楊銀忠，張建英，程文霞，肖慈然

（四川省人民醫(yī)院 城東病區(qū)，四川 成都 610101）

血液 HSP90α、CEA、NSE、CYFRA21-1 及
SCCA聯(lián)合檢測對肺癌的診斷價(jià)值研究

楊銀忠，張建英，程文霞，肖慈然

（四川省人民醫(yī)院 城東病區(qū)，四川 成都 610101）

目的 評價(jià)血液熱休克蛋白90α（HSP90α）、癌胚抗原（CEA）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、細(xì)胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）及鱗狀細(xì)胞癌抗原（SCCA）在肺癌（LC）中的診斷價(jià)值。方法將LC患者分為鱗癌（LAC）、腺癌（LSC）及小細(xì)胞癌（SCLC）3組，比較各組標(biāo)志物。結(jié)果SCLC組HSP90α、CEA、NSE及CYFRA21-1較對照組增高，HSP90α高于LAC組和LSC組；LAC組HSP90α、NSE、CYFRA21-1及SCCA較對照組增高，SCCA高于SCLC組和LSC組；LSC組HSP90α和CEA較對照組增高；HSP90α的受試者工作特征曲線下面積最大。串聯(lián)分析HSP90α+NSE+CYFRA21-1可提高SCLC的特異性、陽性預(yù)測值及正確分類率，HSP90α+NSE+CYFRA21-1+SCCA和HSP90α+CEA可分別提高LAC、LSC的特異性和陽性預(yù)測值，正確分類率為理想水平。結(jié)論HSP90是篩查LC的理想指標(biāo)；聯(lián)合檢測HSP90α等5種標(biāo)志物有助于LC的分層診斷。

熱休克蛋白90α；癌胚抗原；神經(jīng)元特異性烯醇化酶；細(xì)胞角蛋白19片段；鱗狀細(xì)胞癌抗原；肺癌

肺癌（lung cancer，LC）是威脅人類健康的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢[1-2]。血液腫瘤標(biāo)志物能夠簡單、快速地輔助LC診斷，但單項(xiàng)指標(biāo)缺乏足夠的敏感性和特異性。本研究通過觀察LC患者熱休克蛋白（heat shock protein 90α，HSP90α）、癌胚抗原 （carcinoembryonic antigen，CEA）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）、細(xì)胞角蛋白 19片段（cytokeratin-19-fragment，CYFRA21-1）及鱗狀細(xì)胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCCA）在血液中的水平，探討聯(lián)合檢測在LC分層診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2016年1月-2016年10月四川省人民醫(yī)院門診和住院的LC患者124例，依據(jù)中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范（2015年版）中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，分為：①小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）組 16 例，男性10例，年齡（59.2±11.3）歲；女性6例，年齡（56.0±6.4）歲。②肺鱗癌（lung squamous cell carcinoma，LSC）組 22例，男性 16例，年齡（63.5±9.1）歲；女性 6例，年齡（67.0±4.6）歲。③肺腺癌（lung adenocarcinoma，LAC）組 86例，男性 40例，年齡（60.9±9.7）歲；女性46例，年齡（60.2±9.4）歲。隨機(jī)選擇96例對照組，包括本院同期52例非肺癌的肺部疾病（non-lung cancer，NLC）患者，男性 34例，年齡（53.4±13.3）歲；女性 18例，年齡（55.8±12.2）歲，以及44例表觀健康體檢者，男性28例，年齡（51.3±10.3）歲；女性 16例，年齡（50.8±11.2）歲。NLC患者為同期檢查排除LC的肺部疾病患者。本研究中的LC患者均為初診患者，未接受過任何放療、化療及靶向治療，無重要臟器病變及其他器官腫瘤疾病史。

1.2 儀器與試劑

DG5031型酶標(biāo)儀（上海京工實(shí)業(yè)有限公司），HSP90α試劑及校準(zhǔn)品（山東省煙臺市普羅吉生物科技發(fā)展有限公司），Cobas e601型電化學(xué)發(fā)光儀（瑞士Roche公司），NSE試劑及校準(zhǔn)品等均為瑞士Roche公司配套產(chǎn)品，Architecti 2000 SR型微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（美國Abbott公司），CEA、CYFRA21-1及SCCA試劑及校準(zhǔn)品等均為美國Abbott公司配套產(chǎn)品。

