趙 茜,竇常勝

(皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 兒科，安徽 蕪湖 241001)

川崎病患兒血漿VEGF、ES的表達(dá)水平及臨床意義

趙 茜,竇常勝

(皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 兒科，安徽 蕪湖 241001)

目的：探討川崎病(KD)患兒血漿血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及內(nèi)皮抑素(ES)的水平變化與冠狀動(dòng)脈損傷(CAL)的關(guān)系。方法：根據(jù)超聲心動(dòng)圖結(jié)果將35例KD患兒分為冠狀動(dòng)脈損傷(CAL)組(14例)與無(wú)冠狀動(dòng)脈損傷(NCAL)組(21例)，并分別選取40例同期住院的支氣管肺炎患兒及門(mén)診體檢健康兒童作為病例對(duì)照組和健康對(duì)照組，采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)各組患兒VEGF及ES水平。結(jié)果：CAL和NCAL組治療前、后血漿VEGF、ES水平均高于健康對(duì)照組和病例對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中CAL組VEGF、ES水平高于NCAL組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后CAL組和NCAL組VEGF、ES水平較治療前下降，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CAL組VEGF/ES的比值高于NCAL組、健康對(duì)照組和病例對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而NCAL組與健康對(duì)照組和病例對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后CAL和NCAL兩組間VEGF/ES比值的比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：高表達(dá)的VEGF、ES及VEGF/ES比例的失衡可能參與KD冠狀動(dòng)脈損傷的發(fā)病機(jī)制。

川崎病；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；內(nèi)皮抑素

川崎病(Kawasaki disease，KD)曾被稱(chēng)為皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征(mucocutaneous lymph node syndrome,MCLS),是一種急性發(fā)熱出疹性小兒免疫系統(tǒng)疾病，其病理學(xué)特點(diǎn)是累及全身中小動(dòng)脈的炎癥性改變，由于可并發(fā)嚴(yán)重心血管損傷并致患兒死亡而逐漸受到人們關(guān)注[1]。該病病因至今未明，目前主要依靠臨床表現(xiàn)進(jìn)行排他性診斷，相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的檢測(cè)雖不具有特異性意義，但卻可以輔助KD的診斷。本文通過(guò)檢測(cè)患兒血漿血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、內(nèi)皮抑素(endostatin，ES)的表達(dá)水平探討其在KD發(fā)病中的意義及其與冠狀動(dòng)脈損傷(coronary artery lesion，CAL)的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料及方法

1.1 研究對(duì)象 研究對(duì)象來(lái)自2014年12月～2016年6月弋磯山醫(yī)院兒科收治的35例KD患兒，所有患兒均符合日本KD研究委員會(huì)新修訂的KD診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。其中男性20例，女性15例，年齡9個(gè)月～7歲，平均年齡(4.24±1.56)歲?；純壕行呐K彩色多普勒超聲檢測(cè)，根據(jù)冠狀動(dòng)脈有無(wú)病變，分為冠狀動(dòng)脈損傷(coronary artery lesion，CAL)組和無(wú)冠狀動(dòng)脈損傷(non-coronary artery lesion，NCAL)組。

