趙 海 軍

(河北省三河市醫(yī)院,河北 三河 065200)

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急性髓系白血病伴異常高表達CD7骨髓流式散點圖及形態(tài)學特征研究

趙 海 軍

(河北省三河市醫(yī)院,河北 三河 065200)

目的 研究異常高表達CD7的急性髓系白血病(AML)骨髓流式散點圖及形態(tài)學特征。方法 采用流式細胞儀對確診的AML患者白血病細胞進行免疫學表型分析，觀察其骨髓流式散點圖和形態(tài)學特征。

結果 9例CD7+AML患者中5例M2a，1例M3，2例M5b，1例M6。其抗原表達由高到低為CD33(100%)、CD13(100%)、CD117(100%)、CD38(88.9%)、MPO(88.9%)、CD64(77.8%)、CD34(77.8%)、HLA-DR(66.7%)、CD71(33.3%)、CD11b(22.2%)、CD15(22.2%)、CD25(22.2%),CD7+AML與CD7-AML在形態(tài)學上也有顯著不同。結論 在AML中不同F(xiàn)AB分型均可有CD7異常高表達，CD7+AML在流式細胞術、骨髓形態(tài)學等方面具有特殊之處。

急性髓系白血??；骨髓流式散點圖；CD7；流式細胞術

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是髓細胞系起源的白血病細胞在血液、骨髓和其他組織中克隆性增殖的白血病。AML的正確分型對白血病的診斷、治療方案的制訂、療效與預后的判斷十分重要。由于白血病細胞存在抗原表達異質性這一顯著特征，常出現(xiàn)某些抗原過弱表達、過度表達、不同系列抗原交叉表達及抗原跨階段表達等情況[1]，因此，單純依靠骨髓形態(tài)學特征診斷標準對白血病進行分型已經(jīng)不能滿足臨床需求，應在此基礎上結合免疫學分型，使白血病診斷和分類更加精確。我們采用流式細胞術(FCM)對我院收治的9例AML患者進行免疫學分型，觀察CD7在AML中的表達情況，并分析CD7陽性患者骨髓流式散點圖及其形態(tài)學特征。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2013-01—2014-12月三河市醫(yī)院血液內科收治AML初診住院患者42例，經(jīng)骨髓細胞免疫分析檢測，確診9例CD7+AML，其中男3例，女6例；年齡31～69歲，中位年齡47歲。所有患者抽骨髓及外周血涂片經(jīng)瑞氏染色后分類計數(shù)，按FAB分型標準進行細胞形態(tài)學分型。所有病例最終根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)、骨髓細胞形態(tài)學、細胞化學染色及免疫分型確診。

1.2 儀器與試劑

流式細胞儀:FACS-Calibur型，購自美國BD(Becton Dickinson)公司，功率15 MW，激光光源主要采用氬離子氣體激光器，2個激光光源波長分別為488 nm及635 nm。

單克隆抗體：美國BD公司產(chǎn)品，所選用單克隆抗體有CD5、CD7、CD3、CD19、CD14、CD64、CD34、CD38、HLA-DR、CD13、CD71、CD33、CD16、CD11b、CD61、CD62b、CD15、CD117、MPO、CD4、CD8、CD10、CD25、CD79a。

相關試劑：美國BD公司產(chǎn)品，所用熒光包括FITC(異硫氰酸熒光素)、PE(藻紅蛋白熒光素)和PerCP(葉綠素蛋白)。

1.3 熒光標記染色

采用直接免疫熒光標記法，所有病例于治療前抽取骨髓2.0～3.0 mL，EDTA抗凝，標記流式專用試管，每管加入FITC、PE和PercP標記的抗體，同時設定陰性對照(IgGl與IgG2)，各管加入抗凝骨髓，避光孵育15 min，溶血素2 mL裂解紅細胞10 min，離心、棄上清，PBS洗滌2次，加PBS液，上機檢測。胞漿抗原的檢測：標記膜抗原后加破膜劑10 min，PBS洗滌，加胞漿抗體，避光孵育15 min，PBS洗滌2次，加PBS液，上機檢測。

