王憲靈，王縛鯤，趙博華

(白求恩國(guó)際和平醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北石家莊050082)

駐石部隊(duì)師職女干部高危型HPV基因型分布

王憲靈，王縛鯤，趙博華

(白求恩國(guó)際和平醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北石家莊050082)

目的了解駐石部隊(duì)師職女干部宮頸高危型人乳頭瘤病毒(HPV)感染情況及亞型分布特點(diǎn)，為宮頸癌的預(yù)防與診治提供理論依據(jù)。方法采集2013年6月至2016年8月于白求恩國(guó)際和平醫(yī)院婦科體檢的588例師職女干部宮頸脫落細(xì)胞，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR對(duì)其進(jìn)行高危型HPV基因分型檢測(cè)。結(jié)果588例受檢者高危型HPV總感染率為11.9%(70/588)，其中單一感染率為8.2%，多重感染率為3.7%，檢測(cè)出的高危型HPV主要型別依次為HPV52型(14.6%)、58型(14.6%)、68型(14.6%)、18型(12.5%)、66型(12.5%)。HPV感染年齡分布情況：≤40歲組4例均未感染；41～50歲組感染率為11.2%(33/294)，主要型別依次為HPV66型、52型、18型；51～60歲組感染率為12.8% (32/250)，主要型別依次為HPV68型、58型、52型；＞60歲組感染率為12.5%(5/40)，主要型別為HPV58型；各年齡組的HPV感染率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論駐石部隊(duì)師職女干部高危型HPV感染以單一感染為主，感染率較高的亞型是HPV52、58、68型，不同年齡分布的感染率無(wú)顯著差異。

人乳頭瘤病毒；基因分型；感染率；師職女干部

人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是一種嗜皮膚和黏膜上皮細(xì)胞的雙鏈環(huán)狀DNA病毒，人是其唯一宿主，目前已發(fā)現(xiàn)170多種亞型[1]。感染HPV的型別不同，臨床表現(xiàn)也不相同。人們依據(jù)其不同型別致癌危險(xiǎn)性高低分為低危險(xiǎn)型和高危險(xiǎn)型HPV，低危型HPV主要引起疣等良性病變，而高危險(xiǎn)型HPV則與宮頸癌的發(fā)病密切相關(guān)。高危型HPV主要有16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82等型別。為了解高危型HPV在駐石部隊(duì)師職女干部中的感染情況，制定有效的防治措施，筆者通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)588例駐石部隊(duì)師職女干部的宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行了高危型HPV的基因分型檢測(cè)，并對(duì)型別分布進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源選擇2013年6月至2016年8月于白求恩國(guó)際和平醫(yī)院婦科體檢師職女干部，剔除復(fù)查數(shù)據(jù)，共計(jì)588例，年齡39～63歲，平均52.3歲；其中≤40歲組4例，41～50歲組294例，51～60歲組250例，＞60歲組40例。

1.2 主要儀器和試劑ABI7500 Rea1-time PCRSystem及其配套分析軟件(美國(guó)ABI公司)；HPV提取及分型檢測(cè)試劑盒由上海之江生物科技股份有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 宮頸脫落細(xì)胞的收集月經(jīng)干凈后至少3 d，檢查3 d內(nèi)無(wú)性生活史、無(wú)陰道用藥及沖洗史。用無(wú)菌生理鹽水棉球洗去宮頸外分泌物，將宮頸刷伸入宮頸處停留5 s，順時(shí)針輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)宮頸刷3～5圈，慢慢取出宮頸刷，將其放入裝有專用細(xì)胞保存液的樣本管中送檢，標(biāo)本于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

1.3.2 DNA提取嚴(yán)格按照操作步驟提取DNA。標(biāo)本室溫復(fù)融，充分震蕩混勻15 s，吸取1 mL液體轉(zhuǎn)至1.5 mL離心管中，13 000 r/min離心5 min，沉淀加無(wú)菌生理鹽水1 mL混勻，13 000 r/min離心5 min，小心吸棄上清，沉淀直接加入100 μL核酸抽提液充分混勻15 s，100℃水浴(99℃干浴)10 min，13 000 r/min離心5 min，上清即為PCR反應(yīng)模板。同時(shí)取陰性和陽(yáng)性對(duì)照各100 μL于1.5 mL離心管中(凍存試劑融解后需震蕩混勻10 s)，分別加入核酸提取液100 μL充分混勻，100℃水浴10 min，13 000 r/min離心5 min，取上清作為PCR反應(yīng)模板。

