楊 慧,張昌軍* ,刁紅錄

(1武漢大學中南醫(yī)院婦產(chǎn)科,武漢 430071;2湖北醫(yī)藥學院附屬人民醫(yī)院生殖醫(yī)學中心;*通訊作者,E-mail:542690700@qq.com)

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SMYD2在反復自然流產(chǎn)患者子宮內(nèi)膜蛻膜化中的作用及機制

楊 慧1,2,張昌軍1,2*,刁紅錄2

(1武漢大學中南醫(yī)院婦產(chǎn)科,武漢 430071;2湖北醫(yī)藥學院附屬人民醫(yī)院生殖醫(yī)學中心;*通訊作者,E-mail:542690700@qq.com)

目的 探討SMYD2在反復自然流產(chǎn)(RSA)患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞和蛻膜化細胞中的表達及其對P53、LIF的調(diào)節(jié)作用。 方法 將正常人和RSA患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞進行體外誘導蛻膜化處理,并分為空白組、蛻膜化組、蛻膜化+抑制劑組,采用real-time PCR檢測LIF、SMYD2、TRP53 mRNA,細胞免疫化學法檢測SMYD2、P53、P-P53蛋白在子宮內(nèi)膜蛻膜化細胞的表達及SMYD2特異性抑制劑AZ505對其表達的影響。 結(jié)果 在正常人和RSA患者蛻膜化組中,SMYD2、TRP53 mRNA表達均較空白組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在正常人和RSA患者蛻膜化+抑制劑組中,LIF mRNA的表達比蛻膜化組增加,TRP53 mRNA的表達比蛻膜化組降低,且差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),而SMYD2 mRNA與蛻膜化組差異無統(tǒng)計學意義。細胞免疫化學結(jié)果可見,正常人和RSA患者蛻膜化組細胞中SMYD2、 P53和P-P53蛋白信號均較空白組減弱,SMYD2抑制劑AZ505組正常人和RSA患者細胞中SMYD2、P53和P-P53蛋白信號均較蛻膜化組減弱。 結(jié)論 SMYD2通過對P53和LIF的調(diào)節(jié)作用而參與反復自然流產(chǎn)患者子宮內(nèi)膜蛻膜化過程。

SMYD2； P53； LIF； 反復自然流產(chǎn)； 子宮內(nèi)膜； 蛻膜化

反復自然流產(chǎn)(recurrent spontaneous abortion,RSA)是指與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生3次或3次以上自然流產(chǎn)的現(xiàn)象[1],是一種常見的妊娠并發(fā)癥。反復自然流產(chǎn)的病因非常復雜,包括胚胎染色體異常、免疫功能異常、內(nèi)分泌異常,以及感染、子宮解剖異常和血栓前狀態(tài)等。然而,臨床上仍有超過55% RSA患者不能明確病因[2]。有研究表明,RSA患者子宮內(nèi)膜具有“超容受性”,其子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞蛻膜化過程紊亂,致使子宮內(nèi)膜種植窗期延長并且對胚胎的選擇能力受損[3],從而可能發(fā)生非優(yōu)質(zhì)胚胎植入影響妊娠結(jié)局。

組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶(SET and MYND domain containing protein 2,SMYD2)是SMYD家族的一個成員,它既可以甲基化多種組蛋白也可以甲基化非組蛋白,從而發(fā)揮多種生物學功能包括染色質(zhì)重塑、轉(zhuǎn)錄、信號轉(zhuǎn)導和細胞周期調(diào)控。SMYD2在正常、病變以及腫瘤組織中都有表達,與各個系統(tǒng)的發(fā)育、腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。目前,國內(nèi)外尚未有關于SMYD2和反復自然流產(chǎn)關系的研究報道,本研究主要探討SMYD2在RSA患者子宮內(nèi)膜蛻膜化過程中的作用及其機制。

1 材料方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 兔抗SMYD2抗體、鼠抗P53抗體、兔抗P-P53抗體(Abcam公司),山羊抗兔熒光二抗488、抗鼠熒光二抗488、Trizol、反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Invitrogen公司),FAST SYBR-Green(Applied biosystems公司),SMYD2特異性抑制劑AZ505(MedChem Express公司),DMEM/HIGH GLUCOSE培養(yǎng)基、胰蛋白酶 (HyClone公司),胎牛血清(FBS)、1×HBSS緩沖液(Gibco公司),膠原酶Ⅰ(Roche公司),青鏈霉素(P/G)(Thermo fisher公司),17β-雌二醇(E2)、孕酮(P4)、環(huán)磷腺苷(cAMP)(Sigma公司)。

