俞紅恩，劉紅開(kāi)，康玉凡,*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，北京 100193；2.濟(jì)南大學(xué)商學(xué)院，山東 濟(jì)南 250002）

響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化豌豆胰蛋白酶抑制劑超聲粗提工藝

俞紅恩1，劉紅開(kāi)2，康玉凡1,*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，北京 100193；2.濟(jì)南大學(xué)商學(xué)院，山東 濟(jì)南 250002）

利用響應(yīng)面分析法對(duì)豌豆胰蛋白酶抑制劑超聲輔助粗提工藝進(jìn)行優(yōu)化。通過(guò)單因素試驗(yàn)篩選最佳單因素條件：樣品顆粒度80 目、超聲頻率40 kHz、超聲時(shí)間13 min、超聲溫度40 ℃、料液比1∶80（g/mL）、超聲功率500 W。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取超聲時(shí)間、超聲溫度、料液比、超聲功率為自變量，胰蛋白酶抑制劑總活性為響應(yīng)值，根據(jù)Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理采用四因素三水平的響應(yīng)面分析法，并且建立二次多項(xiàng)式回歸方程的預(yù)測(cè)模型。根據(jù)回歸模型，在超聲頻率40 kHz、樣品顆粒度80 目的條件下，確定豌豆胰蛋白酶抑制劑總活性最高的優(yōu)化組合為超聲時(shí)間16 min、超聲溫度50 ℃、料液比1∶100（g/mL）、超聲功率500 W，豌豆胰蛋白酶抑制劑總活性為574.54 TIU/g，與理論預(yù)測(cè)值582.80 TIU/g相比，其相對(duì)誤差為1.42%；R2Adj=0.886 4，R2=0.943 2，說(shuō)明該模型擬合程度較好，通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化后得出的回歸方程具有一定的實(shí)踐指導(dǎo)意義。

豌豆；胰蛋白酶抑制劑；提?。豁憫?yīng)面法；超聲

豌豆（Pisum sativum L.），又名畢豆、國(guó)豆、荷蘭豆、麥豆等[1]，種質(zhì)資源豐富、來(lái)源廣、產(chǎn)量高、價(jià)格低，是我國(guó)重要的食用豆類(lèi)之一，具有糧食、蔬菜、飼料及醫(yī)藥等多種用途。豌豆含有豐富的蛋白（20%～24%，高于豇豆、綠豆）、淀粉、維生素、礦物質(zhì)和多種人體必需氨基酸[2]，且賴(lài)氨酸、色氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸等必需氨基酸比例均衡，含量（高于蠶豆和大豆）均符合聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織與世界衛(wèi)生組織所推薦的標(biāo)準(zhǔn)模式[3]。豌豆可以加工成多種食品，如速溶豌豆粉、豌豆醬等，主要用于制作粉絲（主要成分為淀粉）；豌豆也被加工成各類(lèi)休閑食品，廣受歡迎。同時(shí)，豌豆品種中胰蛋白酶抑制劑（trypsin inhibitor，TI）含量也較高。Hobday等[4]研究發(fā)現(xiàn)在無(wú)菌環(huán)境中發(fā)芽的豌豆種子中含有能夠抑制胰蛋白酶活性的蛋白成分。Howard[5]發(fā)現(xiàn)新西蘭豌豆栽培品種中的TI有3～9 種亞型。TI結(jié)構(gòu)與大豆結(jié)構(gòu)相似，存在6 種亞型，分子質(zhì)量為6.8～7.9 kD[6]。Clemente等[7]研究指出，TI的一種亞型能劑量依賴(lài)性地抑制人體早期結(jié)腸癌細(xì)胞HT29，這對(duì)研究TI亞基特定性功能有一定的參考價(jià)值。Wang Xiaofang等[8]報(bào)道在加拿大5 個(gè)地區(qū)種植的17 個(gè)豌豆品種中的TI活性品種間差異顯著，這為在不同地區(qū)篩選優(yōu)質(zhì)豌豆提供指導(dǎo)意義。TI的傳統(tǒng)粗提取主要是通過(guò)磁力攪拌浸提數(shù)小時(shí)后進(jìn)行熱變性處理、硫酸銨分級(jí)沉淀或等電點(diǎn)聚沉、納濾膜超濾等方法除雜蛋白得粗提液。付煊赫[9]以正交試驗(yàn)法研究發(fā)現(xiàn)鷹嘴豆TI的最佳提取工藝為pH 4.0，提取料液比1∶40，50 ℃浸提1.5 h。梁雪華等[10]以響應(yīng)面法優(yōu)化大豆TI粗提工藝。然而，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)TI的研究多集中于大豆、綠豆及紅小豆等少數(shù)幾類(lèi)，對(duì)TI的研究還鮮有報(bào)道，并且TI的粗提方式主要為磁力攪拌浸提，耗時(shí)較長(zhǎng)。

