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        糖皮質(zhì)激素受體基因多態(tài)性與支氣管哮喘疾病的關(guān)系研究

        2017-07-07 15:17:42劉蓓蕾張少勇陳玉華
        中國現(xiàn)代藥物應用 2017年6期
        關(guān)鍵詞:皮質(zhì)醇抵抗皮質(zhì)激素

        劉蓓蕾 張少勇 陳玉華

        糖皮質(zhì)激素受體基因多態(tài)性與支氣管哮喘疾病的關(guān)系研究

        劉蓓蕾 張少勇 陳玉華

        目的 探析糖皮質(zhì)激素(GC)受體(GR)基因多態(tài)性與支氣管哮喘疾病的關(guān)系。方法 選擇30例哮喘患者作為觀察組,另選30例門診體檢的健康人士作為對照組,均進行糖皮質(zhì)激素受體基因bcl-I單核苷酸多態(tài)性檢測,測定兩組研究對象的血漿皮質(zhì)醇(Cor)濃度。結(jié)果 哮喘患者bcl-I基因共有CC純合、CG雜合與GG純合3種基因型,觀察組GG基因型頻率為20.0%,明顯高于對照組的3.3%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);觀察組G等位基因頻率為36.7%,明顯高于對照組的16.7%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),提示G等位基因與哮喘發(fā)生存在相關(guān)性。兩組不同基因血漿皮質(zhì)醇濃度比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);30例哮喘患者中,21例患者進行了激素抵抗測試,共有11例存在激素抵抗(不敏感組),不敏感組患者平均皮質(zhì)醇濃度與敏感組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結(jié)論 激素抵抗與血漿皮質(zhì)醇濃度不存在相關(guān)性,GR基因bcl-I單核苷酸多態(tài)性為造成患者激素抵抗的重要因素,等位基因G可能為哮喘患者激素抵抗的易感基因。

        糖皮質(zhì)激素受體基因多態(tài)性;支氣管哮喘疾?。魂P(guān)系

        支氣管哮喘是人在兒童時期很容易誘發(fā)的一種疾病,該病主要由肥大細胞、中性粒細胞及T細胞等多種細胞、細胞組參與,屬于氣道慢性炎癥性疾病之一,糖皮質(zhì)激素是目前臨床上治療該病的一種主要藥物,應用該藥治療支氣管哮喘疾病,有助于改善患者咳嗽、喘息及咳痰等一系列癥狀,進而提高患者的生活質(zhì)量。但是相關(guān)報道稱[1],一些患者長期使用激素其效果并不理想,這些患者被稱之為激素抵抗型哮喘,糖皮質(zhì)激素發(fā)揮效應需要受體進行介導,本次研究著重探析糖皮質(zhì)激素受體基因多態(tài)性與支氣管哮喘的關(guān)系,現(xiàn)在進行如下分析。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選擇本院2016年1月~2017年1月收治的30例哮喘患者作為觀察組,患者均經(jīng)中華醫(yī)學會1997年哮喘防治指南標準診斷,其中男18例、女12例,年齡6~54歲,平均年齡(29.4±11.5)歲。另選30例門診體檢的健康人士作為對照組,對照組研究對象外周血標本采自無哮喘、過敏性疾病,其中男17例、女13例,年齡6~55歲,平均年齡(28.5±12.7)歲。兩組研究對象性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

        1.2 方法 經(jīng)患者及家屬同意口服強的松1 mg/kg,連續(xù)服用7 d,治療前后進行肺功能檢測,第一秒用力呼氣容積(FEV1)改善未達到15%為激素抵抗哮喘患者。參照《分子克隆實驗指南》方法與步驟進行全血基因組DNA提取。擴增條件:在0.5 ml滅菌離心管中混合各成分(緩沖液、聚合酶及基因組DNA等)混合后離心15 s,加入液體石蠟油覆蓋。擴增過程:在聚合酶鏈鎖反應(PCR)擴增儀中盛裝反應液,按照相應條件進行擴增(預變性94℃5 min,變形94℃1 min,退火58℃1.5 min,延伸72℃1.5 min,一直到循環(huán)35個、75℃延伸10 min之后完成)。取所有PCR擴增產(chǎn)物與上樣緩沖液混合均勻,加入1%瓊脂糖凝膠,300 nm紫外燈下切下目的片段,并裝入潔凈1.5 ml離心管中稱重,按照試劑盒說明進行回收目的片段純化。利用放射免疫法進行血漿皮質(zhì)醇濃度測定,分離之后按照人血漿皮質(zhì)醇濃度試劑盒要求測定血漿的皮質(zhì)醇濃度。