1.3.3 DNA擴(kuò)增取4種HPV核酸熒光PCR檢測(cè)混合液n×36 μL分別與4份n×0.4 μL Taq酶(n為反應(yīng)管數(shù))，震蕩混勻數(shù)秒，3 000 r/min離心數(shù)秒。上述4種配制好的混合液各36 μL分別置于薄壁PCR反應(yīng)管，然后將待檢標(biāo)本、陰性、陽(yáng)性對(duì)照品的處理上清液4 μL分別加入上述反應(yīng)管中，蓋好管蓋，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增條件為：94℃×2 min；再按93℃× 10 s→62℃×31 s，循環(huán)40次；單點(diǎn)熒光檢測(cè)在62℃。反應(yīng)體系為40 μL，能檢出HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82共15個(gè)型別。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多重感染者則重復(fù)計(jì)算各基因型陽(yáng)性率。

2 結(jié)果

2.1 HPV感染情況588例體檢者中，檢出高危型HPV感染70例，總感染率為11.9%。其中單一感染48例(8.2%)；雙重感染18例(3.0%)，其中39+68型4例，33+58型2例，58+66型2例，16+18型2例，58+16型2例，68+31型1例，52+59型1例，58+18型1例，39+68型1例，66+68型1例，52+18型1例；三重感染4例(0.7%)，18+51+52型、31+58+66、18+56+66型、16+52+ 68型各1例。

2.2 HPV感染亞型分布588例體檢者高危型HPV感染的各亞型分布中，其感染頻度前5位依次為HPV52型14例(14.6%)、HPV58型14例(14.6%)、 HPV68型14例(14.6%)、HPV18型12例(12.5%)、H PV 66型12例(12.5%)。不同年齡段檢出的高危型HPV各亞型分布見表1。

表1588例體檢者不同年齡段檢出的高危型HPV各亞型分布(例)

2.3 高危型HPV感染年齡分布588例體檢者在≤40歲、41～50歲、51～60歲和＞60歲組高危型HPV的感染率分別為0、11.2%、12.8%、和12.5%。除≤40歲組檢測(cè)例數(shù)較少不參與統(tǒng)計(jì)外，對(duì)其余3個(gè)年齡組進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，顯示不同年齡段高危型HPV感染情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.329，P＞0.05)，見表2。

表2588例體檢者不同年齡段高危型HPV感染情況

3 討論

宮頸癌是全球除乳腺癌之外導(dǎo)致婦女死亡的第二大惡性腫瘤，根據(jù)我國(guó)國(guó)家癌癥中心公布的最新數(shù)據(jù)估計(jì)，2015年我國(guó)宮頸癌新發(fā)病例約10萬(wàn)例，死亡病例約3萬(wàn)例[2]。生殖道高危型HPV持續(xù)感染是導(dǎo)致宮頸癌和子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)的必要因素之一[3-4]，一旦發(fā)生感染，患宮頸癌的危險(xiǎn)性相對(duì)增加250倍[5]。HPV是一種具有種屬特異性的病毒，人是HPV感染的唯一宿主，具有高度的宿主特異親和力[6]。有70%～80%的女性一生中至少感染過(guò)一種HPV型，但大多數(shù)為一過(guò)性感染，1～2年可自然清除，只有少數(shù)免疫系統(tǒng)較弱的女性才會(huì)造成持續(xù)感染。持續(xù)感染尤其是高危型HPV持續(xù)感染是引起宮頸癌及癌前病變的重要因素[7-8]。從感染到發(fā)生癌變一般需要10年左右的時(shí)間[9]。