TI泛指具有抑制胰蛋白酶活性作用的小分子蛋白或多肽，在動(dòng)植物等生命體內(nèi)廣泛存在，是自然界中含量最為豐富的蛋白種類(lèi)之一。TI可與機(jī)體內(nèi)相應(yīng)的蛋白水解酶形成動(dòng)態(tài)平衡體系，參與調(diào)節(jié)眾多重要的生命活動(dòng)[11]。植物儲(chǔ)藏器官，如種子、果實(shí)、塊莖中含有相對(duì)較多的TI。TI是一種抗?fàn)I養(yǎng)因子[12]，能與食道中的胰蛋白酶結(jié)合從而影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收；然而TI也是一種重要的生理活性蛋白，參與調(diào)控眾多機(jī)體生理代謝活動(dòng)，如降血糖[13-14]、抑癌消炎[15-16]、輻射保護(hù)[17]、抗病蟲(chóng)[18]等，應(yīng)用前景良好。鑒于TI的雙重功效，使其在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)及食品科技等領(lǐng)域有了越來(lái)越多的應(yīng)用，因此針對(duì)不同豆類(lèi)TI在醫(yī)學(xué)及營(yíng)養(yǎng)學(xué)等領(lǐng)域的研究有著重大意義。

超聲波提取法是一種優(yōu)良的提取方法，因其操作簡(jiǎn)單、方便、能耗低，已經(jīng)被廣泛運(yùn)用于天然植物的生物堿、多糖、苷類(lèi)及蛋白質(zhì)等有效成分的提取。超聲輔助提取法主要是利用超聲波具有的機(jī)械效應(yīng)、空化效應(yīng)及熱效應(yīng)，通過(guò)增大介質(zhì)分子的運(yùn)動(dòng)速度、加大介質(zhì)的穿透力即能夠破壞植物細(xì)胞壁，使溶劑易于滲入細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)而提高生物有效成分的提取效率[19]。響應(yīng)面法是在試驗(yàn)設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上，通過(guò)試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)，建立數(shù)學(xué)模型來(lái)快速有效地確定多因子系統(tǒng)的最佳條件，由于采取了更為合理的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，能以最為經(jīng)濟(jì)的方式對(duì)試驗(yàn)進(jìn)行全面研究，該法已廣泛地應(yīng)用于食品工業(yè)、化學(xué)化工等方面的研究[20-22]，然而利用響應(yīng)面法來(lái)優(yōu)化超聲輔助提取豌豆TI粗提工藝的研究鮮有報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

豌豆為成豌8號(hào)，收獲年份2016年，來(lái)自四川農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，旋風(fēng)磨研磨，置于4 ℃冰箱中備用。

苯甲酰-DL-精氨酸-對(duì)硝基酰胺鹽（Nα-benzoyl-DL-arginine 4-nitroanilide hydrochloride，BAPNA）、胰蛋白酶（酶活力大于250 NFU/mg） 美國(guó)Sigma公司；Tris、無(wú)水氯化鈣、二甲基亞砜等試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

1093 CYCLOTEC旋風(fēng)磨 瑞典Foss公司；全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀 賽默飛世爾公司；KQ-500E型超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司；多管旋渦混合儀 杭州米歐儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 豌豆TI的提取