1.1.2 實驗材料 所有人子宮內(nèi)膜標本在湖北醫(yī)藥學院附屬十堰市人民醫(yī)院生殖醫(yī)學中心通過宮腔鏡獲得,對照組選擇由于輸卵管因素導致不孕的正常人,實驗組選擇反復自然流產(chǎn)3次的患者。所有研究對象月經(jīng)周期正常,無內(nèi)分泌、免疫和代謝疾病,沒有激素相關疾病并且收集標本前3個月未接受過激素治療。患者知情同意,研究符合倫理學并經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 實驗細胞 為探究SMYD2在子宮內(nèi)膜蛻膜化過程中的作用,以及其是否依賴于與P53形成信號通路而發(fā)揮作用,采用real-time PCR和免疫細胞化學法檢測SMYD2、TRP53 mRNA和蛋白在正常人和RSA患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞和蛻膜化細胞中的表達規(guī)律和變化。正常人和RSA患者細胞均設有空白組、蛻膜化組、蛻膜化+抑制劑組,通過檢測蛻膜化標志分子催乳素(prolactin,PRL)在正常人和RSA患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞蛻膜化過程中mRNA的表達情況驗證本實驗蛻膜化處理是否成功。通過檢測蛻膜化標志分子PRL mRNA和子宮內(nèi)膜容受性標志分子LIF mRNA的表達情況驗證SMYD2特異性抑制劑AZ505對蛻膜化的影響。

分組及處理:① 空白組(control):6孔板中加入2 ml/孔2%FBS/DMEM培養(yǎng)基,24孔板中加入1 ml/孔2% FBS/DMEM培養(yǎng)基。②蛻膜化組(E+P+C):6孔板中加入2 ml/孔含10 nmol/L E2、1 μmol/L P4和0.5 mmol/L cAMP的2% FBS/DMEM,24孔板中加入1 ml/孔以上培養(yǎng)基。③蛻膜化+抑制劑組(EPC+AZ505):即為在蛻膜化的基礎上加入1 μmol/L SMYD2特異性抑制劑AZ505。

1.2.2 子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞(endometrial stromal cell,ESC)原代培養(yǎng) 將子宮內(nèi)膜組織分離成小段,用含P/G的1×HBSS 清洗3次,轉(zhuǎn)入盛有膠原酶Ⅰ溶液的離心管中,37 ℃水浴搖床中消化1 h,用10%FBS/HBSS終止消化,吹打使細胞分散成單個,然后用200、400目篩網(wǎng)過濾,按5×105/ml密度接種細胞,用含P/G的10% FBS/DMEM培養(yǎng),培養(yǎng)到第6代開始相關檢測和藥物處理。

1.2.3 子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞蛻膜化處理 細胞培養(yǎng)至第5代后以3×105/ml、1.5×105/ml密度接種于6孔板和放有爬片的24孔板,為第6代細胞,待細胞長至80%-90%時用雌、孕激素和環(huán)磷腺苷聯(lián)合誘導內(nèi)膜基質(zhì)細胞蛻膜化,即用含10 nmol/L E2、1 μmol/L P4和0.5 mmol/L cAMP的2% FBS/DMEM培養(yǎng)細胞;蛻膜化+抑制劑組即為在以上蛻膜化的基礎上加入 SMYD2特異性抑制劑AZ505,其工作濃度為1 μmol/L。記錄加入培養(yǎng)基的時間,記為0 h,每48 h更換一次培養(yǎng)基?？瞻捉M和蛻膜化組細胞在0,48,96,144 h用Trizol 1 ml/孔收取6孔板細胞待提取RNA進行相關基因表達檢測,蛻膜化+抑制劑組只收取144 h細胞。24孔板細胞爬片在144 h用于相關蛋白表達檢測。

