鄭亮，劉爽，亓倩，周玉法

(萊蕪市人民醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，山東 萊蕪 271100)

·論 著·

鄭亮，劉爽，亓倩，周玉法

(萊蕪市人民醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，山東 萊蕪 271100)

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

7900HT實(shí)時(shí)定量PCR儀購(gòu)自Applied Biosystems公司，PVDF膜購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，ECL化學(xué)發(fā)光底物購(gòu)自上海偉進(jìn)生物科技有限公司，凝膠成像分析儀購(gòu)自美國(guó)UVP公司，Transwell細(xì)胞培養(yǎng)小室購(gòu)自美國(guó)康寧公司。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) A549、H1650細(xì)胞株在含有10%胎牛血清、100 IU·ml-1青霉素、100 μg·ml-1鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中在37 ℃、5%CO2條件下培養(yǎng)，每隔2 d更換1次培養(yǎng)液，0.25%胰蛋白酶進(jìn)行傳代。

1.3.4 細(xì)胞侵襲能力檢測(cè) 選擇24孔Transwell小室，在上室中均勻鋪滿20 μl Matrigel。將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞用不含血清的培養(yǎng)基重懸，調(diào)整密度為5×106個(gè)·ml-1。上室加入100 μl細(xì)胞懸液，下室加入500 μl含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基，于37 ℃、5%CO2條件下孵育24 h；將上室內(nèi)培養(yǎng)基完全吸凈，PBS沖洗3次，再用醫(yī)用棉簽將表面的細(xì)胞輕輕擦去。4%多聚甲醛固定20 min，蘇木素復(fù)染，室溫下干燥過(guò)夜，再將微孔膜置于載玻片上，鏡下觀察。隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，取平均值，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

表1 基因引物序列

基因引物序列(5′～3′)Mig?6上游：TAGGAAGAGGAGTGGCGTGAA下游：TGCTTCTAAACACAACATTTAAGEGFR上游：AATTCAGGGTGACGAAGTGGT下游：GGAAGAGCAGAGCCAGAATTGERK上游：TGTGGGTCATCCTTTACTCTCCT下游：GAATGAATTGGAAATGGAAAAGGTAKT上游：GTGGGTGTCTGCCTACCTGAT下游：CTCCCAAACCTTCCACTGAGAβ?肌動(dòng)蛋白上游：TGAGTGCCTAGCAGCAGTGAC下游：TGCATGGTGTCACAAAATTCAT

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.2 細(xì)胞增殖能力檢測(cè)結(jié)果

圖2 siRNA干擾后A549、H1650細(xì)胞增殖情況

2.3 細(xì)胞侵襲能力檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

圖3 siRNA干擾后A549、H1650細(xì)胞增殖情況

(RespiratoryDepartment,LaiwuCityPeople’sHospital，Laiwu271100，China)

R734.2； Q786

A