TI的提取采用超聲波輔助水浸提取法。

1.3.2 豌豆TI含量的測(cè)定

TI含量的測(cè)定參照文獻(xiàn)[23-24]進(jìn)行，胰蛋白酶可催化水解BAPNA，引起410 nm波長(zhǎng)處吸光度的增加，而TI可抑制胰蛋白酶的活性，使410 nm波長(zhǎng)處吸光度增加的幅度有所減少，以其減少的程度表示此抑制劑的抑制能力，從而計(jì)算抑制活性。

溶液配制：Tris-HCl緩沖液：0.222 g CaCl2溶于100 mL 0.05 mol/L、pH 8.2 Tris-HCl緩沖液；BAPNA溶液（現(xiàn)用現(xiàn)配）：先以0.5 mL二甲基亞砜溶解0.02 g BAPNA，再用已預(yù)熱37 ℃的Tris-HCl緩沖液定容至50 mL；胰蛋白酶溶液：0.004 g胰蛋白酶用0.001 mol/L的HCl溶液溶解并定容至50 mL；30%乙酸溶液：分別量取30 mL冰乙酸及70 mL蒸餾水，混勻。

微反應(yīng)板上依次加入50 μL樣品液、50 μL胰蛋白酶液，37 ℃保溫10 min后，加入125 μL BAPNA溶液，37 ℃保溫30 min，加入25 μL乙酸溶液終止反應(yīng)。在410 nm波長(zhǎng)處用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度[25]。豌豆胰蛋白酶抑制活性單位定義為：在上述反應(yīng)條件下能夠抑制1 mg胰蛋白酶活性所需要的TI量為1個(gè)活性單位（TIU）。

1.3.3 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果，以超聲時(shí)間、超聲溫度、料液比、超聲功率設(shè)計(jì)四因素三水平響應(yīng)面試驗(yàn)，確定成豌8號(hào)中TI最佳提取條件。響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平見(jiàn)表1。

表1 Box-Behnken試驗(yàn)因素與水平Table 1 Coded levels and corresponding actual levels of independent variables used in Box-Behnken design

2 結(jié)果與分析

2.1 豌豆TI超聲粗提單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 樣品顆粒度選擇

圖1 樣品顆粒度對(duì)TI總活性的影響Fig. 1 Effect of sample granularity on trypsin inhibitory activity

控制反應(yīng)條件為超聲頻率40 kHz、超聲功率300 W、超聲時(shí)間10 min、超聲溫度40 ℃、料液比1∶100，考察以孔徑為40、60、80、100 目篩網(wǎng)對(duì)樣品進(jìn)行分級(jí)過(guò)篩，并測(cè)定TI的總活性。由圖1可知，隨著豆粉篩網(wǎng)目數(shù)的增加，TI總活性也增加，當(dāng)豆粉篩網(wǎng)目數(shù)為80目時(shí)TI總活性最大，當(dāng)篩網(wǎng)目數(shù)大于80目時(shí)，TI總活性下降。成豌8號(hào)含油量低，粉碎過(guò)篩徹底，成豌8號(hào)過(guò)40目篩網(wǎng)所得樣品顆粒包含了絕大部分的種皮顆粒物，因而TI總活性相對(duì)較低。因此選擇豆粉顆粒度最佳為過(guò)80目篩網(wǎng)。

2.1.2 超聲頻率選擇

圖2 超聲頻率對(duì)TI總活性的影響Fig. 2 Effect of ultrasonic frequency on trypsin inhibitory activity

控制反應(yīng)條件為樣品過(guò)80目孔徑篩網(wǎng)、超聲功率300 W、超聲時(shí)間10 min、超聲溫度40 ℃、料液比1∶100，考察在超聲頻率為20、40、80 kHz時(shí)TI總活性。由圖2可知，超聲頻率為20 kHz和40 kHz時(shí)，豌豆TI總活性提高且存在顯著差異，超聲頻率為40 kHz和80 kHz時(shí)，二者TI總活性不存在顯著差異。因此，選擇40 kHz作為最佳超聲頻率。

2.1.3 超聲功率選擇

圖3 超聲功率對(duì)TI總活性的影響Fig. 3 Effect of ultrasonic power on trypsin inhibitory activity

