田肇隆，馬艷輝，李 麗，王天龍，周凌雪

(首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院麻醉科，北京 100053)

恒河猴大腦中動(dòng)脈M1段栓塞建模中麻醉方案的選擇

田肇隆，馬艷輝，李 麗，王天龍，周凌雪

(首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院麻醉科，北京 100053)

目的 為需要進(jìn)行大腦中動(dòng)脈M1段栓塞模型建立的恒河猴及其它大型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提供一種簡(jiǎn)捷、迅速、安全的麻醉方法。 方法 采用健康成年恒河猴20只，均為雄性，年齡7～9歲，體重7～11 kg，基礎(chǔ)麻醉應(yīng)用0.1 mL/kg氯胺酮及速眠欣的混合液肌內(nèi)注射，待動(dòng)物入睡后行氣管插管(ID：4.5～5.5#)。隨后送入介入中心，入室后連接監(jiān)護(hù)并建立靜脈通路，完成有創(chuàng)動(dòng)脈壓及導(dǎo)尿管置入等。術(shù)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用呼吸機(jī)控制呼吸，丙泊酚2～4 mg/kg/h持續(xù)泵入進(jìn)行麻醉維持，術(shù)中根據(jù)動(dòng)物的生命體征和肢體活動(dòng)情況變化調(diào)整劑量，必要時(shí)追加上述氯胺酮與速眠新的混合液，并根據(jù)手術(shù)的需要調(diào)整心率、血壓、體溫等。溶栓前后行腦MRI造影，造影時(shí)停止輸注麻醉藥物，恢復(fù)動(dòng)物自主呼吸。術(shù)中監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心率、體溫、有創(chuàng)動(dòng)脈血壓及血氧飽和度，并于麻醉誘導(dǎo)后和術(shù)中抽取動(dòng)脈血行血?dú)夥治觥?結(jié)果 共進(jìn)行實(shí)驗(yàn)20次，均按預(yù)計(jì)方案實(shí)施完成，術(shù)中未發(fā)生動(dòng)物躁動(dòng)、呼吸抑制、心律失常等嚴(yán)重并發(fā)癥，實(shí)驗(yàn)結(jié)束停藥后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物很快清醒并送回動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，進(jìn)行后續(xù)處理。20只恒河猴15只存活24 h以上，5只死于溶栓后腦出血和大面積腦梗死面積較大。 結(jié)論 氣管內(nèi)插管全身麻醉合并復(fù)合麻醉維持為此類(lèi)比較復(fù)雜的介入及MRI實(shí)驗(yàn)的順利完成提供了一種安全、實(shí)用的麻醉方式。

恒河猴；大腦中動(dòng)脈栓塞；溶栓；氣管插管；全憑靜脈麻醉

恒河猴與人類(lèi)親緣關(guān)系密切，在器官代謝功能、體格特點(diǎn)及基因遺傳水平等許多生物學(xué)特性方面與人類(lèi)較為接近，因此成為近年來(lái)各種藥物、疾病的病理生理機(jī)制研究的重要模型。恒河猴大腦中動(dòng)脈M1段栓塞模型的建立過(guò)程，不僅對(duì)動(dòng)物制動(dòng)要求很高，同時(shí)需要在溶栓前后的腦部MRI掃描過(guò)程中恢復(fù)動(dòng)物自主呼吸。如何順利達(dá)到合適的麻醉深度同時(shí)不影響動(dòng)物的循環(huán)和呼吸是亟待解決的問(wèn)題。我們研究小組通過(guò)建立恒河猴大腦中動(dòng)脈M1段栓塞模型，對(duì)20例大腦中動(dòng)脈M1段栓塞模型恒河猴的麻醉方法、麻醉維持過(guò)程進(jìn)行討論，并對(duì)最終的麻醉效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料和方法

1.1 麻醉藥品

丙泊酚 (10 mL/100 mg，批號(hào)：320040，Astra Zeneca UK Limited．U)；氯胺酮 (2 mL/0.1 g，批號(hào)：111207，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，中國(guó))；速眠新(批號(hào)：201403，廣州萊綠寵商貿(mào)有限公司，中國(guó))。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型建立

采用實(shí)驗(yàn)用恒河猴20只，由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：【SCXK-軍2007-004】，均為雄性，年齡7～9歲，體重7～11 kg，外觀健康，皮色光亮，經(jīng)檢疫無(wú)傳染性疾病，可供實(shí)驗(yàn)研究用。于麻醉下行恒河猴大腦中動(dòng)脈M1段栓塞術(shù)并行溶栓術(shù)，溶栓術(shù)術(shù)前術(shù)后均需恢復(fù)動(dòng)物自主呼吸行腦部MRI掃描。

1.3 動(dòng)物準(zhǔn)備及麻醉

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)前禁食水大于8 h，氯胺酮與速眠新原液混合按0.1 mL/kg肌內(nèi)注射，待動(dòng)物入睡后行氣管插管(氣管導(dǎo)管ID4.5～5.5#)，隨后送往介入中心。入室后連接監(jiān)護(hù)，9號(hào)套管針行下肢靜脈穿刺建立靜脈輸液通道，并將置入導(dǎo)尿管導(dǎo)尿。電熱毯保溫37±0.5℃(肛溫)。丙泊酚2～4 mg/kg/h持續(xù)泵入。

