陳雨娜

(商丘醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 教務(wù)處,河南 商丘 476000)

油脂營養(yǎng)

翅果油對小鼠抗氧化能力及脂質(zhì)代謝的影響

陳雨娜

(商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 教務(wù)處,河南 商丘 476000)

以昆明小鼠為模擬對象，研究了攝入翅果油對小鼠抗氧化能力和脂質(zhì)代謝的影響。實(shí)驗(yàn)選取30只6周齡昆明小鼠，隨機(jī)分為3組，分別為對照組、花生油組和翅果油組，持續(xù)喂養(yǎng)6周后，分別測定其體重、抗氧化能力和脂質(zhì)代謝水平。結(jié)果表明：與花生油相比，翅果油可顯著降低小鼠體重、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、丙二醛(MDA)含量及肝臟組織載脂蛋白ApoE基因表達(dá)量，顯著提高血清和肝臟的總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)活性及肝臟組織肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-Ⅰ(CPT-Ⅰ)表達(dá)量、血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量。研究表明，富含不飽和脂肪酸和VE的翅果油有助于提高小鼠機(jī)體抗氧化能力和血脂調(diào)節(jié)能力，是非常適宜食用的安全健康油品。

翅果油；不飽和脂肪酸；抗氧化能力；脂質(zhì)代謝；基因表達(dá)

翅果油樹屬胡頹子科胡頹子屬植物，主要分布于山西省，是我國二級瀕危樹種。翅果油是由翅果油樹種仁經(jīng)壓榨而成，在原產(chǎn)地被民間廣泛食用，其不飽和脂肪酸含量高達(dá)91.3%，其中油酸和亞油酸含量分別為40.36%和50.38%,VE含量達(dá)到0.98%[1]。閆少芳等[2]研究發(fā)現(xiàn)，用富含單不飽和脂肪酸的堅(jiān)果飼喂高血脂大鼠，結(jié)果大鼠的血脂水平得到較大改善。Sarkkinen 等[3]研究表明，在攝入量相等的情況下，富含單不飽和脂肪酸的油脂能降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量，減輕體重。Mattson等[4]研究發(fā)現(xiàn)，富含油酸的膳食可降低LDL-C及總膽固醇(TC)含量，但高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)并未下降。Fung等[5]研究發(fā)現(xiàn)，攝入富含單不飽和脂肪酸的食物可提升機(jī)體的抗氧化能力，并在一定程度上預(yù)防心血管疾病。Shewale等[6]研究發(fā)現(xiàn)，長鏈多不飽和脂肪酸在預(yù)防心腦血管疾病方面具有顯著效果。Chang等[7]研究發(fā)現(xiàn)，ω-3長鏈不飽和脂肪酸可以改善低密度脂蛋白受體基因，降低小鼠的血脂水平和動脈粥樣硬化病變程度。

目前對翅果油的研究主要集中在制取工藝、脂肪酸組成及理化性質(zhì)等方面，而關(guān)于翅果油對人體抗氧化能力及脂質(zhì)代謝方面的影響尚未見報(bào)道。因此，本研究以昆明小鼠為模擬研究對象，探討了翅果油對昆明小鼠體重、抗氧化能力及脂質(zhì)代謝的影響，以期為翅果油作為新型健康安全食用油提供科學(xué)依據(jù)，為充分挖掘利用翅果油資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

翅果油，購自山西琪爾康翅果生物制品有限公司，其不飽和脂肪酸含量為90.6%，VE含量達(dá)到0.98%?；ㄉ?，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，其不飽和脂肪酸含量為79.2%。6周齡昆明種SPF級雄性小鼠及基礎(chǔ)日糧，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。

總抗氧化能力(T-AOC)測定試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH -Px)測定試劑盒、過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒、丙二醛(MDA)測定試劑盒，購自南京建成生物工程研究所；膽固醇(TC)檢測試劑盒、甘油三酯(TG)檢測試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇(LDL -C)檢測試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測試劑盒，購自深圳邁瑞公司；RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒及熒光定量試劑盒，購自上海生工生物工程有限公司。