控制反應(yīng)條件為樣品過(guò)80目孔徑篩網(wǎng)、超聲頻率40 kHz、超聲時(shí)間10 min、超聲溫度40 ℃、料液比1∶100，考察在超聲功率為200、300、400、500、600 W時(shí)提取的TI總活性。由圖3可知，隨著超聲功率的增加，豌豆TI的總活性也升高，當(dāng)超聲頻率達(dá)到500 W時(shí)，TI總活性達(dá)到最大；但超聲功率過(guò)大反而引起TI總活性下降，說(shuō)明超聲功率對(duì)TI總活性的影響是雙向的，既存在正效應(yīng)又存在負(fù)效應(yīng)。超聲波在提取液中產(chǎn)生的空化效應(yīng)和機(jī)械作用可以有效地破碎植物細(xì)胞壁，使有效成分呈游離狀態(tài)并溶入提取溶劑。因此，一定功率時(shí)可促進(jìn)TI的提??；當(dāng)功率過(guò)高時(shí)，TI會(huì)在超聲的作用下分解，同時(shí)，也會(huì)使更多的脂溶性物質(zhì)溶入提取液中，影響后期TI的純化。試驗(yàn)中應(yīng)避免超聲波功率過(guò)大而引起TI總活性的下降，同時(shí)超聲功率升高會(huì)引起溫度升高。因此，選擇500 W作為最優(yōu)超聲功率。

2.1.4 超聲時(shí)間選擇

圖4 超聲時(shí)間對(duì)TI總活性的影響Fig. 4 Effect of ultrasonic radiation time on trypsin inhibitory activity

控制反應(yīng)條件為樣品過(guò)80目孔徑篩網(wǎng)、超聲頻率40 kHz、超聲功率500 W、超聲溫度40 ℃、料液比1∶100，考察在超聲時(shí)間為5、9、13、17、21、25 min時(shí)提取的TI總活性。由圖4可知，隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，豌豆TI的溶出量增加。當(dāng)超聲時(shí)間為13 min時(shí)，TI總活性達(dá)到最大，但13 min后，超聲時(shí)間的延長(zhǎng)反而使TI總活性下降，這是因?yàn)槌晻r(shí)間的延長(zhǎng)增加了超聲波作用的強(qiáng)度，不僅破壞細(xì)胞壁，而且破壞了豌豆TI的高級(jí)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致TI總活性下降[26]。粗提液中蛋白變性也可能是由于氣泡的融合及氣液層對(duì)蛋白分子的吸附作用[27]。因此，選擇13 min作為最優(yōu)超聲時(shí)間。

2.1.5 超聲溫度選擇

圖5 超聲溫度對(duì)TI總活性的影響Fig. 5 Effect of ultrasonic temperature on trypsin inhibitory activity

控制反應(yīng)條件為樣品過(guò)80目孔徑篩網(wǎng)、超聲頻率40 kHz、超聲功率500 W、超聲時(shí)間13 min、料液比1∶100，考察在常溫對(duì)照（CK）和超聲溫度30、40、50、60、70 ℃時(shí)提取的TI總活性。由圖5可知，隨著超聲溫度的升高，使細(xì)胞壁滲透性增強(qiáng)，同時(shí)增加提取物的擴(kuò)散系數(shù)和溶解度，降低溶劑黏度，使更多的豌豆TI溶于溶劑中，繼而豌豆TI總活性逐漸升高，當(dāng)超聲時(shí)間升到40 ℃時(shí)，TI總活性達(dá)到最大，隨著超聲溫度的進(jìn)一步升高，TI總活性出現(xiàn)下降的趨勢(shì)，超聲的熱效應(yīng)使提取溫度隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸上升，溫度過(guò)高導(dǎo)致部分TI蛋白變性失活、內(nèi)部的氧化還原及聚合反應(yīng)，同時(shí)容易造成溶劑揮發(fā)損失及豆粉中其他成分溶解度的增大，從而影響TI總活性的測(cè)定。因此，選擇40 ℃作為最優(yōu)超聲時(shí)間。

