林永勝，張玉燦，張武君，周先治，陳 陽，黃曉蕓

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源研究所，福建 福州 350003）

苦瓜（Momordica Charantia L. ）在我國南方地區(qū)栽培歷史悠久，在全國各地均有種植，是我國夏秋季的主要蔬菜種類之一。由于大面積連年種植，種植品種較為單一，導(dǎo)致苦瓜枯萎病大面積發(fā)生?？喙峡菸∈怯杉怄哏牭毒‵usarium oxysporum f. sp. Momodicae）引起的一種土傳病害，該病原菌除苦瓜外不侵染其他作物[1-3]。田間苦瓜發(fā)病率一般為10%～25%，嚴(yán)重的田塊達(dá)到60%以上，嚴(yán)重影響苦瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)[3-4]。生產(chǎn)實(shí)踐證明，選育和種植抗病品種是控制苦瓜枯萎病的有效措施之一?？喙腺Y源材料作為育種的基礎(chǔ)，其抗病性在很大程度上影響育成品種的抗病水平。所以開展苦瓜資源材料的抗枯萎病的評(píng)價(jià)，篩選抗枯萎病資源，并進(jìn)行有針對(duì)性的抗病育種，可以縮短抗病育種歷程。因此，項(xiàng)目課題組開展了對(duì)61個(gè)苦瓜資源材料的抗枯萎病評(píng)價(jià)，有望為苦瓜抗病育種提供抗病親本。

1 材料和方法

1.1 苦瓜品種資源的收集

課題組自1994年起，從日本、泰國、馬來西亞及國內(nèi)福建、臺(tái)灣、湖南、四川，海南、廣西等地收集引進(jìn)苦瓜品種資源，多數(shù)為雜交1代種子，經(jīng)過20年的試種、觀察、自交、純化和定向選擇，篩選出61個(gè)各具特色的穩(wěn)定自交系（表1）。

1.2 苦瓜接菌試驗(yàn)使用的苦瓜?；怄哏牭毒膩碓?/h3>

病原菌由福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源研究所微生物中心提供，菌種名稱為FJAT-3015，具有強(qiáng)致病性，是從福建省福州市閩侯縣鴻尾鄉(xiāng)的苦瓜枯萎病發(fā)病植株上分離出來的。

表1 61份苦瓜自交系材料

1.3 苦瓜枯萎病鑒定用菌液的制備

先將枯萎病病菌接種于PDA培養(yǎng)基上，在25～28 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，再將活化后的枯萎病菌接菌到PDA液體培養(yǎng)基中，在25～28 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，之后培養(yǎng)液用雙層紗布過濾去菌絲，用無菌水洗出沉淀的孢子，制成母液，經(jīng)血球計(jì)數(shù)器將母液用無菌水調(diào)至1×106個(gè)/mL的孢子濃度，供接種試驗(yàn)時(shí)用。

1.4 鑒定方法

采用苗期傷根與灌根相結(jié)合的接菌法。鑒定是在人工氣候室中進(jìn)行，待瓜苗長到3～4片真葉時(shí)，挑選苗齡一致的瓜苗用剪刀剪掉部分須根后定植于塑料花盆里，之后每個(gè)花盆澆灌先前稀釋好的菌液300 mL，之后將花盆放置在人工氣候室的鐵架上，溫度設(shè)置為28～32 ℃，光照時(shí)間為7：00—19：00。

1.5 栽培方式

苦瓜于2月底3月初播種，采用50（5×10）穴育苗盤育苗，每個(gè)品種育苗50株；定植時(shí)，各個(gè)品種隨機(jī)排列，每個(gè)重復(fù)每個(gè)品種10株，定植30株，設(shè)3次重復(fù)。

1.6 調(diào)查方法

于接種28 d按照表2標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查61個(gè)苦瓜品種資源的發(fā)病情況，并按照公式計(jì)算病情指數(shù)。

式中DI：病情指數(shù)；Si：發(fā)病級(jí)別；ni：相對(duì)病級(jí)級(jí)別的株數(shù)；i：病情分級(jí)各個(gè)級(jí)；N：調(diào)查總株數(shù)。