麻醉完成后將動(dòng)物平臥位于特制的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)臺(tái)架上，待動(dòng)物生命體征平穩(wěn)后，消毒、鋪巾，股動(dòng)脈穿刺置管、行全腦血管造影，觀察腦血管分部及走行等情況，確定導(dǎo)管位于需要栓塞的血管部位，行大腦中動(dòng)脈M1段栓塞術(shù)。經(jīng)腦血管造影證實(shí)栓塞后觀察1～3 h，待自主呼吸恢復(fù)后，停機(jī)觀察10～20 min，呼吸平穩(wěn)后帶氣管導(dǎo)管運(yùn)送至MRI中心，行腦部MRI掃描。完成MRI數(shù)據(jù)采集后，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物再次轉(zhuǎn)運(yùn)至介入中心，加深麻醉后行大腦中動(dòng)脈栓塞部位溶栓術(shù)。待溶栓完成后，同前待恢復(fù)自主呼吸后，再次送往MRI中心進(jìn)行溶栓后腦部MRI掃描，掃描結(jié)束后，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物送往動(dòng)物中心，由動(dòng)物中心根據(jù)情況給予補(bǔ)液、抗生素等后續(xù)對(duì)癥處理。

1.4 麻醉監(jiān)測(cè)指標(biāo)

麻醉手術(shù)期間監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心率、無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈血壓和體溫(肛溫)、血氧飽和度(SpO2)、睫毛反射、瞳孔大小和對(duì)光反應(yīng)、呼吸頻率等，麻醉誘導(dǎo)后和手術(shù)期間分別采集動(dòng)脈血液行血?dú)夥治觥?/p>

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物安靜、無(wú)體動(dòng)，各項(xiàng)監(jiān)測(cè)指標(biāo)及藥物輸注速度等均在正常范圍內(nèi)，監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1及表2。全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均在實(shí)驗(yàn)結(jié)束停藥后30 min內(nèi)清醒安全返回動(dòng)物房，無(wú)一例發(fā)生麻醉意外。20只恒河猴中，15只存活24 h以上，5只因溶栓后出現(xiàn)嚴(yán)重的腦出血和較大面積的腦梗死而死亡。

表1 恒河猴不同時(shí)刻心率、體溫、有創(chuàng)血壓和變化

注：**表示差異極顯著性,*表示差異顯著性。

Note.**Very significant difference，*Significant difference．

表2 恒河猴不同時(shí)刻的動(dòng)脈血?dú)夥治鼋Y(jié)果

注：**表示差異極顯著性,*表示差異顯著性。

Note.**Very significant difference，*Significant difference．

3 討論

恒河猴因其物種更接近人類(lèi)，是理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，近年來(lái)不斷被用于模擬人類(lèi)進(jìn)行腦功能、血液循環(huán)、呼吸生理、內(nèi)分泌、生殖生理等多方面的研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)指導(dǎo)臨床工作意義很大[1]。應(yīng)用恒河猴建立大腦中動(dòng)脈M1段栓塞模型在國(guó)內(nèi)尚不多見(jiàn)，其實(shí)驗(yàn)過(guò)程比較復(fù)雜，首先要進(jìn)行全腦血管造影確定栓塞血管的位置，然后行栓塞術(shù)，數(shù)小時(shí)后將猴送往MRI中心進(jìn)行腦部MRI掃描，完成后返回介入中心進(jìn)行溶栓術(shù)約需1～2 h，待溶栓結(jié)束后再次轉(zhuǎn)運(yùn)至MRI中心進(jìn)行溶栓術(shù)后的二次腦部MRI，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要求恒河猴始終保持安靜、無(wú)體動(dòng)、否則直接影響造影、溶栓及MRI成像的質(zhì)量，因此整個(gè)過(guò)程對(duì)麻醉的要求較高。

為保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，本實(shí)驗(yàn)在以往研究的基礎(chǔ)上[2]，采用氣管插管全身麻醉的方法，選擇速眠新加氯胺酮進(jìn)行誘導(dǎo)麻醉，并用丙泊酚進(jìn)行麻醉維持。速眠新是麻醉誘導(dǎo)的理想藥物，起效時(shí)間較快，一般3 min內(nèi)可起到麻醉作用，鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜，肌肉松弛度較好，在獼猴麻醉中的適宜劑量為0.1～0.2 mL/kg，但可能會(huì)出現(xiàn)麻醉不全的情況，對(duì)心血管系統(tǒng)有一定抑制作用[3，4]。而氯胺酮鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)且誘導(dǎo)迅速，在獼猴麻醉中的適宜劑量為10 mg/kg，對(duì)呼吸影響輕微，對(duì)血管具有顯著興奮作用，但肌肉松弛的作用效果相對(duì)較差[5，6]，因此二者同時(shí)使用可以揚(yáng)長(zhǎng)避短、互補(bǔ)優(yōu)缺，減輕各自的不良反應(yīng)，增強(qiáng)麻醉效果。丙泊酚是一種起效快、作用時(shí)間段、蘇醒迅速的靜脈麻醉藥物，是常用的麻醉維持藥物[7]。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)小組確定了速眠新加氯胺酮誘導(dǎo)麻醉丙泊酚靜脈持續(xù)泵入的麻醉方法。