1.2.4 免疫細胞化學法 24孔板細胞爬片設空白組、蛻膜化組、蛻膜化+抑制劑組各3個孔,細胞處理后培養(yǎng)至144 h時進行實驗。用1×PBS 1 ml/孔洗3次,5 min/次。4%多聚甲醛溶液1 ml/孔固定20 min,1×PBS洗3次,5 min/次。0.2% Triton X-100溶液700 μl/孔室溫20 min,1×PBS洗3次,5 min/次。1% BSA溶液500 μl/孔封閉,37 ℃ 孵育1 h。一抗孵育:以SMYD2抗體為例,取干凈載玻片,在載玻片上貼封口膜并滴加3滴1 ∶250兔抗SMYD2抗體,將空白組、蛻膜化組、蛻膜化+抑制劑組爬片細胞面分別扣蓋在一抗液滴上,4 ℃過夜。以上述方法加1 ∶200兔抗P-P53抗體、1 ∶50鼠抗P53抗體。將爬片放入新的24孔板中,1×PBS洗3次,5 min/次。二抗孵育:在載玻片上貼封口膜并滴加與兔抗SMYD2抗體、兔抗P-P53抗體對應的山羊抗兔熒光二抗488稀釋液(1 ∶400),與鼠抗P53抗體對應的山羊抗鼠熒光二抗488稀釋液(1 ∶400),將對應的爬片細胞面扣蓋在二抗液滴上室溫孵育1 h。1×PBS洗3次,5 min/次。在新載玻片上滴加5 μl含有DAPI的熒光介質(zhì),將爬片細胞面扣蓋在液滴上進行封片,熒光顯微鏡觀察并照相。

1.2.5 real-time PCR 提取子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞和蛻膜化細胞RNA,反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生cDNA,然后用FAST SYBR-Green進行PCR反應。由于甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)在組織中的表達相對恒定,故用GAPDH作為內(nèi)參進行校準。PCR反應條件為95 ℃變性20 s;95 ℃退火1 s;60 ℃延伸20 s,擴增40個循環(huán)。用標準曲線法對real-time PCR結(jié)果進行絕對定量統(tǒng)計。所用引物序列見表1。

表1 引物序列表

Table 1 Primer sequences

引物名稱引物序列 SMYD2上游序列:CCTCGGAGACTGTAAGACTAA下游序列:GCTTGATTTCCTGTACAGCTC P53上游序列:TCCTCAGCATCTTATCCGAG下游序列:AGTGGTTTCTTCTTTGGCTG GAPDH上游序列:GAGATCCCTCCAAAATCAAG下游序列:CTGATGATCTTGAGGCTGTT PRL上游序列:CCTGTCCCACTACATCCATA下游序列:CTCTAGAAGCCGTTTGGTTT LIF上游序列:CAGCCCATAATGAAGGTCTT下游序列:CAACTGGCACAGCTCAAT

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 SMYD2、TRP53 mRNA和蛋白在子宮內(nèi)膜蛻膜化細胞中的表達

通過檢測蛻膜化標志分子PRL在正常人和RSA患者ESC蛻膜化48,96,144 h 時mRNA的表達情況,可見它在蛻膜化組均比空白組表達明顯增高(P<0.05,見圖1A、1D),說明本實驗蛻膜化處理是成功的。

real-time PCR結(jié)果可見,在正常人48,96,144 h蛻膜化組SMYD2、TRP53 mRNA均比空白組表達降低(P<0.05,見圖1B、1C)。在RSA患者,SMYD2 mRNA在蛻膜化48,96,144 h時比空白組表達降低(P<0.05,見圖1E),TRP53 mRNA在蛻膜化48,144 h時比空白組表達降低(P<0.05),但在96 h時蛻膜化組與空白組差異無統(tǒng)計學意義(見圖1F)。SMYD2和TRP53 mRNA在正常人和RSA患者蛻膜化細胞中表達趨勢基本一致。

A-C.正常人PRL mRNA,SMYD2 mRNA,TRP53 mRNA表達;D-F.反復自然流產(chǎn)患者PRL mRNA,SMYD2 mRNA,TRP53 mRNA表達;con：空白組; E+P+C：蛻膜化組(E：雌二醇,P：孕酮,C：環(huán)磷腺苷cAMP);與空白組(con)比較,*P<0.05圖1 子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞蛻膜化過程中PRL、SMYD2和TRP53 mRNA表達Figure 1 The expression of PRL,SMYD2 and TRP53 mRNA in the process of decidualization of ESC

