□ 韓 韞 林師烈 海南澳美華制藥有限公司

匙羹藤薄荷沖劑中匙羹藤酸含量測(cè)定

□ 韓 韞 林師烈 海南澳美華制藥有限公司

采用高效液相色譜法對(duì)匙羹藤薄荷沖劑中匙羹藤酸含量進(jìn)行測(cè)定，科學(xué)評(píng)價(jià)和有效控制匙羹藤薄荷沖劑質(zhì)量提供依據(jù)。以C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱、流速1.6 mL/min、梯度洗脫、檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm為檢測(cè)條件建立方法。結(jié)果顯示匙羹藤酸在0.15 ～0.45 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積成良好的線性關(guān)系（r=0.999 4），平均回收率為101.88%，RSD為1.13%，證明所建立的檢測(cè)方法準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可作為匙羹藤薄荷沖劑的質(zhì)量控制方法。

匙羹藤酸；含量測(cè)定，高效液相色普法

近年來(lái)，眾多研究表明匙羹藤酸可以通過(guò)促進(jìn)胰島素分泌、抑制腸道葡萄糖分泌等作用機(jī)理進(jìn)行糖尿病的防治[1-4]，筆者公司所研發(fā)的匙羹藤薄荷沖劑以匙羹藤提取物為主要原料制備而成，其活性成分主要是匙羹藤酸（Gymnemic acid），可應(yīng)用于日常協(xié)助預(yù)防或治療糖尿病。目前，我國(guó)沒(méi)有匙羹藤相關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)其化學(xué)成分性質(zhì)，參考相關(guān)文獻(xiàn)及國(guó)外質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[5]，筆者公司用高效液相色譜法建立關(guān)于匙羹藤薄荷沖劑中有效物質(zhì)——匙羹藤酸的定量分析方法，為該沖劑在生產(chǎn)過(guò)程中質(zhì)量控制提供相應(yīng)依據(jù)。

1 儀器、對(duì)照品及試劑

1.1 儀器

Waters 高效液相色譜儀。

1.2 對(duì)照品

匙羹藤新苷元對(duì)照（南京伽貝森）。

1.3 試劑

乙醇、氫氧化鉀、鹽酸、磷酸氫二鉀、磷酸，均為AR級(jí)別；甲醇（色譜級(jí)）；乙腈（色譜級(jí)）；水為高純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為安捷倫TC-C18（4.6 nm×250 nm ，5 μm）；流動(dòng)相及其梯度條件見(jiàn)表1。流速1.6 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；進(jìn)樣量20 μL；柱溫（25±1）℃。實(shí)驗(yàn)研究表明在此色譜條件下，匙羹藤薄荷沖劑樣品在與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間出現(xiàn)相同的色譜峰，并且分離度良好，見(jiàn)圖1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液配制

精密稱取匙羹藤新苷元對(duì)照品15 mg至50 mL容量瓶中，加甲醇溶解定容至50 mL，即得標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液（每1 mL含匙羹藤新苷元0.3 mg）。使用前0.45 μm濾膜過(guò)濾。

表1 流動(dòng)相及其梯度條件表

2.3 供試樣品溶液的配制

稱取匙羹藤薄荷沖劑約2.525 g，將樣品置于100 mL的平底燒瓶中，加入25 mL的50%乙醇溶液，再加入2 mL的12%氫氧化鉀溶液，加熱回流1 h，取出，冷卻至室溫，再加入5.5 mL的4 mol/L的鹽酸溶液（36 mL鹽酸到100 mL水），超聲2 h，冷卻至室溫，使用12%KOH溶液調(diào)節(jié)pH值為7.5～8.5，將平底燒瓶中的液體轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，使用50%乙醇，反復(fù)多次洗滌殘?jiān)徊⑥D(zhuǎn)入100 mL容量瓶中，使用50%乙醇定容，混勻，靜置。取樣過(guò)0.45 μm濾膜，即得供試樣品溶液。

2.4 線性關(guān)系研究

精密稱取匙羹藤新苷元對(duì)照品30 mg至20 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至20 mL，即得儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液。線性溶液配制比例見(jiàn)表2。按表2所示精密量取儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液進(jìn)行稀釋，定容并搖勻。0.45 μm尼龍濾膜過(guò)濾后取20 μL進(jìn)樣檢測(cè)。

表2 線性溶液配制比例表

圖1 匙羹藤薄荷沖劑線性圖

匙羹藤薄荷沖劑線性分析見(jiàn)圖1。

匙羹藤薄荷沖劑線性以匙羹藤新苷元峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以匙羹藤新苷元濃度為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=4 827 692.164 7X+30 530.200（R2=0.999 4）。結(jié)果表明匙羹藤新苷元在0.15～0.45 mg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度研究

取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣20 μL，對(duì)峰面積進(jìn)行考察，峰面積的RSD為0.40%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性研究

供試品溶液配制后立即進(jìn)樣20 μL分析，室溫放置24 h后再次進(jìn)樣20 μL分析，記錄色譜圖，對(duì)峰面積進(jìn)行考察，計(jì)算峰面積的RSD為0.63%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性研究

取同一批次樣品，按“2.3”項(xiàng)下制備6份供試樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并計(jì)算產(chǎn)品中匙羹藤酸含量。結(jié)果顯示產(chǎn)品中匙羹藤酸的平均含量為17.06 mg/g，RSD為1.0%，該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收研究

取約2.525 g產(chǎn)品（匙羹藤酸含量約為17.06 mg/g）粉末6份，精密稱定，分別精密加入匙羹藤酸對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)下制備樣品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件檢測(cè)，并計(jì)算匙羹藤酸加樣回收率。結(jié)果顯示：匙羹藤酸的平均回收率為101.88%，RSD為1.13%，表明本法具有良好的回收率。具體結(jié)果見(jiàn)表3。

2.9 樣品含量測(cè)定

分別取不同批次產(chǎn)品6份，按“2.3”項(xiàng)下制備制備樣品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件檢測(cè)，并計(jì)算匙羹藤酸含量，結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 匙羹藤酸加樣回收率試驗(yàn)表

表4 產(chǎn)品含量測(cè)定結(jié)果表

3 結(jié)論

以USP匙羹藤提取物中匙羹藤酸含量檢測(cè)方法為基礎(chǔ)，建立匙羹藤薄荷沖劑中有效物質(zhì)匙羹藤酸含量的檢測(cè)方法，對(duì)線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性和加樣回收等方面進(jìn)行研究，結(jié)果顯示所建立的檢測(cè)方法可以有效用于匙羹藤薄荷沖劑有效物質(zhì)含量的檢測(cè)，為此類日常協(xié)助預(yù)防或治療糖尿病的產(chǎn)品生產(chǎn)質(zhì)量管理提供科學(xué)依據(jù)。在未來(lái)，需要進(jìn)一步研究該檢測(cè)方法是否可以有效應(yīng)用于不同劑型產(chǎn)品或多種成分復(fù)合產(chǎn)品中，為更多以匙羹藤提取物為主的產(chǎn)品質(zhì)量管理提供科學(xué)依據(jù)。

[1]Sugihara Y, Nojima H, Matsuda H, et al. Antihyperglycemic effects of gymnemic acid IV, a compound derived from Gymnema sylvestre leaves in streptozotocindiabetic mice.[J]. Journal of Asian Natural Products Research,2000,2(4):321-7.

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