麻醉實(shí)施要點(diǎn)有以下幾個(gè)方面：⑴在大腦中動(dòng)脈M1栓塞模型建立的過(guò)程中要確保動(dòng)物不能出現(xiàn)體動(dòng)，否則影響手術(shù)操作、MRI數(shù)據(jù)的采集，甚至造成腦血管破裂等嚴(yán)重并發(fā)癥，因此術(shù)中最好采用氣管內(nèi)插管，便于術(shù)中管理并維持適當(dāng)?shù)穆樽砩疃?；⑵在介入中心手術(shù)麻醉過(guò)程中，必要時(shí)需穿戴鉛衣做好防護(hù)工作；⑶大腦中動(dòng)脈栓塞后需到核磁共振室進(jìn)行腦部MRI掃描，該過(guò)程需讓實(shí)驗(yàn)猴恢復(fù)自主呼吸，呼吸頻率和潮氣量平穩(wěn)后才能停止輔助呼吸進(jìn)行腦部MRI掃描。如呼吸功能恢復(fù)不足則可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物缺氧，甚至死亡；⑷完成腦部MRI后需再次回到介入中心行溶栓術(shù)，此階段需1～2 h，要維持一定的麻醉深度，并根據(jù)其生命體征進(jìn)行補(bǔ)液；因全身麻醉后實(shí)驗(yàn)猴的體溫調(diào)節(jié)功能降低，受外界溫度影響較大，需采取保溫措施。

速眠新加氯胺酮誘導(dǎo)麻醉丙泊酚靜脈持續(xù)泵入可維持適宜的麻醉深度并可隨時(shí)調(diào)整麻醉深度，為恒河猴大腦中動(dòng)脈M1段栓塞模型建立提供了一種安全、簡(jiǎn)便、易行的麻醉方法。

[1] 馬諾山, 姚詠明, 于勇. 速眠新與鹽酸氯胺酮對(duì)獼猴麻醉效果的初步觀察 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào), 2003, 11(03): 191-192.

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Selection of anesthesia suitable for the establishment of a rhesus monkey model of M1 segment of middle cerebral artery occlusion

TIAN Zhao-long, MA Yan-hui, LI Li, WANG Tian-long，ZHOU Ling-xue

(Department of Anesthesiology, Xuanwu Hospital, Capital Medical University, Beijing 100053, China)

Objective To provide a simple, convenient, and safe anesthesia method for the establishment of a M1 segment of middle cerebral artery occlusion model in rhesus monkey or other large laboratory animals. Method Twenty male rhesus monkeys weighing 7-11 kg (ages 7-9 years) from Academy of Military Medical Sciences were used in this study. Sumianxin injection combined with 0.1 mg/kg ketamine was given before endotracheal intubation (ID：4.5-5.5#). The animals were then transported to an interventional operation room, where the intravenous access was established and a urinary catheter was inserted into the urinary bladder. Mechanical ventilation was used during the surgery, propofol was continuously injected in a speed of 2-4 mg/kg/h, and Sumianxin-ketamine could be given if necessary to maintain adequate anesthesia depth. The dose was adjusted according to vital signs of the rhesus such as body movements, physiological parameters, and demand of surgery. Brain MRI examination was performed before and after thrombolysis. Anesthetic injection was suspended and the animals were allowed to have a spontaneous breathing every time before the MRI text. Heart rates, temperature, non-invasive blood pressure, and SpO2were monitored during the whole surgery. Blood samples were taken from the radial artery for blood gas analysis after anesthesia induction and during operation. Results All the 20 animals underwent the operation successfully, no animal had restlessness, respiratory depression, arrhythmia and other serious complications. At the end of the study, animals awake soon. Fifteen of them survived longer than 24 hours, only 5 died from serious cerebral hemorrhage and larger cerebral infarction. Conclusions General endotracheal anesthesia is safe for rhesus monkeys during such interventional operation and MRI examination。

Rhesus monkeys; Middle cerebral artery occlusion; Thrombolysis; Endotracheal intubation; Intravenous anesthesia

北京市醫(yī)院管理局“登峰計(jì)劃”專(zhuān)項(xiàng)經(jīng)費(fèi)資助(編號(hào)DFL20150802)；國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)81500996)；中國(guó)博士后科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào)2016T90114)。

田肇隆，男，研究方向：功能神經(jīng)外科麻醉及圍麻醉期臟器保護(hù)。E-mail： 15910851623@163．com。

李麗(1983-)，女，研究方向: 腦損傷腦保護(hù)，危重病人麻醉。E-mail： lili2009kaoyan@163.com；王天龍(1964-)，男，研究方向: 腦損傷腦保護(hù)，危重病人麻醉。E-mail： w_tl5595@hotmail.com。

技術(shù)方法

R-33

A

1671-7856(2017) 06-0053-03

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.06.011

2016-10-26