牛世莉　丁宣瑋　徐方旭　王升厚

摘要：研究了不同激發(fā)子菌株對蛹蟲草子實(shí)體中蟲草素和腺苷含量的影響。結(jié)果表明：就蟲草素而言，JF4對蟲草素積累的誘導(dǎo)作用在發(fā)酵培養(yǎng)40d時(shí)達(dá)到最大，為162.22mg/L，與對照組相比增加了3.85倍，并且JF4對蟲草素的誘導(dǎo)作用是4種激發(fā)子中作用最強(qiáng)的；就腺苷而言，JF2對腺苷積累的誘導(dǎo)作用在發(fā)酵培養(yǎng)40d時(shí)達(dá)到最大，為29.16mg/L，與對照組相比增加了4.13倍。由此可見，激發(fā)子對蛹蟲草子實(shí)體中蟲草素和腺苷的積累因激發(fā)子種類及添加后培養(yǎng)時(shí)間的不同而產(chǎn)生不同的影響。

關(guān)鍵詞：蛹蟲草；激發(fā)子；蟲草素；腺苷

蛹蟲草[Cordyeeps militaris（L.）Link.J，隸屬于高等真菌的子囊菌亞門麥角菌科蟲草屬?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，蛹蟲草中的有效藥物成分包括蟲草素、蟲草酸、核苷類、蟲草多糖、麥角甾醇、環(huán)肽類、多球殼菌素、有機(jī)硒、SOD酶和微量元素。激發(fā)子可以誘導(dǎo)植物細(xì)胞產(chǎn)生和積累植保素，能快速、專一和選擇性地誘導(dǎo)植物多種特定基因的表達(dá)，尤其是活化特定的次生代謝途徑，積累次生代謝產(chǎn)物。本研究以蛹蟲草菌株FB-0為試材，探討了不同激發(fā)菌對蛹蟲草液體菌種中蟲草素及腺苷含量的影響，旨在為生產(chǎn)中篩選合適的激發(fā)菌及培養(yǎng)時(shí)間提供一定的理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

蛹蟲草菌株FB-0，由沈陽師范大學(xué)特種菌業(yè)研究所菌種資源庫提供；激發(fā)子菌株JF₁、JF₂、JF₃和JF₄均由污染的蛹蟲草液體菌種培養(yǎng)液中分離獲得；液體培養(yǎng)基：葡萄糖20g，蛋白胨5g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、水1000mL。

1.2方法

吸取等量的JF1-JF4液體菌種分別加入裝有液體培養(yǎng)基中進(jìn)行液體培養(yǎng)，各接種3瓶；培養(yǎng)7d后，將JF₁～JF₄及其混合菌液分別接入蛹蟲草液體發(fā)酵液中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；在發(fā)酵培養(yǎng)第10、20、30、40、50d后分別取出，采用高效液相色譜法對其發(fā)酵產(chǎn)物中的蟲草素和腺苷含量進(jìn)行測定。色譜條件為：色譜柱：AgilentZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150mm，5um）；流動(dòng)相：甲醇（25%）-水（75%）；分析時(shí)長：10min；柱溫25℃；流速：1.0mL/min；紫外檢測波長260nm；進(jìn)樣量20ul。

1.3儀器與設(shè)備

LX-B75L型立式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器（合肥華泰醫(yī)療設(shè)備有限公司）、UV-5100型紫外可見分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）、ESJ182-4電子天平（沈陽龍騰電子有限公司）、Agilent 1100高效液相色譜儀、GKC數(shù)顯智能型恒溫水浴鍋、5404高速冷凍離心機(jī)（德國EppendoffAG公司）。

2結(jié)果與分析

2.1蟲草素及腺苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

從圖1和圖2可以看出，蟲草素和腺苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程分別為v=56292x+53.609和y=45671x+16.476，相關(guān)系數(shù)分別為R2=0.9988和R。=0.9917，線性關(guān)系良好，可以進(jìn)行蟲草素和腺苷樣品的定量計(jì)算。

2.2不同激發(fā)菌對蟲草素和腺苷含量的影響

圖3和圖4表明，發(fā)酵前加入激發(fā)菌能有效改變蛹蟲草發(fā)酵液中蟲草素和腺苷的含量。與對照組相比，發(fā)酵培養(yǎng)40d后，JF₁、JF₂和JF₄均能不同程度地提高蟲草素的含量，且差異達(dá)到顯著水平（p2