CP-100MX型超速冷凍離心機(jī)，TA-4000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，UV-9200型紫外可見分光光度計(jì)，BS190型生化分析儀，Model680型酶標(biāo)儀，Thermo NanoDrop2000核酸分析儀，ABI Stepone熒光定量 PCR儀，電子天平，超凈工作臺等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)

選取30只6周齡的昆明種SPF級雄性小鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按體重隨機(jī)分為3組，每組10只，稱量其體重并記為初始體重。分組飼養(yǎng)階段，除每日予以正常飼料外，于每日早八時(shí)，分別進(jìn)行經(jīng)口灌胃實(shí)驗(yàn)，對照組、花生油組和翅果油組分別灌胃6 g/(kg·d)的蒸餾水、花生油、翅果油。實(shí)驗(yàn)組小鼠采取同室分籠飼養(yǎng)，保持室內(nèi)清潔衛(wèi)生，控制晝夜交替12 h，溫度23℃，濕度50%～60%，采食飲水自由，飼養(yǎng)6周后，饑餓過夜12 h，稱重、解剖采樣，進(jìn)行血清及肝臟相關(guān)指標(biāo)測定。

1.2.2 血清及肝臟組織抗氧化能力相關(guān)指標(biāo)的測定

按照試劑盒說明書分別測定小鼠血清和肝臟組織的T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT活性及MDA含量。

1.2.3 血清脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)的測定

小鼠血清的TG、TC、LDL-C、HDL-C分別按照相應(yīng)的試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.4 Real-time PCR檢測肝臟組織的ApoE和肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-Ⅰ(CPT-Ⅰ)基因的表達(dá)

肝臟組織的RNA提取按照試劑盒方法進(jìn)行，RNA質(zhì)量經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，濃度用核酸分析儀測定。運(yùn)用反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)條件為：37℃，15 min；85℃，30 s；4℃，5 min。熒光定量檢測體系為：2 μL cDNA，10 μL SYB，Premix Ex Taq(Tli NaseH Plus)，0.2 μmol/L 上下游引物各0.4 μL，ROX Reference Dye II 0.4 μL，滅菌蒸餾水6.8 μL，在熒光 RT-PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增。采取兩步法進(jìn)行擴(kuò)增，第一步：94℃ 3 min，55℃ 1 min，72℃ 75 s；第二步：40個(gè)循環(huán)，94℃變性30 s，55℃退火45 s，72℃延伸1 min；在72℃延伸時(shí)采集熒光信號，獲取各樣本中目的基因和β-actin的Ct值，測定樣本中靶基因的相對表達(dá)量，比較2-ΔCt值，ΔCt=Ct(ApoE)-Ct(β-actin)、ΔCt=Ct(CPT-Ⅰ)-Ct(β-actin)。目的基因ApoE、CPT-Ⅰ及內(nèi)參基因β-actin的引物依據(jù)其在Genebank中的全基因序列，利用 Premier Primer 5 軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，具體序列如表1所示。

圍繞本選題，筆者在中國知網(wǎng)等數(shù)據(jù)庫檢索，有學(xué)術(shù)論文30余篇，但尚沒有形成專著。其中研究成果多集中在新中國成立初期和上世紀(jì)八九十年代，新世紀(jì)以來關(guān)于解放戰(zhàn)爭時(shí)期黨的教育工作的研究較少?？傮w而言，著作出版方面，目前出版的有關(guān)解放戰(zhàn)爭時(shí)期中國共產(chǎn)黨解決教育問題的文獻(xiàn)資料主要有：董純才主編的《中國革命根據(jù)地教育史》（三卷本），皇甫束玉等編著的《中國革命根據(jù)地教育紀(jì)事》、陳元暉主編的《老解放區(qū)教育簡史》、中央教育科學(xué)研究所編的《老解放區(qū)教育資料》（三卷本）等著作文獻(xiàn)。

表1 引物序列

1.2.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

測定結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”(x±s)來表示，用SPSS13.0進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 翅果油對小鼠體重的影響

