佘文莉 劉 暉 謝 姍 謝光輝 劉宏偉

(暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院整形激光美容科，廣東 廣州 510632)

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豚鼠局部5-氨基酮戊酸透皮吸收的影響因素

佘文莉 劉 暉 謝 姍 謝光輝 劉宏偉

(暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院整形激光美容科，廣東 廣州 510632)

目的 觀察不同孵育溫度、溶劑、pH值、有無角質(zhì)軟化劑等孵育方法對(duì)5-氨基酮戊酸(ALA)透皮吸收度的影響。方法 建立豚鼠動(dòng)物模型，分別采取不同孵育溫度、溶劑、pH值、有無角質(zhì)軟化劑等不同條件進(jìn)行孵育，測(cè)定不同孵育方法孵育后病變組織光敏劑的熒光強(qiáng)度。結(jié)果 42℃條件下病變組織中光敏劑的熒光強(qiáng)度顯著高于在37℃條件下的熒光強(qiáng)度(P<0.05)；以月桂氮卓酮為溶劑的ALA溶液孵育組病變組織中光敏劑的熒光強(qiáng)度均明顯高于在生理鹽水配置的ALA溶液條件下孵育組(P<0.05)；在pH4.0 ALA溶液條件下孵育組病變組織中光敏劑的熒光強(qiáng)度均明顯高于在pH7.0和pH10.0的ALA溶液條件下的孵育組(P<0.05)；使用角質(zhì)軟化劑預(yù)敷組的病變組織中光敏劑的熒光強(qiáng)度均明顯高于未經(jīng)過預(yù)敷組(P<0.05)。結(jié)論 較高的孵育溫度、較低的pH值以及透皮促進(jìn)劑和角質(zhì)軟化劑的加入均有利于提高局部ALA透皮吸收。

5-氨基酮戊酸；透皮吸收

5-氨基酮戊酸(ALA)作為一種新型的光敏劑，用于光動(dòng)力治療具有很好的療效，其介導(dǎo)的光動(dòng)力治療創(chuàng)新性應(yīng)用于良性皮膚病的基礎(chǔ)與臨床應(yīng)用研究引人注目〔1，2〕。ALA作為機(jī)體合成血紅素的前體物質(zhì)，正常存在于人體細(xì)胞中，其本身并不具有光敏性，在細(xì)胞中經(jīng)過一系列酶作用后才生成具有光敏性的原卟啉(Pp)IX〔3～5〕。ALA光動(dòng)力治療在靶組織產(chǎn)生的PpIX比在周圍正常組織產(chǎn)生的要多，其可能的原因是病變組織含有的亞鐵鰲合酶以及可供利用的鐵離子比周圍正常組織少，病變組織的細(xì)胞通透性發(fā)生變化，病變組織的pH值較低〔6〕。ALA光動(dòng)力治療用于銀屑病、尖銳濕疣、多毛癥等皮膚疾病的治療已經(jīng)取得了一定的療效，但是ALA皮膚穿透能力差、生物利用度不高一直是限制該項(xiàng)技術(shù)進(jìn)一步發(fā)展的關(guān)鍵問題〔3〕。本研究通過觀察不同孵育溫度、溶劑、pH值、有無角質(zhì)軟化劑等孵育方法對(duì)ALA透皮吸收度的影響，分析找出局部ALA外用的最佳孵育方法。

