袁小淋++余曉玲++魏丹霞++李月亭

摘要：目的建立紫外分光光度法測定清熱潤燥口服液中總多糖含量的方法。方法采用苯酚-硫酸比色法，以D-無水葡萄糖為對照品，在波長490 nm處測定總多糖含量。結果D-無水葡萄糖回歸方程為A=00726x+01531，R=09998，線性范圍0260 mg～0910 mg，平均回收率為10037%，RSD 為132%（n=6）。結論本方法穩(wěn)定、快捷，可用于清熱潤燥口服液中總多糖的含量測定。

關鍵詞：清熱潤燥口服液；總多糖；紫外分光光度法；苯酚-硫酸比色法；含量測定

中圖分類號：R9272文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2017）07-0063-03

地域氣候特征、居民的飲食習慣，使得昆明地區(qū)的咳嗽多發(fā)，并具有獨特的特點。雖然，臨床用于治療咳嗽的西藥及中成藥較多，但有效針對昆明地區(qū)咳嗽特點的中成藥還未見報道。清熱潤燥口服液處方來源于云南省著名老中醫(yī)陸家龍教授的臨床驗方，臨床上經(jīng)過了多年的驗證。處方由桑葉、蘆根、薏苡仁等13味中藥組成，具有清熱養(yǎng)陰，潤燥止咳之功。為控制劑的質(zhì)量，確保臨床療效，本研究采紫外分光光度法對清熱潤燥口服液中的總多糖進行含量測定，為該制劑的質(zhì)量控制方法研究打下基礎。

1儀器與試藥

UV-2000型紫外可見分光光度計（無尼可儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；FB124自動內(nèi)校電子分析天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司）。苯酚；濃硫酸；D-無水葡萄糖（110833-200904）；乙醇；清熱潤燥口服液3批樣品（自制批號為150616，150713，150716）。

2方法與結果

21測定波長選擇[1～8]顯色后D-無水葡萄糖對照品溶液和供試品溶液在490 nm處均有最大吸收，故選擇測定波長為490 nm。

22對照品溶液的制備精密稱取D-無水葡萄糖標準品適量，加水制成每1 mL含D-無水葡萄糖0052 mg的溶液，即得。

23供試品溶液的制備[9～14]精密吸取清熱潤燥口服溶液（批號150616）1 mL，加水稀釋至50 mL，從中另取2 mL蒸干，用80%乙醇2 mL洗滌2次，離心（3000r/min）10 min，傾去上清液，用水分散，放置，合并殘留在蒸發(fā)皿上的沉淀一并過濾，收集濾液后，定容至10 mL容量瓶中，即得供試品溶液。

24測定方法精密量取1 mL供試品溶液置10 mL量瓶中，加5% 苯酚溶液1 mL，混勻，沿壁加入濃硫酸50 mL，混勻，40℃水浴加熱20 min，置冷水浴中冷卻至室溫。以相應的溶液為空白，在490 nm處測定吸光度。連續(xù)測定3次，取平均值，以D-無水葡萄糖為對照品，采用標準曲線法測定總多糖含量。

25標準曲線的制備線性關系考察精密吸取D-無水葡萄糖對照品溶液（0052 mg/mL）5、75、100、125、150、175 mL置25 mL量瓶中，加5% 苯酚溶液1 mL，混勻，沿壁加入濃硫酸50 mL，加水至刻度線，混勻，40℃水浴加熱20 min，置冷水浴中冷卻至室溫。以吸光度（A）為縱坐標，進樣量（C）為橫坐標，繪制標準曲線，并計算回歸方程。結果D-無水葡萄糖對照品的回歸方程為A=00726x+01531（r=09998），表明D-無水葡萄糖對照品在0260 mg～0910 mg范圍內(nèi)有良好的線性關系，見圖1。

26精密度試驗精密量取D-無水葡萄糖對照品溶液5 mL置25 mL容量瓶中，按制備供試品溶液操作方法，連續(xù)測定6次。結果表明，RSD為0215%，精密度符合含量測定要求，結果見表1。

27穩(wěn)定性試驗分別吸取D-無水葡萄糖對照品溶液和供試品溶液5 mL和1 mL置25 mL容量瓶中，按制備供試品溶液操作方法，在顯色15 min后每隔10 min測定一次吸光度，結果表明D-無水葡萄糖對照品溶液吸光度在65min內(nèi)穩(wěn)定性良好，而樣品溶液吸光度在45 min內(nèi)基本穩(wěn)定，表明在測定時間45 min內(nèi)樣品穩(wěn)定性良好。結果見表2。

28重復性考察精密稱取同一份樣品6份，按制備供試品溶液操作方法，每份取1 mL，測定吸光度。結果表明：6份樣品的RSD<3%，表明本法具有較好的重復性，結果見表3。

29加樣回收率試驗精密吸取已知含量的樣品溶液（8741 mg/mL）1 mL（9份），分別加入5 mL、10 mL、20 mLD-無水葡萄糖對照品溶液（0052 mg/mL），按制備供試品溶液操作方法，測定每份樣品溶液吸光度，計算其平均回收率為10037%，RSD 為132%，表明本含量測定方法穩(wěn)定可靠，可用于總多糖的含量測定，結果見表4。

210樣品測定取清熱潤燥口服溶液3批（每批測定兩次，即n=2），按23項下方法制備供試液，取1 mL測定吸光度，并計算每mL含量，結果見表5。

3討論

在實驗過程中，精密準確的加入各種試劑是關鍵，由于穩(wěn)定性不好，時間的把握也直接影響其測定的準確性，故在測定時要準確把握時間和試劑的加入。處方組成中的藥材含大量的多糖，如：沙參、蘆根、薏仁、麥冬、冬瓜等。而多糖具有增強機體免疫力，促進康復的作用。因此，選擇此類成分作為處方含量測定的控制指標較為合理。

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