郝國(guó)榮 白鳳樓 胡佩

·論著·

PTEN和P63在絕經(jīng)前后子宮內(nèi)膜息肉中的表達(dá)及意義

郝國(guó)榮 白鳳樓 胡佩

目的 研究PTEN和P63在絕經(jīng)前后子宮內(nèi)膜息肉(EP)組織中的表達(dá)水平，探討其與EP發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。方法 選取存檔石蠟標(biāo)本180 例，其中絕經(jīng)前EP 54例，絕經(jīng)后EP 40例，絕經(jīng)前正常增生期子宮內(nèi)膜46例，絕經(jīng)后正常萎縮型子宮內(nèi)膜40例。應(yīng)用免疫組化SP法測(cè)定PTEN和P63在94例EP組織及86例正常子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞胞漿中的表達(dá)水平。結(jié)果 絕經(jīng)前、后EP組織中PTEN表達(dá)率均低于正常EP組織(P<0.05)；絕經(jīng)后EP組織中PTEN表達(dá)水平低于絕經(jīng)前EP(P<0.05)；絕經(jīng)前、后EP組織中P63表達(dá)率均高于正常EP組織(P<0.05)；絕經(jīng)前、后EP組織中P63表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 PTEN表達(dá)缺失或降低及P63高表達(dá)可能是EP發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制之一,PTEN可能與絕經(jīng)后EP惡變率增高有一定關(guān)系。

PTEN；P63；子宮內(nèi)膜息肉

子宮內(nèi)膜息肉(endometrial polyps,EP)是子宮內(nèi)膜的一種常見(jiàn)的局灶性良性病變，主要表現(xiàn)為突向?qū)m腔的結(jié)節(jié)，呈單發(fā)或多發(fā)。雖然EP是良性病變，但其所引起的不孕、經(jīng)期延長(zhǎng)及異常子宮出血等癥狀嚴(yán)重影響女性的生活質(zhì)量。而且有文獻(xiàn)報(bào)道EP存在一定的惡變潛能，其發(fā)展為惡性腫瘤的幾率為1%～3%，絕經(jīng)后其惡變的幾率更高[1,2]。本研究通過(guò)探討PTEN基因和P63基因在絕經(jīng)前、后EP組織中的表達(dá)水平，研究其與EP的發(fā)生、發(fā)展的關(guān)聯(lián)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2008年1月至2015年5月在我院婦科進(jìn)行手術(shù)治療的EP的漢族北方女性(絕經(jīng)前54例，絕經(jīng)后40例)為病例組。所有患者均為初治，術(shù)后均有病理證實(shí)為EP。有腫瘤家族史、慢性疾病(心腦血管疾病、糖尿病、腎病等)、曾接受過(guò)激素治療的均排除。選取同期因子宮肌瘤于我院接受子宮全切或次全切除患者為對(duì)照組。對(duì)照組所有標(biāo)本術(shù)后均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為無(wú)器質(zhì)性病變的正常子宮內(nèi)膜組織86例(絕經(jīng)前正常的子宮內(nèi)膜組織46例，絕經(jīng)后萎縮正常子宮內(nèi)膜40例)。2組初潮年齡、體重指數(shù)、年齡以及孕、產(chǎn)次等因素差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法 選取符合該試驗(yàn)研究標(biāo)準(zhǔn)的EP，將其進(jìn)行固定、制備石蠟包塊，并切成4 μm厚的石蠟切片。用SP免疫組化方法檢測(cè)病例組和對(duì)照組子宮內(nèi)膜組織中PTEN及P63在細(xì)胞胞漿中的表達(dá)水平，每次染色過(guò)程均同步設(shè)置陰性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。采用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)對(duì)各組結(jié)果進(jìn)行定量分析。

1.3 試劑 SP免疫組化試劑盒及鼠抗人P63單克隆抗體均由福州邁新生物技術(shù)公司提供。免疫人PTEN多克隆抗體由北京中杉生物技術(shù)有限公司提供。

1.4 結(jié)果判斷 (1)參照Constantine等標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)合高倍鏡(×400)下將陽(yáng)性細(xì)胞所占比例和染色強(qiáng)度兩者結(jié)合進(jìn)行半定量計(jì)算。規(guī)定：陽(yáng)性細(xì)胞所占比例的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：<10%為0分，10%～40%為1分，41%～70%為2分，>70%為3分。(2)細(xì)胞染色強(qiáng)度的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：不著色者計(jì)0分，黃色者計(jì)1分，棕黃色者計(jì)2分，黃褐色者計(jì)3分。兩種評(píng)分結(jié)果相加，0～1分者為陰性(-)，2分者為弱陽(yáng)性 (+)，3～4 分者為陽(yáng)性 (++)，5～6分者為強(qiáng)陽(yáng)性。(+++)。本研究規(guī)定≥2分者為陽(yáng)性，除此之外均為陰性。(圖1～4為PTEN在絕經(jīng)前后EP組織及絕經(jīng)前后正常子宮內(nèi)膜組織免疫組化；圖5～8為P63在絕經(jīng)前后EP組織及絕經(jīng)前后正常子宮內(nèi)膜組織免疫組化)