根據(jù)計(jì)算結(jié)果，按照表3分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)確定抗性等級(jí)[5]。種質(zhì)群體對(duì)枯萎病的抗性依苗期病情指數(shù)分6 級(jí)（表2）。

表2 苦瓜枯萎病病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果與分析

接菌28 d后對(duì)61個(gè)苦瓜自交穩(wěn)定系進(jìn)行病情指數(shù)調(diào)查（表4），結(jié)果表明61個(gè)材料中有高抗2個(gè)：0818-F5-⊕12♂和2012-5♂- op5-⊕15-14秋-⊕15，占3.3%；抗級(jí)2個(gè)：10A-1.2、213-4，占3.3%；中抗11個(gè)，占18.0%；感病11個(gè)，占18.0%；高感35個(gè)，占57.4%。其中，中抗水平以上15個(gè)，占總數(shù)的24.6%，感病和高感共46個(gè)，占總數(shù)的75.4%。可見，苦瓜品種資源中感病和高感占絕大多數(shù)，中抗以上占的比例較小，每個(gè)抗級(jí)具體所占百分比見圖1。

3 結(jié)論與討論

利用傷根與灌根相結(jié)合的接菌法來鑒定評(píng)價(jià)苦瓜種質(zhì)資源的抗病性，明確了部分國內(nèi)外苦瓜資源對(duì)枯萎病具有較高的抗性水平，中抗水平以上占總數(shù)的24.6%，而高抗僅占總數(shù)的3.3%，所以抗病材料的收集和抗性鑒定工作還要繼續(xù)進(jìn)行。

苦瓜枯萎病病原菌能以孢子形式在土壤和病株殘?bào)w上長時(shí)間存活，化學(xué)防治效果普遍不佳，化學(xué)殺菌劑的大量使用易導(dǎo)致環(huán)境污染和農(nóng)藥殘留等一系列問題；輪作可減輕枯萎病危害，特別是與禾本科和豆科類作物輪作效果更好[6]。但福建省耕地面積有限，且禾本科和豆科非福建省主栽作物品種，田間實(shí)施可操作性不大；土壤改良、高溫消毒和無土栽培等措施可有效減輕苦瓜枯萎病危害[7-9]，但這些防治措施成本較高，其田間實(shí)際應(yīng)用情況較少；砧木嫁接是生產(chǎn)中常用的防治苦瓜枯萎病危害的一項(xiàng)措施[10-11]，目前為止，嫁接砧木主要是同科的絲瓜砧木，連續(xù)使用后，砧木本身也會(huì)受到枯萎病危害；生物防治是一種環(huán)境友好型的苦瓜枯萎病防治措施[6,12-13]，生物防治室內(nèi)防效尚可，但大田應(yīng)用效果普遍不佳。

表3 枯萎病抗性的分級(jí)

表4 61份苦瓜自交系材料的果實(shí)性狀和抗病性表現(xiàn)

續(xù)表4

許多研究表明選育和種植抗病品種是最經(jīng)濟(jì)有效的防治苦瓜枯萎病的措施之一，目前各地篩選的苦瓜抗病品種中達(dá)到中抗水平居多，尚無達(dá)到高抗水平的材料[4,14-15]，這與本研究結(jié)論不符，估計(jì)與接菌試驗(yàn)中使用的菌株致病力、接菌量和接菌后發(fā)病時(shí)間有關(guān)，有待進(jìn)一步研究論證。由于苦瓜尖孢鐮刀菌?；筒煌谖鞴虾吞鸸蠈；停洳淮嬖诙鄠€(gè)生理小種，且苦瓜枯萎病抗性受單一顯性基因控制[16]，這為苦瓜枯萎病抗病育種奠定了良好基礎(chǔ)。

圖1 61個(gè)苦瓜品種資源對(duì)枯萎病抗性等級(jí)占百分比

苦瓜具有悠久的種植栽培歷史，品種資源材料比較豐富，因此，廣泛收集種質(zhì)資源，加強(qiáng)地方種質(zhì)資源材料的抗枯萎病鑒定及抗病材料的篩選，可以為苦瓜抗病育種提供優(yōu)良親本材料。

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