1.3 研究方法

各組樣本均于清晨空腹采集EDTA-K2抗凝血2.0 ml、無添加抗凝劑靜脈血4.0 ml，30 min內(nèi)分離出血漿或血清，4000r/min離心5min，分別放置于-80℃冰箱冷凍保存。待樣本收集齊后，將血清統(tǒng)一解凍，離心取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測HSP90α，電化學(xué)發(fā)光法檢測NSE，化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法檢測CEA、CYFRA21-1及SCCA。所有操作均嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行，并有嚴(yán)格的質(zhì)量控制措施。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組比較用方差分析，兩兩比較用SNK-q檢驗(yàn)，利用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）找出最佳臨床診斷臨界點(diǎn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4 組 HSP90α、CEA、NSE、CYFRA21-1 及SCCA水平比較

4組 HSP90α、CEA、NSE、CYFRA21-1及 SCCA水平比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。SCLC 組 HSP90α、CEA、NSE 及 CYFRA21-1與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），SCLC組HSP90α 水平高于 LAC組和 LSC組，CEA高于LAC組，NSE高于LSC組，CYFRA21-1低于LAC組；LAC 組 HSP90α、NSE、CYFRA21-1及 SCCA 與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），LAC組SCCA水平高于SCLC組和LSC組；LSC組HSP90α和CEA水平與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表 1。

2.2 5種血液腫瘤標(biāo)志物對LC的診斷效能

LC組HSP90α、CEA、NSE、CYFRA21-1及SCCA的曲線下面積（area under curve，AUC）與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），各組ROC的AUC分別為 0.887、0.788、0.724、0.764、0.621 和 0.621，HSP 90α的AUC最大，對LC的診斷能力最強(qiáng)；將敏感性和1-特異性最大值所對應(yīng)的分界點(diǎn)為臨床診斷臨界點(diǎn)，分別為 66.3、3.8、15.3、1.8 和 1.1ng/ml。見表 2 和附圖。

2.3 串聯(lián)分析5種血液腫瘤標(biāo)志物對LC的診斷效率

分別以ROC曲線圖中的臨床診斷臨界點(diǎn)作為界值，即 HSP90α＞66.3 ng/ml，CEA＞3.8 ng/ml，NSE＞15.3 ng/ml，CYFRA21-1＞1.8 ng/ml及 SCCA＞1.1 ng/ml判斷為陽性，采用串聯(lián)分析，選取腫瘤標(biāo)志物在3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分別進(jìn)行不同組合，組合中各項(xiàng)目均陽性才判斷為陽性。串聯(lián)分析后HSP90α+NSE+CYFRA21-1組合可提高SCLC的特異性、陽性預(yù)測值、陽性似然比及正確分類率，HSP90α+NSE+CYFRA21-1+SCCA組合可提高LAC的特異性、陽性預(yù)測值及陽性似然比，正確分類率較為理想水平；HSP90α+CEA組合可提高LSC的特異性、陽性預(yù)測值及陽性似然比，正確分類率為理想水平。見表3～5。

表1 4組HSP90α、CEA、NSE、CYFRA21-1 及 SCCA 水平比較 （ng/ml，±s）

表1 4組HSP90α、CEA、NSE、CYFRA21-1 及 SCCA 水平比較 （ng/ml，±s）

注：1）與對照組比較，P＜0.05；2）與 NLC 組比較，P＜0.05；3）與 LAC 組比較，P＜0.05；4）與 LSC 組比較，P＜0.05；5）與 SCLC 組比較，P＜0.05

組別SCCA對照組（n=44） 33.0±7.8 1.6±0.7 10.6±2.2 1.1±0.3 0.6±0.1 NLC 組（n=52） 48.2±18.0 2.5±1.6 15.8±5.3 1.6±1.2 0.7±0.3 SCLC 組（n=16） 222.0±290.01）2）3）4） 39.1±72.01）2）3） 38.7±33.91）2）4） 4.8±5.71）2）4） 1.1±1.4 LAC 組（n=22） 93.7±53.01）2）4） 5.0±2.6 27.6±22.21）2） 5.2±4.41）2） 2.5±1.91）2）4）5）LSC 組（n=86） 82.0±30.61）2） 13.9±35.51）2） 18.3±17.4 2.1±1.3 0.9±1.0 F值 9.323 3.141 5.682 9.474 8.921P值 0.000 0.018 0.000 0.000 0.000 HSP90αCEA NSE CYFRA21-1