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTEN在絕經(jīng)前、后EP組織及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) 絕經(jīng)前、后EP組織中PTEN蛋白的表達(dá)呈低表達(dá)或表達(dá)缺失(圖3和圖4中PTEN的表達(dá)水平明顯高于圖1和圖2)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1、2。

表1 PTEN與在絕經(jīng)前EP組織及絕經(jīng)前正常內(nèi)膜組織中的表達(dá) 例(%)

表2 PTEN在絕經(jīng)后EP組織及正常萎縮內(nèi)膜組織中的表達(dá) n=40,例(%)

圖1 PTEN在絕經(jīng)前EP中的表達(dá)(SP×400)圖2 PTEN在絕經(jīng)后EP中的表達(dá)(SP×400)

圖3 PTEN在絕經(jīng)前正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(SP×400)圖4 PTEN在絕經(jīng)后正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(SP×400)

2.2 PTEN在絕經(jīng)前、后EP患者中的表達(dá) 與絕經(jīng)前EP組織比較，絕經(jīng)后EP組織中其PTEN呈表達(dá)缺失或低表達(dá)水平(圖1中PTEN的表達(dá)水平明顯高于圖2)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 PTEN在絕經(jīng)前、后EP組織中的表達(dá) 例(%)

2.3 P63蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織及絕經(jīng)前、后EP組織中的表達(dá) 絕經(jīng)前、后EP組織中P63蛋白陽(yáng)性率高于正常內(nèi)膜組織(圖5和圖6中P63的表達(dá)水平明顯高于圖7和圖8)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4、5。

表4 P63在絕經(jīng)前EP及絕經(jīng)前正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) 例(%)

表5 P63在絕經(jīng)后EP及正常萎縮內(nèi)膜組織中的表達(dá) n=40,例(%)

圖5 P63在絕經(jīng)前EP中的表達(dá)(SP×400)圖6 P63在絕經(jīng)后EP中的表達(dá)(SP×400)

圖7 P63在絕經(jīng)前正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(SP×400)圖8 P63在絕經(jīng)后正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(SP×400)

2.4 P63在絕經(jīng)前、后EP中的表達(dá) P63在絕經(jīng)前、后EP組織中表達(dá)水平(圖5與圖6中P63的表達(dá)水平相近)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表6。

表6 P63在絕經(jīng)前、后EP中的表達(dá) 例(%)

3 討論

EP為可發(fā)生于任何年齡段女性的子宮內(nèi)膜組織的一種良性病變，并且具有一定的惡變潛能。據(jù)資料統(tǒng)計(jì)EP惡變的概率為0.8%～4.8%，而且隨著年齡的增加，其惡變的風(fēng)險(xiǎn)也隨之增加，絕經(jīng)后EP的惡變率為10%[3,4]。Gregoriou等[5]報(bào)道指出絕經(jīng)前EP患者發(fā)生癌變的風(fēng)險(xiǎn)要明顯低于絕經(jīng)后EP患者。因此對(duì)EP發(fā)生、發(fā)展機(jī)制的研究也成為目前研究的焦點(diǎn)。有研究顯示炎性刺激、藥物刺激或激素水平均與EP的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，尤其是子宮內(nèi)膜局部雌激素水平、孕激素水平與EP的緊密相關(guān)[6]；近來(lái)隨著分子生物學(xué)這一學(xué)科的發(fā)展，多種細(xì)胞因子、凋亡相關(guān)基因的異常表達(dá)所導(dǎo)致的子宮內(nèi)膜細(xì)胞的增殖-凋亡機(jī)制失衡這一機(jī)制在EP的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。