1 材料與方法

1.1 一般資料 半導(dǎo)體激光治療儀(輸出波長 635 nm，輸出功率0～200 mW，廣州市激光技術(shù)應(yīng)用研究所)；光譜采集設(shè)備采用光學(xué)多通道分析儀(OMA)，主要包括MS257型光譜儀(美國Oriel公司，波長探測(cè)范圍590～735 nm，分辨率約為0.37 nm)和具有時(shí)間閘門的致冷像增強(qiáng)型光譜探測(cè)器ICCD(InstaSpecTM Ⅴ型ICCD，英國Andor公司，像敏面陣像素?cái)?shù)為385×578，單次開門時(shí)間25 ms，積分20次)，熒光信號(hào)經(jīng)控制卡轉(zhuǎn)換后輸入計(jì)算機(jī)進(jìn)行后續(xù)處理；SS20-2動(dòng)物恒溫毯(上海欣曼科教設(shè)備有限公司)。5-ALA粉劑(上海瀚鴻化工科技有限公司，批號(hào)BH-5005-091231)為>99%白色粉末狀，每包5 g，每次治療前在避光條件下以無菌生理鹽水配制成濃度為20%的溶液，避光儲(chǔ)存；戊巴比妥鈉(美國Sigma公司，批號(hào)P3761)> 99%微黃白色粉末25 g每瓶，配制成濃度為0.2 ml/100 g的溶液；月桂氮卓酮(武漢鑫嘉林生物有限公司，批號(hào)20080503)；水楊酸、枸櫞酸、磷酸氫二鈉和氯化銨(上海南翔試劑有限公司)等；所用試劑均為分析純。健康成年豚鼠36只，雌雄各半，體質(zhì)量250～300 g，(許可證號(hào)SCXK<粵>20030002 粵監(jiān)證字A027)由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 豚鼠動(dòng)物模型建立 將成年豚鼠隨機(jī)分為A、B、C、D、E、F、G、H、I組，每組又分別作用1、2、3、4 h，每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組4只豚鼠，用龍膽紫溶液在每只豚鼠背部皮損處標(biāo)記出1 cm×1 cm大小范圍為實(shí)驗(yàn)區(qū)域。5%心得安搽劑(暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科自制，含鹽酸普萘洛爾粉50 mg)外涂背部標(biāo)記皮膚，3次/d，每次約1 ml，連續(xù)2 w，建模成功后待用，實(shí)驗(yàn)前戊巴比妥鈉30 mg/kg麻醉。

1.2.2 不同孵育溫度對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響 選A、B兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。用生理鹽水配置的20%ALA溶劑在避光條件下涂在標(biāo)記處，用黑色塑料薄膜避光封包。然后將A組動(dòng)物恒溫毯設(shè)置為37℃，置于ALA涂抹處分別孵育1、2、3、4 h；B組動(dòng)物恒溫毯設(shè)置為42℃，置于ALA涂抹處分別孵育1、2、3、4 h，熒光光譜法檢測(cè)組織中光敏劑含量。

1.2.3 不同溶劑對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響 選C、D兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。用生理鹽水制備20%的ALA溶液在避光條件下涂在C組健康無皮損豚鼠模型后背標(biāo)記處，用塑料薄膜避光封包，分別孵育1、2、3、4 h；用2%月桂氮卓酮制備20%的ALA生理鹽水溶液在避光條件下涂在D組健康豚鼠模型后背標(biāo)記處，用塑料薄膜避光封包，分別孵育1、2、3、4 h，熒光光譜法檢測(cè)組織中光敏劑含量。成年豚鼠模型給予ALA前先采集標(biāo)記區(qū)域光譜作為本底〔3〕。給予ALA溶液并經(jīng)過規(guī)定的封包孵育時(shí)間后，采用635 nm激光照射，功率密度30 mW/cm2，能量密度12 J/cm2，按要求治療約30 min，治療結(jié)束前進(jìn)行熒光采集，數(shù)據(jù)輸入電腦，通過Orign軟件進(jìn)行處理，譜線經(jīng)自體熒光本底校正、系統(tǒng)噪聲校正和光譜交叉校正后，取光敏劑特征峰附近一段區(qū)域求平均值即為其熒光強(qiáng)度，使用光敏劑熒光強(qiáng)度代表光敏劑含量。

1.2.4 不同pH值制劑對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響 選E、F和G共3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。參照2015版藥典附錄ⅩⅤD分別配制pH值4.0、7.0、10.0的緩沖溶液，制備3種不同pH值的20%ALA溶液，然后分別將3種不同pH值20%的ALA溶液在避光條件下涂在E、F、G組豚鼠模型后背標(biāo)記處，用塑料薄膜避光封包；分別孵育1、2、3、4 h，熒光光譜法檢測(cè)組織中光敏劑含量。

1.2.5 有無角質(zhì)軟化劑對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響 選H和I兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。I組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用10%水楊酸濕敷實(shí)驗(yàn)區(qū)30 min，然后在避光條件下涂抹20%的ALA生理鹽水溶劑，用塑料薄膜避光封包；分別孵育1、2、3、4 h，熒光光譜法檢測(cè)組織中光敏劑含量。H組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不使用水楊酸進(jìn)行預(yù)處理，其他操作與I組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相同，分別孵育1、2、3、4 h，熒光光譜法檢測(cè)組織中光敏劑含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 不同孵育溫度對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響 B組孵育1、2、3、4 h后，皮損組織中光敏劑的熒光強(qiáng)度均高于A組，且2、3、4 h的熒光強(qiáng)度具差異顯著(P<0.05)。見表1。