病例對(duì)照組：選取40例同期住院的支氣管肺炎患兒，其中男性19例，女性21例，年齡1～7歲，平均年齡(4.21±1.59)歲。

健康對(duì)照組：選取40例門(mén)診體檢健康兒童，其中男性23例，女性17例，年齡1～8歲，平均年齡(4.41±2.07)歲。各組年齡及性別構(gòu)成差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 所有確診為KD的患兒均在入院24 h內(nèi)，丙種球蛋白(IVIG)治療前于清晨空腹采集靜脈血2 mL，3000 r/min離心15 min，留取上清液， -80℃超低溫冰箱保存待測(cè)。所有患兒均給予IVIG(2 g/kg)及阿司匹林治療，4周后再次于同樣條件下采集靜脈血2 mL待測(cè)。病例對(duì)照組及健康對(duì)照組采用相同方法檢測(cè)。VEGF及ES均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)，試劑盒由美國(guó)R&D公司提供，所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 各組患兒一般資料 在35例KD患兒中，CAL組 14例，男8例，女6例，年齡9個(gè)月～7歲，平均年齡(4.19±1.67)歲；NCAL組21例，男12例，女9例，年齡1～7.5歲，平均年齡(4.26±2.19)歲，與病例對(duì)照組和健康對(duì)照組比較，各組年齡及性別構(gòu)成差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 KD患兒治療前、后血漿VEGF、ES水平及VEGF/ES比值的變化 CAL和NCAL組治療前、后血漿VEGF、ES水平均高于健康對(duì)照組和病例對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中CAL組VEGF、ES水平高于NCAL組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后CAL組和NCAL組VEGF、ES水平較治療前下降，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CAL組VEGF/ES的比值高于NCAL組、健康對(duì)照組和病例對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而NCAL組與健康對(duì)照組和病例對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后CAL和NCAL兩組間VEGF/ES比值的比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 KD患兒治療前、后血漿VEGF、ES水平及VEGF/ES比值

分組nVEGF/(pg/mL)治療前治療后配對(duì)tES/(ng/mL)治療前治療后配對(duì)tVEGF/ES治療前治療后配對(duì)tCAL組14213.36±19.52abc131.92±34.4910.77d37.29±2.39abc6.14d6.14d5.72±0.33abc4.18±0.2315.28dNCAL組21169.84±27.94ab98.40±11.6912.76d31.77±3.72ab9.07d9.07d5.30±0.43ab3.94±0.558.64d病例對(duì)照組4021.28±3.3911.14±1.821.92±0.11健康對(duì)照組4020.64±2.6610.76±2.301.97±0.30F(t)1188.9910.05709.668.85364.221.78P<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05>0.05

注：a與病例對(duì)照組比較，P<0.05；b與健康對(duì)照組比較，P<0.05；c與NCAL組比較，P<0.05；d治療前后比較，P<0.05。

3 討論

KD于1967年由日本川崎富作首次報(bào)道，是一種免疫介導(dǎo)的血管炎性病變，由于冠狀動(dòng)脈病變發(fā)生率高，未經(jīng)治療的患兒20%～25%可并發(fā)嚴(yán)重心血管損傷，早期診斷及治療尤為重要。在KD急性期，除常規(guī)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)CRP、ESR、PLT、外周血白細(xì)胞等顯著增高，支持KD診斷之外，多種細(xì)胞因子及炎性介質(zhì)都被證實(shí)參與KD的發(fā)病，國(guó)外學(xué)者在KD動(dòng)物模型中證實(shí)MMPs水平的上調(diào)是導(dǎo)致KD冠狀動(dòng)脈動(dòng)脈損傷的重要因素之一[3]。Oharaseki[4]通過(guò)小鼠KD血管炎模型證實(shí)TNF-α在血管炎的發(fā)展中起著重要作用。此外，內(nèi)皮素(ET) 和一氧化氮(NO)[5]、血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)[6]都被發(fā)現(xiàn)參與血管內(nèi)皮損傷，從而輔助KD的診斷。

本文的結(jié)果發(fā)現(xiàn)：KD患兒CAL組和NCAL組治療前血漿VEGF水平均高于健康對(duì)照組和病例對(duì)照組，且CAL組VEGF水平高于NCAL組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示KD患兒血漿VEGF水平升高越顯著并發(fā)冠狀動(dòng)脈損傷的可能越大。VEGF作為一類(lèi)多功能細(xì)胞因子，能特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，使其產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶，破壞血管壁完整性，引起血管通透性增加，從而導(dǎo)致血管炎性改變[7]。它還能刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮和超氧化物，直接損傷血管內(nèi)皮[8]。此外，在Ueno等[9]的研究中也證實(shí)：KD血管炎癥的急性期，血漿VEGF水平異常增高的患兒并發(fā)冠脈損傷可能更明顯。而后Breunis等[10]提出血漿VEGF含量增高會(huì)介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，從而導(dǎo)致動(dòng)脈瘤的發(fā)生，表明VEGF表達(dá)的變化可能參與了KD血管損傷的病理過(guò)程。