2.1.6 料液比選擇

圖6 料液比對(duì)TI總活性的影響Fig. 6 Effect of solid-to-liquid ratio on trypsin inhibitory activity

控制反應(yīng)條件為樣品過(guò)80目孔徑篩網(wǎng)、超聲頻率40 kHz、超聲功率500 W、超聲時(shí)間13 min、超聲溫度40 ℃，考察料液比在1∶40、1∶60、1∶80、1∶100、1∶120、1∶140時(shí)提取的TI總活性。由圖6可知，隨著溶劑用量的增加，從細(xì)胞內(nèi)到溶劑之間擴(kuò)散的濃度梯度增大，豌豆TI浸提量增加，但溶劑用量達(dá)到一定程度時(shí)，豌豆種子中TI接近全部溶出，再增加溶劑用量反而使TI總活性下降，可能是因?yàn)槎狗壑幸恍┢渌镔|(zhì)如多糖溶解，妨礙了TI提取分離。溶劑用量增大在一定程度上提高傳質(zhì)推動(dòng)力，但從提取效果、減少溶劑用量、降低能耗等方面綜合考慮，溶劑用量也不宜過(guò)大。當(dāng)料液比為1∶80時(shí)，TI總活性達(dá)到最大，因此，選擇1∶80作為最優(yōu)料液比。

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Experimental design and results for response surface analysis

通過(guò)Design-Expert 8.0.6軟件對(duì)表2的數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，獲得編碼自變量超聲時(shí)間（A）、超聲溫度（B）、料液比（C）、超聲功率（D）對(duì)TI總活性（Y）的二次多項(xiàng)回歸方程：Y=514.16-15.74A+8.94B+ 30.26C-17.76D+24.16AB+23.15AC-4.29AD+8.90BC-11.36BD+17.79CD-23.01A2-3.14B2+9.95C2-17.72D2。對(duì)該回歸模型及系數(shù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 方差分析Table 3 Analysis of variance for the fitted regression model

由表3可知，一次項(xiàng)A、C、D對(duì)結(jié)果的影響極顯著（P＜0.01）；B對(duì)結(jié)果的影響顯著（P＜0.05）；AB、AC、CD交互作用極顯著（P＜0.01）；二次項(xiàng)A2、D2影響極顯著（P＜0.01）；C2影響顯著（P＜0.05）；失擬項(xiàng)不顯著（P＞0.05）。模型調(diào)整確定系數(shù)R2Adj為0.886 4，說(shuō)明模型能解釋88.64%響應(yīng)值的變化，擬合程度較好；因變量與所考察自變量之間的復(fù)相關(guān)系數(shù)R2為0.9432，說(shuō)明該模型擬合程度較好[28-29]，試驗(yàn)誤差小，可用該回歸方程代替真實(shí)點(diǎn)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。由表3還可知，各因素對(duì)TI總活性影響程度的大小順序?yàn)椋毫弦罕龋境暪β剩境晻r(shí)間＞超聲溫度。

根據(jù)回歸模型，得出TI總活性最高的優(yōu)化組合為超聲時(shí)間15.91 min、超聲溫度50 ℃、料液比1∶100 （g/mL）、超聲功率459.14 W，TI總活性的理論最高值為582.80 TIU/g。

在回歸模型方差分析結(jié)果的基礎(chǔ)上，根據(jù)得到的回歸二次方程，做超聲時(shí)間、超聲溫度、料液比、超聲功率對(duì)TI總活性影響的響應(yīng)面圖，分析兩個(gè)因素交互作用對(duì)TI總活性的影響。從圖7可看出，每組因素交互作用下，TI總活性均有最大值，說(shuō)明各組交互作用對(duì)TI總活性有影響。響應(yīng)面的形狀可反映出各因素交互作用對(duì)TI總活性的影響，曲面越陡峭[30]，影響越顯著。

圖7 兩因素交互作用對(duì)TI總活性的響應(yīng)面圖Fig. 7 Response surface plot showing the effect of operating parameters on trypsin inhibitory activity