表2 5種血液腫瘤標(biāo)志物的診斷效能

附圖 5種血液腫瘤標(biāo)志物的ROC曲線

表3 HSP90α、CEA、NSE、及CYFRA21-1對SCLC的診斷效率

表4 HSP90α、NSE、CYFRA21-1及SCCA對LAC的診斷效率

表5 HSP90α和CEA對LSC的診斷效率

3 討論

據(jù)2014年全國腫瘤登記中心發(fā)布數(shù)據(jù)表明，近年來我國LC發(fā)病率為35.23/10萬，占惡性腫瘤新發(fā)病例的19.59%；死亡率為27.93/10萬，占惡性腫瘤死因的24.87%，均居惡性腫瘤首位[2]。LC多不易診斷，常因發(fā)病隱匿和早期無明顯癥狀等而延誤。目前腫瘤標(biāo)志物已廣泛用于LC的早期篩查和診斷，但缺乏較高的敏感性或特異性。

HSP90是一種高度保守、腺嘌呤核苷三磷酸依賴的，以及具有分子伴侶功能的蛋白質(zhì)，其在細(xì)胞內(nèi)與多種細(xì)胞周期信號通路中的關(guān)鍵蛋白酶相互作用，調(diào)控細(xì)胞的生存、分化及代謝等重要生理過程[3-4]。正常生理狀態(tài)下HSP9α不向細(xì)胞外分泌，當(dāng)發(fā)生應(yīng)激或惡變時(shí)，可以被腫瘤細(xì)胞主動分泌到細(xì)胞外而發(fā)揮作用[4-7]。2009年WANG等[8]首次發(fā)現(xiàn)HSP90α在LC患者血液中高表達(dá)，血漿含量與LC惡性程度呈正相關(guān)，并可作為腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行早期篩查。本研究表明，SLSC組、LAC組及LSC組HSP90α水平高于對照組和NLC組，再結(jié)合ROC曲線結(jié)果表明，HSP90是早期篩查LC比較理想的指標(biāo)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致，但特異性不高[6-8]。CEA是一種酸性糖蛋白，是腫瘤細(xì)胞自身產(chǎn)生最廣泛應(yīng)用的腫瘤標(biāo)志物，在LC中也高表達(dá)，尤其是在LSC中。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LSC組和SCLC組的CEA水平高于對照組和NLC組，與上述報(bào)道基本一致，但特異性均不理想[6-9]。NSE是糖酵解酶中關(guān)鍵酶，存在神經(jīng)及神經(jīng)來源的細(xì)胞中，在起源于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的腫瘤組織中高表達(dá)，是SCLC特異的標(biāo)志物[10]。TANG等[11]發(fā)現(xiàn)，血清NSE水平對SCLC有早期診斷價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)符合國內(nèi)外研究結(jié)果，但特異性均不高。CYFRA21-1是細(xì)胞角蛋白19的片段，存在上皮細(xì)胞腫瘤中，當(dāng)腫瘤細(xì)胞壞死和溶解時(shí)釋放入血，導(dǎo)致血清升高；張毅敏等[12]的報(bào)道與本研究均為LAC組較高，但本實(shí)驗(yàn)SCLC組也較高，可能與SCLC組收集的病例數(shù)較少有關(guān)。SCCA是鱗狀上皮細(xì)胞來源腫瘤的血清標(biāo)志物，在診斷LAC中很有意義，本研究中LAC組SCCA水平高于對照組、NLC組、SCLC組及LSC組，且4組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，敏感性不高[13]。