1.4 檢測與分析

標準熒光微球校準儀器，Cellquest軟件設置獲取條件，依次上樣獲取數(shù)據(jù)，每管獲取細胞數(shù)50 000個，以CD45/SSC雙參數(shù)二維散點圖設置方法進行免疫表型分析，計算幼稚細胞群中白血病細胞的表面標記量，抗原表達量≥20%判定為陽性。

1.5 骨髓細胞形態(tài)分析

采集初診患者骨髓穿刺液涂片，經(jīng)瑞氏-姬姆薩混合染色液染色，光學顯微鏡下進行細胞分類計數(shù)。

1.6 統(tǒng)計學方法

采用PEMS 3.1 for windows統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1 CD7+AML和CD7-AML患者一般情況比較

CD7+AML和CD7-AML患者年齡、性別、白細胞計數(shù)、血小板計數(shù)及骨髓原始細胞計數(shù)比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.2 FAB分型結果

9例CD7+AML患者中，5例M2a，1例M3，2例M5b，1例M6(圖1)。與同期確診的CD7-AML患者差異無統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

R2為白細胞裂孔細胞，橫、縱坐標分別表示細胞群相應抗體的熒光強度。

圖1 CD7+AML-M3患者免疫分型

2.3 免疫分型結果

9例CD7+AML患者抗原表達由高到低為CD33(100%)、CD13(100%)、CD117(100%)、CD38(88.9%)、MPO(88.9%)、CD64(77.8%)、CD34(77.8%)、HLA-DR(66.7%)、CD71(33.3%)、CD11b(22.2%)、CD15(22.2%)、CD25(22.2%)(表1)。

表1 CD7+AML患者FCM檢測免疫表性結果(n=9)

3 討 論

細胞表面抗原標志隨著細胞分化的不同時期可以有序地獲得或消失，使細胞表型呈現(xiàn)時相性特征。所以，各個發(fā)育階段細胞的抗原表達特點已成為細胞分類及亞群劃分和研究細胞分化成熟的有力指征[2]。CD7抗原是T細胞發(fā)育過程中的一個特征性標志，并用于T淋巴細胞白血病的診斷及其亞型的區(qū)分。隨著研究的深入，人們對CD7抗原有了新的認識，目前認為CD7抗原并非T淋巴細胞的特異性標志抗原，具有多項分化潛能的造血干細胞階段也可表達此抗原[3]。FCM免疫分型是應用單克隆抗體熒光標記技術對各種白血病細胞內外的特異性抗原進行精細的檢測和判定，具有很高的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，且能在短時間內對大量細胞進行定量分析，因而提高了白血病分型的準確率，彌補了FAB形態(tài)學分型的不足[4]。

檢索PubMed及萬方數(shù)據(jù)庫，目前尚無CD7+AML-M3報道，其余FAB各分型均有CD7+AML病例報道，提示細胞分化程度越低，CD7陽性表達率越高[5]。但本研究發(fā)現(xiàn)，CD7在AML的FAB各分型中均有不同程度的表達，本組9例CD7+AML患者中包括5例AML-M2a，2例AML-M5b，1例AML-M3及1例AML-M6，我們認為可能與不同地域、不同人種、單抗的組合選擇及檢測病例的多少有關。髓系相關抗原中最特異和最敏感的指標有CD33、CD13和CD117，本組病例中CD33、CD13、CD117的陽性表達率均為100%，其他髓系相關抗原CD38、MPO的陽性表達率為88.9%，CD64、CD34的陽性表達率為77.8%，HLA-DR的陽性表達率為66.7%。

本研究資料顯示，CD7+AML患者骨髓形態(tài)學與傳統(tǒng)CD7-AML患者骨髓形態(tài)學相比存在一定異質性。觀察1例CD7+AML-M2a男性患者骨髓形態(tài)發(fā)現(xiàn)，原始粒細胞較CD7-AML-M2a的細胞有很大區(qū)別：體積偏小，胞核較大，多偏位，常為不規(guī)則形，有扭曲折疊，有凹陷或切跡，核染色質呈細顆粒狀；胞質量少，呈淡藍色(圖2)。上述形態(tài)描述，往往會被誤認為是原始單核細胞，該病例極有可能被誤診為AML-M5。通過對我院初診治療的CD7+AML患者隨訪，發(fā)現(xiàn)其完全緩解率明顯低于CD7-AML患者，預后差，復發(fā)率高，與CD7+AML預后差的報道一致[6]，提示CD7抗原表達是AML預后不良的標志。