表1 不同孵育溫度對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響熒光強(qiáng)度)

與A組比較：1)P<0.05

2.2 不同溶劑對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響 D組孵育1、2、3、4 h后，病變組織中光敏劑的熒光強(qiáng)度均明顯高于C組(P<0.05)。見表2。

2.3 不同pH值制劑對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響 E組孵育1、2、3、4 h后，病變組織中光敏劑的熒光強(qiáng)度均明顯高于F組和G組(P<0.05)。F組和G組熒光強(qiáng)度無顯著差異(P>0.05)。見表3。

2.4 有無角質(zhì)軟化劑對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響 有無角質(zhì)軟化劑對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響結(jié)果，Ⅰ組孵育1、2、3、4 h后，病變組織中光敏劑的熒光強(qiáng)度均明顯高于H組(P<0.05)。見表4。

表2 不同溶劑對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響熒光強(qiáng)度)

與C組比較：1)P<0.05

表3 不同pH值制劑對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響熒光強(qiáng)度)

與F組比較：1)P<0.05；與G組比較：2)P<0.05

表4 有無角質(zhì)軟化劑對(duì)ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化的影響熒光強(qiáng)度)

與H組比較：1)P<0.05

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，較高溫度有利于ALA透皮吸收和轉(zhuǎn)化，這可能與高溫導(dǎo)致皮下血管擴(kuò)張血流加速，加快了ALA的透皮吸收和轉(zhuǎn)化，增加了其生物利用度。月桂氮卓酮作為一種透皮促進(jìn)劑，其使用顯著增加了ALA的透皮吸收和轉(zhuǎn)化，說明透皮促進(jìn)劑的加入對(duì)促進(jìn)ALA透皮吸收和提高其生物利用度有明顯作用。說明使用不同pH值的ALA溶液進(jìn)行孵育，對(duì)ALA的透皮吸收和轉(zhuǎn)化影響顯著。分析原因，小分子以分子形態(tài)存在時(shí)，其透皮吸收最大，以離子形態(tài)存在時(shí)，其透皮吸收較差。在pH值為4.0時(shí)，ALA以分子形態(tài)存在，透皮吸收最大，因此其熒光強(qiáng)度最大；在pH值為7.0和10.0時(shí)，部分ALA以離子形態(tài)存在，導(dǎo)致透皮吸收減少，透皮速率下降，即在較低pH值時(shí)，ALA具有較好的透皮吸收，但考慮皮膚的承受情況，制劑的pH值不宜過低，以4.0為宜。本研究結(jié)果角質(zhì)軟化劑水楊酸的加入，降低了角質(zhì)層的密度，減弱了角質(zhì)層的屏障作用，有利于ALA的穿透，增加了ALA的透皮吸收和生物利用度。

1 楊 昀，馬 炯，王玉華，等.5-氨基酮戊酸磷脂復(fù)合物的研究〔J〕.中國藥學(xué)雜志，2007;42(1)：36-9.

2 肖 虹.ALA光動(dòng)力診斷與光動(dòng)力治療惡性腦腫瘤的療效及機(jī)制研究〔D〕.重慶：第三軍醫(yī)大學(xué)，2009.

3 黃祖芳，陳 榮，李永增，等.DHL細(xì)胞中5-ALA代謝PpIX的雙光子熒光光譜〔J〕.光譜學(xué)與光譜分析，2008;28(11)：2636-9.

4 王杭州.5-ALA介導(dǎo)的光動(dòng)力對(duì)體內(nèi)外C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞殺傷作用研究〔D〕.南京：東南大學(xué)，2007.

5 陳冠楠，黃祖芳，陳 榮，等.DHL細(xì)胞中5-ALA代謝PpⅨ的定位分析〔J〕.光學(xué)學(xué)報(bào)，2009;29(6)：1605-8.

6 謝 姍，李康英，劉宏偉，等.ALA-PDT對(duì)健康人及銀屑病患者PBMCs生物效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.應(yīng)用激光，2011;31(6)：518-23.

〔2017-04-25修回〕

(編輯 滕欣航)

廣東省醫(yī)學(xué)科研課題立項(xiàng)(A2011340)；廣州市2014年度花都區(qū)第一批科技計(jì)劃項(xiàng)目(HD14CXY001)

佘文莉(1972-)，女，主管護(hù)師，主要從事整形美容激光方面研究。

R39

A

1005-9202(2017)14-3409-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.14.012