根據(jù)Box-Behnken模型預(yù)測(cè)響應(yīng)面優(yōu)化的最佳工藝條件，考慮到實(shí)際操作的可行性，將豌豆TI粗提條件調(diào)整為超聲時(shí)間16 min、超聲溫度50 ℃、料液比1∶100（g/mL）、超聲功率500 W，此時(shí)TI總活性為574.54 TIU/g。該值與理論值接近，說(shuō)明采用響應(yīng)面法優(yōu)化豌豆TI粗提工藝可行。

3 結(jié) 論

采用超聲輔助提取豌豆TI，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過(guò)響應(yīng)面Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)，建立了TI總酶活的二次多項(xiàng)式數(shù)學(xué)模型。優(yōu)化超聲提取豌豆TI的最佳工藝條件為超聲時(shí)間16 min、超聲溫度50 ℃、料液比1∶100 （g/mL）、超聲功率500 W，在此條件下實(shí)際測(cè)定的TI總活性為574.54 TIU/g，僅與響應(yīng)面理論預(yù)測(cè)值相差1.42%，說(shuō)明以上數(shù)學(xué)模型對(duì)豌豆TI的粗提條件的優(yōu)化具有可行性。豌豆種子中含有豐富的TI，采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化超聲輔助提取TI粗提工藝，較傳統(tǒng)的磁力攪拌浸提方法大大節(jié)省了提取時(shí)間，為T(mén)I的進(jìn)一步純化與利用提供重要參考。

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Optimization of Ultrasonic-Assisted Extraction of Trypsin Inhibitor from Pea Seeds by Response Surface Methodology

YU Hong’en1, LIU Hongkai2, KANG Yufan1,*
(1. College of Agronomy and Biotechnology, China Agricultural University, Beijing 100193, China; 2. Business School, University of Jinan, Jinan 250002, China)

The purpose of the current study was the optimization of the solvent extraction of trypsin inhibitor from pea seeds

with ultrasonic assistance. A sample granularity of 80 mesh, an ultrasonic frequency of 40 kHz, a radiation time of 13 min, an extraction temperature of 40 ℃, a solid-to-solvent ratio of 1:80 (g/mL), and an ultrasonic power of 500 W were determined to be optimal using one-factor-at-a-time method. Ultrasonic treatment time, extraction temperature, solid-to-solvent and ultrasonic power were taken as independent variables for further optimization by establishing a quadratic polynomial regression model to predict trypsin inhibitor activity using a Box-Behnken design and analyzing the model by response surface methodology. The final optimized extraction conditions were found to be 80 mesh, 40 kHz, 16 min, 50 ℃, 1:100 (g/mL) and 500 W for sample granularity, and ultrasonic frequency, ultrasonic treatment time, extraction temperature, 50 ℃and solid-to-solvent ratio, respectively. Under these conditions, the maximum trypsin inhibitor activity of 574.54 TIU/g was obtained experimentally, showing a relative error compared to the predicted value of 1.42%. The developed model exhibited an adjusted coefficient of determinationof 0.886 4 and a coefficient of determination (R2) of 0.943 2, indicating an excellent goodness of fit. The model is of great guidance significance.

pea; trypsin inhibitor; extraction; response surface methodology; ultrasonic

10.7506/spkx1002-6630-201714035

S529

A

1002-6630（2017）14-0227-06

俞紅恩, 劉紅開(kāi), 康玉凡. 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化豌豆胰蛋白酶抑制劑超聲粗提工藝[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(14): 227-232.

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201714035. http://www.spkx.net.cn

YU Hong’en, LIU Hongkai, KANG Yufan. Optimization of ultrasonic-assisted extraction of trypsin inhibitor from pea seeds by response surface methodology[J]. Food Science, 2017, 38(14): 227-232. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201714035. http://www.spkx.net.cn

2016-09-07

國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)（CARS-09-06B）

俞紅恩（1992—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橥愣挂鹊鞍酌敢种苿┨崛〖兓c特性。E-mail：15600912395@163.com

*通信作者：康玉凡（1963—），女，教授，博士，研究方向?yàn)榉N子生物學(xué)及豆類(lèi)芽菜理論與技術(shù)。E-mail：yfkang@cau.edu.cn