ES是1997年O′Reilly 等從培養(yǎng)的小鼠內(nèi)皮細(xì)胞瘤(EOMA) 上清中分離純化的一種能特異性抑制血管生成的負(fù)性調(diào)節(jié)因子[11]，它能通過(guò)阻斷KDR/F1K-1酪氨酸的磷酸化阻斷VEGF介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)，從而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)周期阻滯和凋亡[12]。Ferrara等[13]在研究中發(fā)現(xiàn)，正常情況下，體內(nèi)VEGF 和ES 保持著動(dòng)態(tài)平衡，其相互作用能調(diào)節(jié)新生血管的程度，當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞受到炎癥因子刺激時(shí)，相互平衡被打破，內(nèi)皮細(xì)胞就會(huì)開(kāi)始活化，活化的內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)引起內(nèi)皮功能的紊亂和損傷，最終導(dǎo)致血管炎性改變。本文的結(jié)果同時(shí)也發(fā)現(xiàn)：CAL組和NCAL組治療前血漿ES水平均高于健康對(duì)照組和病例對(duì)照組，CAL組高于NCAL組，治療后CAL組和NCAL組ES水平較治療前下降，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CAL組VEGF/ES的比值高于NCAL組、健康對(duì)照組和病例對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而NCAL組與健康對(duì)照組和病例對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后CAL和NCAL兩組間VEGF/ES比值的比較無(wú)差異。有研究發(fā)現(xiàn)[14]，急性期KD患兒血漿VEGF升高程度較ES更加明顯，提示VEGF、ES的失衡可能參與了KD并發(fā)冠狀動(dòng)脈損傷的發(fā)病機(jī)制。

本文通過(guò)KD患兒血漿VEGF、ES表達(dá)水平檢測(cè)及VEGF/ES比值變化的研究，初步表明KD并發(fā)冠狀動(dòng)脈損傷患兒血漿VEGF、ES水平及VEGF/ES比值的顯著增高，提示異常增高的 VEGF、ES及VEGF、ES的失衡可能參與KD并發(fā)冠狀動(dòng)脈損傷的發(fā)病機(jī)制。但血漿VEGF、ES水平及VEGF/ES比值是否可作為川崎病乃至川崎病合并冠狀動(dòng)脈損傷的診斷指標(biāo)，尚缺乏有效的實(shí)驗(yàn)室證據(jù)，仍需進(jìn)一步的研究。

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Expression level and clinical significance of VEGF and ES in children with Kawasaki disease

ZHAO Qian,DOU Changsheng

Department of Pediatrics,The First Affiliated Hospital of Wannan Medical College,Wuhu 241001,China

Objective：To investigate the relationship between plasma vascular endothelial growth factor (VEGF) and endostatin (ES) expression level and severity of coronary artery lesion(CAL) in children with Kawasaki disease(KD).Methods:Thirty-five KD children were divided into CAL group (n=14) and non-coronary artery lesion(NCAL) group(n=21) by the results of echocardiography,and another 40 children with bronchial pneumonia treated on inpatient basis or undergoing physical examination on outpatient basis in the same periods were included as controls.All subjects

measurement of VEGF and ES level using enzyme-linked immunoassay.Results:Children in the CAL and NCAL groups had higher VEGF and ES levels before and after treatment than both case and healthy controls (P<0.05),and children in CAL had higher VEGF and ES level than those in the NCAL group(P<0.05).Decreased VEGF and ES levels were observed in the CAL and NCAL groups following treatment,and the difference was significant between groups(P<0.05).VEGF/ES ratio was higher in CAL group than the NCAL group,healthy control group and case control group(P<0.05),yet the difference was not significant between NCAL group and healthy control group and case control group(P>0.05).There was also no significant difference in VEGF/ES ratio between CAL and NCAL two group(P>0.05).Conclusion:High expression of VEGF,ES and VEGF/ES imbalance may be responsible for the coronary artery lesion in children with KD.

Kawasaki disease；vascular endothelial growth factor；endostatin

1002-0217(2017)04-0343-03

2016-10-05

趙 茜(1990-)，女，2014級(jí)碩士研究生，(電話)18895327942，(電子信箱)727764374@qq.com； 竇常勝，男，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，(電子信箱)samwuhu@163.com，通信作者。

R 725.4

A

10.3969/j.issn.1002-0217.2017.04.011