免疫細胞化學結(jié)果顯示,在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞和蛻膜化細胞中均檢測到較強信號的P53、P-P53、SMYD2。P53蛋白表達在細胞質(zhì)中,P-P53蛋白表達在細胞核,且只在細胞核的特定位置表達,SMYD2蛋白在細胞質(zhì)和細胞核中均有表達。雌、孕激素聯(lián)合環(huán)磷腺苷誘導子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞發(fā)生蛻膜化后,細胞由長梭形變圓并出現(xiàn)多核細胞。在正常人子宮內(nèi)膜蛻膜化細胞中,P53蛋白信號較空白組稍微減弱(見圖2A),P-P53和SMYD2蛋白信號較空白組明顯減弱(見圖2B,2C);RSA患者P53蛋白信號較空白組稍微減弱(見圖2D),P-P53和SMYD2蛋白信號較空白組明顯減弱(見圖2E,2F)。P53、P-P53和SMYD2蛋白變化趨勢在正常人和RSA患者子宮內(nèi)膜蛻膜化細胞中基本一致。

A1,B1,C1.正常人空白組細胞；A2,B2,C2.正常人蛻膜化組細胞；A3,C2,C3.正常人蛻膜化+抑制劑組細胞；D1,E1,F1.RSA患者空白組細胞；D2,E2,F2.RSA患者蛻膜化組細胞；D3,E3,F3.RSA患者蛻膜化+抑制劑組細胞(藍色：DAPI所染細胞核，綠色：蛋白質(zhì)免疫熒光信號);P53蛋白表達在正常人和RSA患者基質(zhì)細胞胞質(zhì)中，P-P53蛋白表達在正常人和RSA患者基質(zhì)細胞胞核中，SMYD2蛋白表達在正常人和RSA患者基質(zhì)細胞胞質(zhì)和胞核中；con：空白組 E+P+C：蛻膜化組 EPC + AZ505：蛻膜化+抑制劑組圖2 P53、P-P53和SMYD2蛋白在正常人和RSA患者各組細胞中的表達 (×200)Figure 2 The expression of SMYD2,P53 and P-P53 protein in decidualized cells of normal controls and RSA patients by immunofluorescence assay (×200)

2.2 SMYD2特異性抑制劑AZ505對子宮內(nèi)膜蛻膜化細胞中SMYD2、TRP53 mRNA和蛋白表達的影響

為進一步研究SMYD2在子宮內(nèi)膜蛻膜化中的作用,本實驗在對ESC蛻膜化處理的同時加入SMYD2特異性抑制劑AZ505 1 μmol/L。為驗證抑制劑AZ505對蛻膜化的影響,本研究檢測了蛻膜化標志分子PRL mRNA和子宮內(nèi)膜容受性標志分子LIF mRNA的表達情況。用AZ505和EPC同時處理(AZ505+EPC)后,正常人和RSA患者細胞中PRL mRNA的表達均較蛻膜化細胞(EPC處理)中降低(P<0.05，見圖3A);正常人和RSA患者LIF mRNA的表達較蛻膜化細胞中增高(P<0.05，見圖3B)。

real-time PCR結(jié)果顯示,正常人和RSA患者細胞用抑制劑AZ505和EPC處理后,SMYD2 mRNA的表達較蛻膜化細胞無明顯差異(見圖3C);而TRP53 mRNA的表達較蛻膜化細胞降低(P<0.05，見圖3D)。

細胞免疫化學結(jié)果顯示,用抑制劑AZ505和EPC同時處理細胞后,細胞形態(tài)較蛻膜化細胞并無明顯改變。在正常人和RSA患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞蛻膜化過程中加入抑制劑AZ505后,P53蛋白、P-P53蛋白和SMYD2蛋白信號較蛻膜化組減弱,尤其是SMYD2蛋白,在正常人細胞核中幾乎看不到熒光信號,在RSA患者細胞核中只有微弱表達(見圖2)。

con：空白組; E+P+C：蛻膜化組; EPC + AZ505：蛻膜化+抑制劑組(E：雌二醇; P：孕酮;C：環(huán)磷腺苷cAMP;AZ505：SMYD2特異性抑制劑)；與空白組(con)比較，*P<0.05;與E+P+C組比較，#P<0.05圖3 SMYD2特異性抑制劑AZ505對子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞蛻膜化中PRL、LIF、SMYD2和TRP53 mRNA表達的影響Figure 3 Effect of inhibitor AZ505 on the expression of LIF,SMYD2 and TRP53 mRNA in the decidualization of endometrial stromal cells