不同處理對小鼠體重的影響結(jié)果如表2所示。

表2 不同處理對小鼠體重的影響(n=10)

注：表中同列字母相同表示差異不顯著(P>0.05)，相鄰表示差異顯著(P<0.05)，相間表示差異極顯著(P<0.01)。下同。

由表2可知，對照組、花生油組和翅果油組小鼠初始體重不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但經(jīng)6周飼養(yǎng)后，小鼠平均體重分別增長10.95、12.97 g和11.63 g。與對照組相比，翅果油組小鼠的體重增加不存在顯著差異，而花生油組小鼠體重增加達(dá)到顯著差異水平。這表明飼喂花生油會顯著增加小鼠體重，而飼喂等量的翅果油則對小鼠體重影響不顯著。

2.2 翅果油對小鼠血清及肝臟抗氧化能力的影響

不同處理對小鼠血清抗氧化能力的影響如表3所示。

表3 不同處理對小鼠血清抗氧化能力的影響(n=10)

由表3可知，與對照組相比，翅果油組小鼠血清T-AOC、CAT、GSH-Px活性雖略有差異，但均未達(dá)到顯著差異水平，而花生油組則顯著降低；花生油組小鼠血清SOD活性較對照組顯著降低，而翅果油組小鼠血清SOD活性顯著高于對照組、極顯著高于花生油組；翅果油組小鼠和對照組小鼠血清在MDA含量上不存在顯著差異，而花生油組小鼠血清MDA含量顯著高于翅果油組和對照組。

表4 不同處理對小鼠肝臟抗氧化能力的影響(n=10)

由表4可知，與對照組相比，花生油組T-AOC、SOD、GSH-Px活性均顯著降低，而翅果油組則差異不顯著；翅果油組小鼠肝臟組織的CAT活性顯著高于對照組，極顯著高于花生油組；翅果油組小鼠肝臟組織MDA含量較對照組小鼠差異不顯著，而花生油組則顯著增高。這表明飼喂等量翅果油與花生油，花生油可顯著降低小鼠血清及肝臟組織的抗氧化能力并顯著增加MDA含量，而飼喂翅果油對小鼠血清及肝臟組織的抗氧化能力及MDA含量無顯著影響，這可能是由于翅果油中含較多的VE所致。

2.3 翅果油對小鼠血清脂質(zhì)含量的影響

不同處理對小鼠血清脂質(zhì)含量的影響如表5所示。

表5 不同處理對小鼠血清脂質(zhì)含量的影響(n=10) mmol/mL

由表5可知，翅果油組小鼠血清TC含量較對照組不存在顯著差異，花生油組TC含量顯著高于翅果油組。對照組小鼠血清TG含量顯著低于翅果油組、極顯著低于花生油組，翅果油組TG含量顯著低于花生油組。LDL-C是一種運(yùn)載膽固醇的載體蛋白，容易被氧化成氧化低密度脂蛋白，當(dāng)其過量時(shí)會引起膽固醇在動脈壁上積存，進(jìn)而導(dǎo)致動脈硬化。對照組小鼠血清中LDL-C含量顯著低于翅果油組、極顯著低于花生油組，翅果油組LDL-C含量顯著低于花生油組。HDL-C是一種可促進(jìn)膽固醇代謝，防止動脈粥樣硬化的血漿蛋白，素有“血管清道夫”美譽(yù)。與對照組相比，翅果油組小鼠血清HDL-C含量不存在顯著差異，而花生油組則顯著降低。結(jié)果表明，與花生油組相比，翅果油可顯著降低小鼠血清中的LDL-C、TC及TG含量，顯著增加HDL-C含量，防止血脂代謝異常，這可能是由于翅果油中含有較高含量的不飽和脂肪酸所致。