不同型別的HPV感染有地域性差異，世界范圍內(nèi)以高危型HPV16、18型感染率最高[10]，亞洲常見HPV58、52型感染[11]。岑堯等[12]所做的中國(guó)女性人乳頭瘤病毒感染狀況及高危型別分布的Meta分析顯示：我國(guó)高危型HPV感染主要型別依次為16型、52型、58型、33型、18型，南方地區(qū)和北方地區(qū)高危型HPV型別分布存在差異，南方地區(qū)以16型和52型為主，北方地區(qū)則以16型和58型常見。本研究共檢測(cè)15個(gè)高危型HPV基因，除35、45、82三個(gè)型別未檢出外，其他型別均有檢出。檢出的高危型HPV主要型別依次為52型、58型、68型、18型、66型，而我國(guó)最常見感染型別HPV16型在本研究中檢出例數(shù)較少，且不同年齡段間型別分布略有差異。目前針對(duì)HPV感染尚無(wú)特效治療辦法，雖已研制出宮頸癌疫苗，但其針對(duì)的高危型別僅為16、18型，并且對(duì)接種年齡有一定要求，以11～12歲為佳。疫苗只有預(yù)防作用，對(duì)宮頸癌或癌前病變沒(méi)有治療作用。在宮頸癌的防治上早期發(fā)現(xiàn)HPV感染、早期分型、早期干預(yù)治療具有重要意義[13]。

本研究顯示高危型HPV感染率(11.9%)低于2008年中國(guó)癌癥基金會(huì)發(fā)布的一項(xiàng)流行病學(xué)研究，即中國(guó)漢族婦女高危型HPV感染率約為15%，這可能與本研究所選人群為部隊(duì)師職女干部，與其文化水平較高、衛(wèi)生狀況較好有關(guān)。感染類型以單一型別為主，與王烈宏等[14]的報(bào)道一致。單一型別感染率為8.2%，多重型別混合感染率為3.7%，多重感染更易導(dǎo)致宮頸瘤變的發(fā)生[15]。高危型HPV在各年齡段均存在一定的感染，不同年齡段感染無(wú)顯著差異，和趙夏豐等[16]的研究一致。雖然本研究例數(shù)較少，但足以說(shuō)明在臨床無(wú)癥狀人群中，高危型HPV仍存在較高的感染率，有必要加強(qiáng)宣傳宮頸癌的防治知識(shí)，加大普查力度，以進(jìn)一步減少宮頸癌的發(fā)生。

不同地區(qū)、不同種族HPV感染率以及感染型別存在差異[17]，不同型別所致宮頸癌的危險(xiǎn)性亦不同，HPV基因分型檢測(cè)對(duì)于生殖道感染以及子宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)、預(yù)防及治療具有重要意義。

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Genotype distribution of high-risk human papillomavirus in female division-level cadres in Shijiazhuang area.

WANG Xian-ling,WANG Fu-kun,ZHAO Bo-hua.Department of Clinical Laboratory,Bethune International Peace Hospital of PLA,Shijiazhuang 050082,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the genotype distribution of high-risk human papillomavirus(HPV)infection of female division-level cadres in Shijiazhuang area,and to provide evidence for the diagnosis and prevention of HPV infection.MethodsA total of 588 cervical exfoliated cell samples was collected from female division-level cadres who underwent physical examination in Bethune International Peace Hospital from June 2013 to August 2016.HPV genotypes were determined with real-time fluorescent PCR(Real-time PCR)assay.ResultsAmong the 588 cases,70 cases were tested for HPV-positive with the total positive rate of 11.9%.Among the positive cases,8.2%were determined to be infected with single HPV genotype and 3.7%with multiple HPV genotypes.The most prevalent HPV subtypes in the present study were as follows：HPV52(14.6%),HPV58(14.6%),HPV68(14.6%),HPV18(12.5%),and HPV66(12.5%).The HPV-positive rate were 0(0/4)in the age≤40 group,11.2%(33/294)in the range age of 41～50 group with the most prevalent HPV subtypes as followed HPV66,HPV52,HPV18,12.8%(32/250)in the age of 51～60 group with the most prevalent HPV subtypes of HPV68,HPV58,HPV52 and 12.5%(5/40)in the age＞60 group with the most prevalent HPV subtypes of HPV58,respectively.There was no significant difference among different age groups (P＞0.05).ConclusionFor the female division-level cadres in Shijiazhuang area,single infection is the major form of HPV infection.The most prevalent high-risk HPV subtypes are HPV52,HPV58 and HPV68.There is no significantly difference in the HPV positive-rate among different age groups.

Human papillom avirus(HPV);Genotyping;Infection rate;Female division-level cadres

R711

A

1003—6350（2017）14—2306—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.14.021

2017-01-18)

王縛鯤。E-mail：wangfk8@sina.com