付永，劉浩

（1.長(zhǎng)沙市公安局刑偵支隊(duì)，湖南長(zhǎng)沙 410002；2.岳陽(yáng)市公安局刑偵支隊(duì)，湖南岳陽(yáng) 414000）

·研究簡(jiǎn)報(bào)·

GoldeneyeTM DNA身份鑒定系統(tǒng)22NC在回族人群的法醫(yī)學(xué)調(diào)查

付永1，劉浩2

（1.長(zhǎng)沙市公安局刑偵支隊(duì)，湖南長(zhǎng)沙 410002；2.岳陽(yáng)市公安局刑偵支隊(duì)，湖南岳陽(yáng) 414000）

法醫(yī)遺傳學(xué)；多態(tài)現(xiàn)象，遺傳；短串聯(lián)重復(fù)序列；回族

STR基因座及毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)是目前法醫(yī)遺傳學(xué)中最常用的遺傳標(biāo)記及技術(shù)檢測(cè)手段[1]。目前市場(chǎng)上用于法醫(yī)學(xué)個(gè)體識(shí)別及親權(quán)鑒定的試劑盒主要納入的STR基因座為CODIS基因座及歐洲標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)數(shù)據(jù)庫(kù)（European Standard Set，ESS）核心STR基因座。本研究采用的GoldeneyeTMDNA身份鑒定系統(tǒng)22NC共包含20個(gè)非CODIS基因座（D19S253、D6S477、D22-GATA198B05、D15S659、D8S1132、D3S3045、D14S608、D17S1290、D3S1744、D2S441、D18S535、D13S325、D7S1517、D10S1435、D11S2368、D4S2366、D1S1656、D7S3048、D10S1248、D5S2500）、1個(gè)CODIS基因座D3S1358和性別基因座Amelogenin。其中，CODIS基因座D3S1358包含于日常檢案工作常用的STR檢測(cè)試劑盒中，該基因座的存在可以便于試劑盒之間結(jié)果的交叉驗(yàn)證，其余20個(gè)非CODIS基因座在突變及疑難案件中可以起到補(bǔ)充檢測(cè)的作用[2]。

據(jù)史料記載[3]，公元十四世紀(jì)中葉以后，眾多的回族人相繼沿著陸路和水路進(jìn)入素稱(chēng)“魚(yú)米之鄉(xiāng)”的楚湖之地，在湖南主要分布于常德市和邵陽(yáng)市。為進(jìn)一步規(guī)范法醫(yī)遺傳學(xué)在實(shí)際案件工作中的開(kāi)展及豐富相關(guān)群體的遺傳學(xué)數(shù)據(jù)，本研究針對(duì)長(zhǎng)沙市100名回族健康無(wú)關(guān)個(gè)體，采用GoldeneyeTMDNA身份鑒定系統(tǒng)22NC進(jìn)行分型檢測(cè)及統(tǒng)計(jì)分析，以期獲取21個(gè)STR基因座的應(yīng)用基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本

收集長(zhǎng)沙市100名回族健康無(wú)關(guān)個(gè)體的血樣，其中男性50名，女性50名。對(duì)每名志愿者均進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)告知，并簽署知情同意書(shū)。

1.2 主要試劑與儀器

GoldeneyeTMDNA身份鑒定系統(tǒng)22NC［基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)（北京）有限公司］，甲酰胺（美國(guó)Thermo Fisher公司）；9700型PCR擴(kuò)增儀、3130xl型基因分析儀（美國(guó)Thermo Fisher公司）。

1.3 PCR擴(kuò)增和STR分型

采用Chelex-100法進(jìn)行血樣DNA的提取[4]。采用10 μL體積進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系包括：2.5× PCR反應(yīng)緩沖液Ⅱ4 μL，5×22NC引物混合物2μL，Taq聚合酶0.2μL，模板DNA（0.5～2ng），去離子水補(bǔ)足至10 μL。在9700型PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為：95℃預(yù)變性11min；94℃30s，60℃60 s，70℃60s，30個(gè)循環(huán)；60℃延伸30min；15℃保溫。

PCR產(chǎn)物變性后在3130xl型基因分析儀上進(jìn)行毛細(xì)管電泳，用GeneMapper?ID v3.2.1軟件對(duì)STR基因座進(jìn)行分型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用PowerMarker v3.25軟件對(duì)21個(gè)常色體STR基因座進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)和等位基因分布頻率的計(jì)算；應(yīng)用Cervus v2.0軟件進(jìn)行雜合度（H）、個(gè)體識(shí)別率（DP）、二聯(lián)體非父排除率（PEduo）、三聯(lián)體非父排除率（PEtrio）和多態(tài)信息含量（PIC）等群體遺傳學(xué)參數(shù)的計(jì)算。

2 結(jié)果與討論

經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，21個(gè)基因座的檢驗(yàn)P值均大于0.05，等位基因頻率分布見(jiàn)表1，群體遺傳學(xué)參數(shù)見(jiàn)表2。

21個(gè)STR基因座中共檢出193個(gè)等位基因，其中在D1S1656基因座檢出的等位基因數(shù)目最多（13個(gè)）。21個(gè)基因座中，H值最小為0.7350（D3S1358），最大為0.8891（D7S3048）；DP值最小為0.8674（D2S441），最大為0.9632（D7S3048）；PIC最小為0.6772（D3S1358），最大為0.8671（D7S3048）。對(duì)21個(gè)STR基因座分別進(jìn)行了二聯(lián)體和三聯(lián)體案件中非父排除率的計(jì)算（表2），經(jīng)t檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)參數(shù)之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0001）。經(jīng)連鎖不平衡檢驗(yàn)，GoldeneyeTMDNA身份鑒定系統(tǒng)22NC中21個(gè)常染色體STR基因座之間相互獨(dú)立，采用乘積定律計(jì)算，累積個(gè)體識(shí)別率為1-1.41×10-24，二聯(lián)體累積非父排除率為1-4.17×10-6，三聯(lián)體累積非父排除率為1-1.51×10-9。以上多態(tài)信息數(shù)據(jù)均表明，該試劑盒中含有的21個(gè)STR基因座在回族人群中信息含量豐富，可作為補(bǔ)充試劑盒，對(duì)實(shí)際檢案及相關(guān)科研工作具有應(yīng)用價(jià)值。

表1 21個(gè)STR基因座在回族人群中的等位基因頻率分布（n=100）

表2 21個(gè)STR基因座在回族人群中的群體遺傳學(xué)參數(shù)（n=100）

[1]Butler JM.Advanced topics in forensic DNA typing：Methodology[M].Boston：Academic Press，2011.

[2]林源，闕庭志，趙珍敏，等.GoldeneyeTMDNA身份鑒定系統(tǒng)22NC試劑盒的法醫(yī)遺傳學(xué)調(diào)查[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2015，31（4）：280-283.

[3]馬亮生.湖南回族的來(lái)源與變遷[J].寧夏社會(huì)科學(xué)，1988，（1）：24-26.

[4]Walsh PS，Metzger DA，Higuchi R.Chelex 100 as a medium for simple extraction of DNA for PCR-based typing from forensic material[J].Biotechniques，1991，10（4）：506-513.

DF795.2

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2017.03.019

1004-5619（2017）03-0304-03

2016-10-31）

（本文編輯：張素華）

付永（1981—），男，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)物證學(xué)研究；E-mail：767390258＠qq.com