2.4 翅果油對小鼠肝臟ApoE及CPT-Ⅰ基因表達(dá)的影響

載脂蛋白ApoE具有激活脂蛋白代謝酶及識別脂蛋白受體等功能，在脂蛋白代謝中起著非常重要的作用，表達(dá)量越高則低密度脂蛋白(LDL)含量越高，膽固醇含量也越高[8]。CPT-Ⅰ是脂肪酸進(jìn)行β氧化的限速酶，其表達(dá)量升高則加速脂肪酸進(jìn)入線粒體氧化，促進(jìn)脂類代謝[9]。不同處理對小鼠肝臟ApoE及CPT-Ⅰ基因表達(dá)的影響如圖1所示。

圖1 不同處理對小鼠肝臟ApoE、CPT-Ⅰ基因

從圖1可以看出，翅果油組與對照組相比，小鼠肝臟ApoE基因表達(dá)差異不顯著，而較花生油組顯著降低。翅果油組與對照組小鼠肝臟CPT-Ⅰ基因表達(dá)不存在顯著差異，而花生油組較兩者則顯著降低。這表明飼喂翅果油的小鼠與對照組小鼠的脂質(zhì)代謝能力不存在顯著差異，而花生油組小鼠脂質(zhì)代謝能力顯著下降，這可能是由于花生油組小鼠的抗氧化能力較弱導(dǎo)致氧化應(yīng)激[10-12]，使得脂質(zhì)代謝關(guān)鍵基因ApoE、CPT-Ⅰ表達(dá)發(fā)生變化進(jìn)而導(dǎo)致TG、TC、LDL-C含量升高及HDL-C含量降低，脂質(zhì)代謝發(fā)生異常。

3 結(jié) 論

本文研究了翅果油對小鼠抗氧化能力和脂質(zhì)代謝的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：

(1)與花生油相比，翅果油可顯著提高小鼠血清及肝臟組織的抗氧化能力，顯著減少M(fèi)DA生成；

(2)與花生油相比，翅果油可顯著降低小鼠血清TG、TC、LDL-C含量，顯著提高HDL-C含量；

(3)與花生油相比，翅果油可顯著降低載脂蛋白ApoE基因表達(dá)量，同時(shí)顯著提升肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-Ⅰ(CPT-Ⅰ)基因表達(dá)量，促進(jìn)脂肪分解，避免脂類氧化損傷細(xì)胞，促進(jìn)脂類代謝。

綜上所述，翅果油因富含不飽和脂肪酸和VE具有較強(qiáng)的抗氧化能力和血脂調(diào)節(jié)能力，可防止脂質(zhì)代謝異常發(fā)生，是非常適宜人類食用的健康安全油品。

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Effects ofElaeagnusmollisDiels. seed oil on antioxidant capacity and lipid metabolism of mice

CHEN Yuna

(Office of Educational Administration, Shangqiu Medical College, Shangqiu 476000, Henan, China)

The effects ofElaeagnusmollisDiels. seed oil on the antioxidant capacity and lipid metabolism of Kunming mice were studied. Thirty six-weeks old male Kunming mice were randomly divided into three groups:control group, peanut oil group,ElaeagnusmollisDiels. seed oil group. After continuous feeding for six weeks, the weight, antioxidant capacity and lipid metabolism level of mice were measured. The results showed that compared with peanut oil group, theElaeagnusmollisDiels. seed oil could significantly reduce the weight and the levels of blood TC, TG, LDL-C, MDA and mRNA expression of ApoE in hepatic of mice. In addition, the T-AOC and activities of SOD, GSH-Px and CAT in blood and hepatic of mice were significantly increased, and the mRNA expression of CPT-Ⅰ and blood HDL-C were also significantly increased. These data suggested that theElaeagnusmollisDiels. seed oil rich in unsaturated fatty acid and VEcould improve the antioxidant capacity and ameliorate the lipid metabolism, and it was a kind of very healthy and safety edible oil.

ElaeagnusmollisDiels. seed oil； unsaturated fatty acid； antioxidant capacity； lipid metabolism； gene expression

2017-01-09

陳雨娜(1981)，女，講師，碩士，研究方向?yàn)橹靖位A(chǔ)醫(yī)學(xué)與影像學(xué)(E-mail)381095759@qq.com。

TS225.6; TS201.4

A

1003-7969(2017)06-0077-04