PTEN是具有雙重磷酸酶活性的抑癌基因，其不僅可以通過(guò)多種細(xì)胞因子信號(hào)途徑：FAK、PIP3和MAPK等來(lái)抑制細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，而且還能抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移等。已有研究顯示PTEN表達(dá)缺失或下降與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7,8]。Chu等[9,10]研究指出PTEN基因正常表達(dá)的小鼠的子宮內(nèi)膜發(fā)生復(fù)雜性增生、不典型增生甚至癌變的風(fēng)險(xiǎn)均明顯低于PTEN缺失或低表達(dá)的小鼠，該研究表明PTEN基因?qū)φ{(diào)控細(xì)胞的周期、維持子宮內(nèi)膜的正常的生長(zhǎng)平衡起著至關(guān)重要的作用。本研究顯示無(wú)論絕經(jīng)前EP還是絕經(jīng)后EP組織其PTEN與正常子宮內(nèi)膜組織相比均呈現(xiàn)低表達(dá)狀態(tài)；絕經(jīng)后EP組織中PTEN蛋白的表達(dá)水平明顯低于絕經(jīng)前EP組織。雖然EP為良性疾病，但具有惡變潛能，且隨著年齡增加惡變風(fēng)險(xiǎn)也隨之增加。絕經(jīng)期EP的發(fā)生多與細(xì)胞的增殖-凋亡這一機(jī)制失衡相關(guān)，而且隨著年齡的增長(zhǎng)，自身的免疫機(jī)制下調(diào)、基因突變概率也明顯升高，可能會(huì)導(dǎo)致增殖-凋亡機(jī)制失衡的更加明顯，因此導(dǎo)致絕經(jīng)期惡變率的升高。結(jié)合本研究結(jié)論，我們推測(cè)PTEN表達(dá)缺失或低表達(dá)可能與絕經(jīng)后EP惡變相關(guān)。PTEN可能是EP預(yù)后的指標(biāo)之一。

P63是抑癌基因P53的同源基因，其以全長(zhǎng)型P63異構(gòu)體(TAP63)及短截型p63異構(gòu)體(△Np63)兩種形式存在。TAP63可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，△Np63通過(guò)抑制p53基因或TAP63活性而抑制細(xì)胞凋亡，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。由于△Np63結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，所以p63基因主要以此種形態(tài)存在，發(fā)揮癌基因的作用。Nogueira等[11]報(bào)道絕經(jīng)后EP組織中p63表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于EP周?chē)５淖訉m內(nèi)膜組織，因此，Nogueira等[11]認(rèn)為P63尤其是△Np63通過(guò)調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化從而影響絕經(jīng)后EP息肉的形成。我們的研究顯示P63在Ep組織中表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于正常內(nèi)膜組織；但絕經(jīng)前、后Ep組織中P63的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。P63是否可做為EP預(yù)后的指標(biāo)還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)P63蛋白的高表達(dá)、PTEN蛋白的低表達(dá)或表達(dá)缺失，均可通過(guò)調(diào)控子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞的異常增殖或抑制細(xì)胞凋亡，影響EP的發(fā)生及發(fā)展。PTEN可能與EP預(yù)后有一定關(guān)系。隨著醫(yī)療科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，從分子水平研究發(fā)病機(jī)制并為預(yù)防EP的復(fù)發(fā)、惡變理論依據(jù)，并進(jìn)一步指導(dǎo)臨床。

1 Lieng M,Istre O,Sandvik L,et al.Prevalence,1-year regression rate,and clinical significant of asymptomatic endometrial polyps:cross-sectional study.J M Invasive Gynecol,2009,16:465-471.

2 Choll J,Lee ES,Lee JY,et al.Investigations for postmenopausal uterine bleeding:special consideration for endometrial volume.Aych Iran Med,2013,16:665-670.

3 Baiocchi G,Manci N,Pazzaglia M,et al.Malignancy in Endometrial Polyps:A12-Year Expression.Obstetrical and Gynecological Survey,2010,65:96-97.

4 Bakour SH,Khan KS,Gupta JK.The risk of premalignant and malignant pathology in endometrial polyps.Acta OBSTET Gynecol Scand，2000,79:317-320.

5 Gregoriou O，Konidaris S，Vrachnis N，et al．Clinical parameters linked with malignancy in ndometrial polyps．Climacteric，2009，12:454-458．

6 Cohen I.Endometrial pathologies associated with postmenopausal tamoxifen treatment.Gynecol Oncol,2004,9492：256-266.

7 周忠笑,姚建茹.抑癌基因PTEN對(duì)結(jié)直腸癌25例預(yù)后的影響.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2011,40:1130-1133.

8 褚艷、岳天孚.卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌中PTEN、survivin和MMP-2的表達(dá)及臨床意義.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2009,25:535-537.

9 Chu EC,Tarnawski AS.PTEN regulatory function in tumor suppression and cell biology.Med Sci Monit,2004,10:RA235-241.

10 Podsypanina K,Ellenson LH,Nemes A,et al.Mutation of Pten/Mmacl in mice causes neoplasia in multiple organ systems.Proc Natl Acad Sci USA,1999,96:1563-1568.

11 Nogueira AA,de Almeida EC S,Poli NOB,et al.Immunohistochemical expression of p63 in endometrial polyps:evidence that a basal cell immunophenotype is maintained.Menopause,2006,13:826-830.

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