ROC曲線可客觀、準(zhǔn)確地反映檢測指標(biāo)的敏感性和特異性，AUC越接近1.0，其診斷的準(zhǔn)確性越好，越接近0.5其診斷的準(zhǔn)確性越差，本研究5項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物AUC結(jié)果均＜0.9，因此需要多項(xiàng)指標(biāo)血液腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測才能為疾病的初步診斷提供依據(jù)。根據(jù)5項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物在LC不同病理組中的檢測水平，SCLC組HSP90α、CEA、NSE及CYFRA21-1，LAC 組 HSP90α、NSE、CYFRA21-1 及 SCCA，LSC組HSP90α和CEA水平與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。串聯(lián)分析SCLC組的HSP90α、CEA、NSE及CYFRA21-1后發(fā)現(xiàn)，HSP90α+NSE+CYFRA21-1組合可提高SCLC的特異性（100.0%）、陽性預(yù)測值（100.0%）及正確分類率（96.4%）；串聯(lián)分析LAC組的 HSP90α、NSE、CYFRA21-1 及 SCCA 后發(fā)現(xiàn)，HSP90α+NSE+CYFRA21-1+SCCA組合可提高LAC的特異性（100.0%）和陽性預(yù)測值（100.0%），正確分類率（86.1%）為理想水平；串聯(lián)分析LSC組的HSP90α和CEA后發(fā)現(xiàn)，HSP90α+CEA組合可提高LSC的特異性（97.9%）和陽性預(yù)測值（94.1%），正確分類率（69.2%）為理想水平。表明HSP90α+NSE+CYFRA21-1組合、HSP90α+NSE+CYFRA21-1+SCCA組合及HSP90α+CEA組合分別對SCLC、LAC及LSC有較高的診斷價(jià)值。

綜上所述，HSP90是篩查LC的理想指標(biāo)，但與CEA、NSE、CYFRA21-1及SCCA血液腫瘤標(biāo)志物一樣，特異性均不理想。采用串聯(lián)分析5項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物后，組合的選擇雖然降低敏感性，但是提高特異性。因此根據(jù)LC不同病理類型的各自特點(diǎn)，選擇合適的檢測組合有助于LC的分層診斷。

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（童穎丹 編輯）

Value of blood HSP90α,CEA,NSE,CYFRA21-1 and SCCA in diagnosis of lung cancer

Yin-zhong Yang,Jian-ying Zhang,Wen-xia Cheng,Ci-ran Xiao
(The East Ward,Sichuan Provincial People's Hospital,Chengdu,Sichuan 610101,China)

ObjectiveTo evaluate the value of HSP90α,carcinoembryonic antigen (CEA),neuron-specific enolase(NSE),cytokeratin 19(CYFRA21-1)and squamous cell carcinoma antigen(SCCA)in the diagnosis of lung cancer(LC).MethodsPatients who were diagnosed as LC were divided into squamous cell carcinoma(LAC)group,adenocarcinoma (LSC)group and small cell carcinoma (SCLC)group.The concentrations of HSP90α,NSE,CEA,CYFRA21-1 and SCCA in blood were analyzed and compared among the 3 groups.ResultsThe levels of HSP90α,CEA,NSE and CYFRA21-1 in the SCLC group were significantly higher than those in the control group (P＜0.05).The HSP90α level in the SCLC group was higher than that in the LAC and LSC groups(P＜0.05).The levels of HSP90α,NSE,CYFRA21-1 and SCCA in the LAC group were significantly higher than those in the control group (P＜0.05).The SCCA level of the LAC group was significantly higher than that of the SCLC and LSC groups(P＜0.05).The levels of HSP90α and CEA in the LSC group were significantly higher than that in the control group(P＜0.05).The AUC of HSP90α was the highest.The combined detection of HSP90α,NSE and CYFRA21-1 could significantly improve the specificity(SPE),positive predictive value(PV+),positive likelihood ratio(LR+)and correct classification rate(CCR)in the diagnosis of SCLC.The combined detection of HSP90α,NSE,CYFRA21-1 and SCCA could significantly improve the SPE,PV+and CCR of LAC,while the combined detection of HSP90α and CEA could significantly improve the SPE,PV+,LR+and CCR of LSC.ConclusionsHSP90 is an ideal index for diagnosis of LC.Combined detectionof HSP90α,CEA,NSE,CYFRA21-1 and SCCA contribute to the stratification of lung cancer.

heat shock protein 90α;carcinoembryonic antigen;neuron-specific enolase;cytokeratin-19-fragment;squamous cell carcinoma antigen;lung cancer

R446.112

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.12.012

1005-8982（2017）12-0060-05

2016-11-21