黑色箭頭所指為原始粒細胞變異表達CD7細胞。

綜上，CD7+AML具有不同于CD7-AML的獨特特點，其流式散點圖、骨髓形態(tài)、治療效果及預后等方面均有其自身特點。有研究發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)形態(tài)學結合組織化學染色不能精確診斷急性白血病[7]，如果完全依賴還可能導致誤診，另外POX染色小于3%也并非是診斷急性淋巴細胞白血病的通用參考指標。這就要求形態(tài)學檢驗工作者不能單純依靠FAB分類標準對AML進行分型，以免誤診或作出不準確報告，建議結合流式細胞術，必要時還可結合細胞遺傳學、分子生物學等其他相關檢測，這樣才能夠為AML診斷、治療方案的制定及預后判斷提供可靠依據(jù)。

[1]李耀華,徐娟,孫雪靜,等.CD7在成人急性髓系白血病的表達及其在微小殘留病檢測中的應用[J].首都醫(yī)科大學學報,2006(27):233-236.

[2]熊偉,薛惠良,陳炳才,等.表達CD7抗原的小兒急性髓性白血病28例臨床探討[J].中國實用兒科雜志,2002(17):558-559.

[3]吳紅紅,曹暉,王亞哲,等.CD7陽性急性髓系白血病骨髓干/祖細胞5個基因表達的研究[J].中國實驗血液學雜志,2009,17(2):298-303.

[4]要跟東,霍紅旗,李鵬,等.急性髓系及混合型白血病流式細胞術免疫分型檢測結果[J].白血病·淋巴瘤,2010(19):746-747.

[5]承璐雅,王偉光,莊靜麗,等.CD7+急性髓細胞性白血病臨床及實驗室特征分析[J].內科及危重癥雜志,2006,12(2):85.

[6]孟君霞,武永強,唐廣,等.CD7抗原表達與急性髓系白血病臨床特征、細胞遺傳學特點及預后的關系[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報,2016,33(6):508-510.

[7]張斌,蔡艷霞,周斌,等.變異異常高表達CD7伴漿細胞增多急性粒細胞白血病部分分化型一例并文獻復習[J].白血病·淋巴瘤,2013,22(12):754-755.

[責任編輯：李薊龍 英文編輯：劉彥哲]

Bone Marrow Flow Pattern and Morphological Characteristics of Acute Myeloid Leukemia with Abnormally High CD7 Expression

ZHAO Hai-jun

(Sanhe City Hospital,Sanhe,Hebei 065200,China)

Objective To study the bone marrow flow pattern and morphological characteristics of acute myeloid leukemia with abnormally high expression of CD7.Methods Flow cytometry was used to analyze the immunophenotype of leukemic cells in AML patients,and the bone marrow flow pattern and morphological characteristics were observed.Results There were five cases of M2a,one M3,two M5b and one M6 in nine cases of CD7+AML.The CD antigen expressions from high to low were CD33(100%),CD13(100%),CD117(100%),CD38(88.9%),MPO(88.9%),CD64(77.8%),CD34(77.8%),HLA-DR(66.7%),CD71(33.3%),CD11b(22.2%),CD15(22.2%)and CD25(22.2%),respectively.There were significant morphological differences between CD7+and CD7-AML.Conclusion Abnormally high expression of CD7was detectable in different FAB classification of AML and CD7+AML had special features in flow cytometry and bone marrow morphology.

acute myeloid leukemia;bone marrow flow pattern;CD7;flow cytometry

趙海軍(1977-)，男,河北三河人,主管檢驗師,從事臨床醫(yī)學檢驗。

R 733.71

B

10.3969/j.issn.1673-1492.2017.08.009

來稿日期：2016-09-12