3 討論

反復自然流產(chǎn)是一種常見的妊娠并發(fā)癥,雖然定義為與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生3次或3次以上自然流產(chǎn)的現(xiàn)象,但近年多數(shù)專家認為連續(xù)發(fā)生2次流產(chǎn)的患者再次發(fā)生流產(chǎn)的機率與3次者相近。由于RSA病因非常復雜,且仍有超過55%患者病因不明,這使得臨床治療非常艱難。有研究表明,RSA患者與正常人相比子宮內(nèi)膜具有“超容受性”[3],子宮內(nèi)膜種植窗期延長,致使非優(yōu)質(zhì)胚胎植入從而發(fā)生流產(chǎn)。

子宮內(nèi)膜蛻膜化對胚胎著床和妊娠維持至關重要,蛻膜化的破壞不僅可以導致著床失敗和早期流產(chǎn),而且在整個妊娠期都可能會引起不利結(jié)局[4]。研究表明,小鼠子宮缺失P53基因會使蛻膜細胞脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)被破壞,從而致使蛻膜細胞過早衰老并引起自發(fā)早產(chǎn)[5]。

目前,關于SMYD2的研究主要集中在腫瘤和各系統(tǒng)的發(fā)育等方面。在賴氨酸殘基370甲基化p53會抑制其活性,SMYD2通過抑制p53的腫瘤抑制作用而被認為具有癌基因的功能,它是癌癥預后不良的一個重要因素[6,7]。研究表明,P53通路中的單核苷酸多態(tài)性(SNP)與不孕有關。體外受精(invitrofertilization,IVF)的不孕患者中,在第72位密碼子編碼脯氨酸的p53等位基因(p53 P72)比編碼精氨酸的p53等位基因(p53 R72)明顯豐富,對于35歲以下的IVF患者,P72是著床失敗的危險因子,攜帶有同型純合子p53 P72基因的患者妊娠率比至少攜帶一個p53 R72等位基因的患者明顯降低[8]。此外,在利用輔助生殖技術(shù)助孕且有反復種植失敗和反復流產(chǎn)病史的不孕患者中普遍存在p53 P72基因[9]。LIF是胚胎植入的關鍵因子,與子宮內(nèi)膜容受性密切相關。胚胎著床時子宮內(nèi)LIF瞬時表達升高,敲除LIF的小鼠會致使胚胎著床失敗[10]。P53通過調(diào)節(jié)子宮內(nèi)LIF的表達而與哺乳動物生殖密切相關,有研究表明,p53-/-的小鼠由于LIF水平下降而使胚胎不能著床,注射外源性LIF后胚胎可以著床[11]。

本研究發(fā)現(xiàn),SMYD2和TRP53 mRNA在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞蛻膜化過程中表達下降。此外,在體外誘導子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞蛻膜化的同時應用SMYD2特異性抑制AZ505來進一步了解SMYD2在蛻膜化過程中的作用,實驗結(jié)果顯示,應用抑制劑后,蛻膜化標志分子PRL mRNA表達降低,這說明SMYD2可以影響子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞發(fā)生蛻膜化。然而,抑制劑AZ505并不影響SMYD2 mRNA的表達,細胞化學免疫熒光結(jié)果可見,應用AZ505后SMYD2蛋白信號減弱,尤其是細胞核中的信號減弱更明顯,這說明AZ505并不影響SMYD2的轉(zhuǎn)錄水平,而是通過抑制其蛋白的表達而發(fā)揮生物學功能。此外,應用AZ505后LIF mRNA表達升高,TRP53 mRNA和蛋白表達下降,說明在蛻膜化過程中SMYD2對LIF和P53有調(diào)節(jié)作用,它可能是通過這種調(diào)節(jié)而在蛻膜化中發(fā)揮作用。

我們通過檢測SMYD2和P53在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞蛻膜化過程中的表達以及應用特異性抑制劑AZ505后SMYD2、TRP53 mRNA和蛋白以及LIF mRNA的改變,推測SMYD2在反復自然流產(chǎn)患者子宮內(nèi)膜蛻膜化過程中具有重要作用,而且是通過調(diào)節(jié)P53和LIF的表達而發(fā)揮作用,但其具體作用機制并不清楚,對其信號通路的進一步研究將為反復自然流產(chǎn)患者不良妊娠結(jié)局的原因提供新的思路,為臨床改善妊娠結(jié)局提供新的治療靶點。

[1] 肖世金,趙愛民.復發(fā)性流產(chǎn)病因?qū)W研究進展[J].中國實用婦科與產(chǎn)科雜志,2014,30(1):41-45.

[2] Mekinian A,Cohen J,Alijotas-Reig J,etal.Unexplained recurrent miscarriage and recurrent implantation failure:is there a place for immunomodulation[J]? Am J Reprod Immunol,2016,76(1):8-28.

