張立　李濤　吳嬌

摘要 山蒼子是我國的能源樹種，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。在山蒼子組培中，染菌比較嚴(yán)重，導(dǎo)致繼代培養(yǎng)無法進(jìn)行。為解決生產(chǎn)中的實(shí)際問題，在配制培養(yǎng)基時(shí)，分別添加了6種殺菌劑進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)。結(jié)果表明，防止山蒼子組培苗染菌效果較好的藥劑為80%多福鋅可濕性粉劑，其防治效果為85.71%，抑菌效果為89.39%，山蒼子存活率為61.90%。

關(guān)鍵詞 山蒼子；組織培養(yǎng)；殺菌劑；染菌率

中圖分類號(hào) S482.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）13-0108-01

Abstract Litsea cubeba is our country′s energy tree species with high economic value.In the tissue culture of Litsea cubeba，contamination is serious，resulting in the subculture can not be done.To solve the actual problems in the production，in the preparation of culture medium，6 kinds of fungicides were used respectively.The results showed that the better fungicide to control contamination of Litsea cubeba plantlets was the 80% of Christopher zinc wettable powder.The controlling effect was 85.71% and the inhibitory effect was about 89.39%.At the same time，the survival rate of Litsea cubeba plantlets was 61.90%.

Key words Litsea cubeba；tissue culture；fungicide；pollution rate

山蒼子是我國的特有資源，其果實(shí)含有豐富的檸檬醛、脂肪醇，具有較高的經(jīng)濟(jì)開發(fā)價(jià)值。目前，山蒼子主要為種子繁殖，成活率低，但利用組培快繁技術(shù)，山蒼子外植體又易褐化[1]，雜菌污染現(xiàn)象嚴(yán)重。游 玲等從山蒼子植株中分離出25株內(nèi)生真菌[2]，魏練平等從山蒼子葉中分離出2株內(nèi)生真菌[3]。采用殺菌劑防治外植體污染在植物組織培養(yǎng)中已有研究[4-6]。本試驗(yàn)在培養(yǎng)基中添加6種農(nóng)用殺菌劑，研究控制山蒼子組培內(nèi)源菌污染的有效方法，可為以后組培快繁提供參考和依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

組織培養(yǎng)材料為當(dāng)年生山蒼子枝條。選取的殺菌劑多數(shù)為復(fù)配劑，分別為50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑、31%綠亨氮苷·嗎啉胍可溶粉劑、80%多福鋅可濕性粉劑、70%惡霉靈可溶性粉劑、80%惡霉·?？蓾裥苑蹌?0%多菌靈可濕性粉劑。所用培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施

試驗(yàn)根據(jù)所用藥劑及濃度不同，共設(shè)7個(gè)處理，分別為50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑800倍液（A）、31%綠亨氮苷·嗎啉胍可溶粉劑1 000倍液（B）、80%多福鋅可濕性粉劑800 倍液（C）、70%惡霉靈可溶性粉劑1 000倍液（D）、80%惡霉·?？蓾裥苑蹌?00倍液（E）、80%多菌靈可濕性粉劑800倍液（F），以空白為對(duì)照（CK）。按使用濃度計(jì)算殺菌劑用量，直接加入培養(yǎng)基中，高溫常規(guī)滅菌。3次重復(fù)。每組7瓶，每瓶接種3株山蒼子外植體（山蒼子枝條洗凈后，無菌條件下，75%酒精浸泡30 s，0.1%升汞浸泡8 min，無菌水沖洗4～5次）。在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，1周后調(diào)查結(jié)果。

1.3 調(diào)查統(tǒng)計(jì)

用直尺測(cè)量每一個(gè)培養(yǎng)瓶中的菌落直徑，菌落不規(guī)則的測(cè)量其長(zhǎng)徑和短徑，并以其平均值表示直徑，然后計(jì)算凈生長(zhǎng)量和抑菌效果[7]。

2 結(jié)果與分析

由表1可知，山蒼子組培苗存活率從高到低依次是處理C（61.90%）>處理F（42.86%）>處理A（33.33%）>處理B（19.05%）>處理E（4.76%）>處理D（0），抑菌效果由高到低依次是處理C（89.39%）>處理F（75.73%）>處理E（73.36%）>處理B（54.17%）>處理A（52.66%）>處理D（6.28%）。從防治效果看，最好的是處理C（85.71%），其他處理均<50%。同時(shí)，也觀察到處理E的抑菌效果為73.36%，但防治效果卻為4.76%，說明80%惡霉·?？蓾裥苑蹌?duì)抑制病原菌生長(zhǎng)有效，但對(duì)植物內(nèi)源菌無效。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，80%多福鋅可濕性粉劑的防治效果為85.71%，抑菌效果為89.39%，山蒼子組培苗存活率為61.90%；80%多菌靈可濕性粉劑的抑菌效果為75.73%，但防治效果只有42.86%。植物組織培養(yǎng)在固定的空間環(huán)境里，包括操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境，常見的優(yōu)劣病原菌應(yīng)是相對(duì)固定和特定的，因而研究時(shí)主要是比較植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基和殺菌劑的效果，其中利用殺菌劑防止植物組織培養(yǎng)污染可大大降低污染率，也可以降低成本，不過也可能對(duì)植物產(chǎn)生負(fù)面影響。有針對(duì)性地使用殺菌劑或是殺菌劑組合，既可防止污染又不會(huì)影響培養(yǎng)物生長(zhǎng)。根據(jù)殺菌劑的作用機(jī)理，若能篩選出能抑制菌種又不會(huì)影響或少影響培養(yǎng)物生長(zhǎng)的殺菌劑，在組織培養(yǎng)中省略培養(yǎng)基滅菌環(huán)節(jié)，將大大節(jié)約人工和能源。

如果利用殺菌劑解決了這2方面的問題，那么就有可能改變傳統(tǒng)的封閉式植物組織培養(yǎng)模式，實(shí)現(xiàn)開放式的植物組織培養(yǎng)模式。在組培環(huán)境中，例如光照、濕度、氣體、培養(yǎng)基固化物、組培容器和儀器設(shè)備等因素對(duì)植物組織培養(yǎng)的局限性將有極大地改善，從而帶來組培技術(shù)的重大突破。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 劉友銀.山蒼子繁殖材料外植體防褐變技術(shù)研究[J].中國園藝文摘，2014（2）：41-42.

[2] 游玲，林娜，郭華，等.山蒼子內(nèi)生真菌多樣性研究[J].西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2012，38（1）：121-126.

[3] 魏練平，魏洪璇，吳丹，等.山蒼子葉內(nèi)生真菌的純化與鑒定[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2013，25（10）：1131-1133.

[4] 王志成，劉明稀，易自力.殺菌劑防治植物組織培養(yǎng)污染的初步研究[J].長(zhǎng)沙電力學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004，19（1）：82-84.

[5] 劉靜，孫海偉，段祖安，等.混合殺菌劑對(duì)植物組培污染防治實(shí)驗(yàn)[J].山東林業(yè)科技，2004（5）：10-12.

[6] 李曉鶯，羅青，張曦燕，等.殺菌劑對(duì)枸杞組織培養(yǎng)中真菌污染的控制[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（36）：15804.

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