[3] Salker M,Teklenburg G,Molokhia M,etal.Natural selection of human embryos:impaired decidualization of endometrium disables embryo-maternal interactions and causes recurrent pregnancy loss[J].PLoS One,2010,5(4):e10287.

[4] Kommagani R,Szwarc MM,Vasquez YM,etal.The promyelocytic leukemia zinc finger transcription factor is critical for human endometrial stromal cell decidualization[J].PLoS Genet,2016,12(4):e1005937.

[5] Lanekoff I,Cha J,Kyle JE,etal.Trp53 deficient mice predisposed to preterm birth display region-specific lipid alterations at the embryo implantation site[J].Sci Rep,2016,6:33023.

[6] Huang J,Perez-Burgos L,Placek BJ,etal.Repression of p53 activity by Smyd2-mediated Methylation[J].Nature,2006,444 (7119):629-632.

[7] Komatsu S,Ichikawa D,Hirajima S,etal.Overexpression of SMYD2 contributes to malignant outcome in gastric cancer[J].Br J Cancer,2015,112(2):357-364.

[8] Kang HJ,Feng Z,Sun Y,etal.Single-nucleotide polymorphisms in the p53 pathway regulate fertility in humans[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2009,106(24):9761-9766.

[9] Lledo B,Turienzo A,Ortiz JA,etal.Negative effect of P72 polymorphism on p53 gene in IVF outcome in patients with repeated implantation failure and pregnancy loss[J].J Assist Reprod Genet,2014,31(2):169-172.

[10] Chen JR,Cheng JG,Shatzer T,etal.Leukemia inhibitory factor can substitute for nidatory estrogen and is essential to inducing a receptive uterus for implantation but is not essential for subsequent embryogenesis[J].Endocrinology,2000,141 (12):4365-4372.

[11] Hu W,Feng Z,Teresky AK,etal.p53 regulates maternal reproduction through LIF[J].Nature,2007,450(7170):721-724.

Role of SMYD2 in endometrial decidualization of recurrent spontaneous abortion patients and its mechanism

YANG Hui1,2，ZHANG Changjun1,2，DIAO Honglu2

(1DepartmentofGynaecologyandObstetrics,ZhongnanHospitalofWuhanUniversity,Wuhan430071,China；2ReproductiveMedicineCenter,RenminHospitalofHubeiUniversityofMedicine;*Correspondingauthor,E-mail:542690700@qq.com)

ObjectiveTo investigate the expression of SMYD2 in stromal cells and decidual cells of patients with recurrent spontaneous abortion(RSA),and its regulation effect on P53 and LIF expression.MethodsThe endometrial stromal cells of normal and RSA patients was decidualizedinvitro,and the cells were divided into blank control group,decidualization group and decidualization+inhibitor group.Real-time PCR and immunocytochemistry were used to observe the mRNA and protein expression of LIF,SMYD2,P53 in endometrial decidual cells and the effect of SMYD2-specific inhibitor AZ505 on the expression of SMYD2,P53 and LIF.ResultsIn normal and RSA patients,the expression of SMYD2 and TRP53 mRNA in decidualization group was lower than that in blank control group(P<0.05).The level of LIF mRNA was significantly higher in normal controls and RSA patients in decidualization+inhibitor group than that in decidualization group,and the TRP53 mRNA level was lower(P<0.05),however,the level of SMYD2 mRNA showed no statistical difference between two groups.Immunocytochemistry results showed that the SMYD2,P53 and P-P53 protein signals were weaker in decidual cells of normal controls and RSA patients in decidualization group than in blank control group,and the expression of SMYD2,P53 and P-P53 protein in normal and RSA patients was weaker in decidualization+inhibitor group than that in decidualization group.ConclusionSMYD2 may be involved in the process of decidualization of RSA patients by regulating the expression of P53 and LIF.

SMYD2； P53； LIF； recurrent spontaneous abortion； endometrium； decidualization

湖北省自然科學基金資助項目(2015CFB543);湖北醫(yī)藥學院創(chuàng)新團隊基金資助項目(2014CXX03,FDFR201604);湖北省重點學科建設和默克CREATE創(chuàng)新基金資助項目

楊慧,女,1988-12生,碩士,E-mail:1184404059@qq.com

2016-12-20

R711.71

A

1007-6611(2017)04-0337-06

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.04.008