        1.3 觀察指標 觀察比較兩組的基因型頻率與等位基因頻率、多態(tài)性分布與血漿皮質(zhì)醇濃度,并分析激素敏感型與皮質(zhì)醇濃度的關(guān)系。

        1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,采用t檢驗;計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

        2 結(jié)果

        PCR擴增分析證實,哮喘患者bcl-I基因共有3種基因型,分別為CC純合型、CG雜合型與GG純合型。觀察組GG基因型頻率為20.0%,明顯高于對照組的3.3%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);觀察組G等位基因頻率為36.7%,明顯高于對照組的16.7%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),提示G等位基因與哮喘發(fā)生存在相關(guān)性。兩組不同基因血漿皮質(zhì)醇濃度比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);30例哮喘患者中,21例患者進行了激素抵抗測試,共有11例存在激素抵抗(不敏感組),不敏感組患者平均皮質(zhì)醇濃度與敏感組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1,表2,表3。

        表1 兩組基因型頻率與等位基因頻率比較[n(%)]

        表2 兩組多態(tài)性分布與血漿皮質(zhì)醇濃度比較(±s,ng/ml)

        表2 兩組多態(tài)性分布與血漿皮質(zhì)醇濃度比較(±s,ng/ml)

        注:與對照組比較,aP>0.05

        基因分型 組別 例數(shù) 皮質(zhì)醇濃度CC 觀察組 14 119.59±44.7a對照組 21 103.38±47.2 GG 觀察組 6 130.98±26.40a對照組 1 150.26±32.98 CG 觀察組 10 124.77±42.58a對照組 8 123.90±38.20平均值 觀察組 30 123.73±40.39a對照組 30 109.34±46.18

        表3 激素敏感型與皮質(zhì)醇濃度的關(guān)系

        3 討論

        遺傳、環(huán)境等因子都影響著哮喘的發(fā)生、發(fā)展,支氣管哮喘的本質(zhì)是一種呼吸道炎癥性疾病,目前糖皮質(zhì)激素是治療該病最為有效的藥物之一,這種藥物通過與受體的結(jié)合達到抑制多種炎性細胞、因子活化作用,從而減少血管滲透性,使呼吸道高反應性得到降低[2-4]。近年來臨床上發(fā)現(xiàn)部分患者對激素治療的敏感型比較低,這部分患者被稱之為激素抵抗型哮喘,激素抵抗是一個非常復雜的問題,其發(fā)病機制目前尚未明確,可能與遺傳、患者體內(nèi)炎癥狀態(tài)、GR親和力異常等因素相關(guān)[5-7]。

        Bcl-I位于GR基因內(nèi)含子2下游,等位基因C的突變頻率較高,相關(guān)研究報道GR基因內(nèi)含子中存在限制性片段長度多態(tài)性,共由一個4.5 kb大片段與2.3 kb小片段組成,后來一些有關(guān)該變異在肥胖癥中的應用陸續(xù)出現(xiàn)[3,8-10],其單核苷酸多態(tài)性為CG突變,在外顯子2下游646核苷酸的位置,形成了3.9 kb余2.2 kb的片段,C堿基出現(xiàn)的頻率最高,被認為野生堿基[4,11-13]。本次研究的30例哮喘患者中,21例患者進行了激素抵抗測試,共有11例存在激素抵抗,通過GR基因bcl-I單核苷酸多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn),這些患者中共有2例為CC型,其余患者均為含G等位基因的GG基因型、CG基因型,激素抵抗患者平均皮質(zhì)醇濃度增高不顯著,可見G為等位基因C突變,隨之GR結(jié)構(gòu)與功能出現(xiàn)改變,糖皮質(zhì)激素與其結(jié)合的藥理作用降低,進而出現(xiàn)了激素抵抗現(xiàn)象。

        本次研究共測定了30例哮喘患者與30例健康人士的血漿皮質(zhì)醇濃度,通過對比實驗發(fā)現(xiàn),組間不同基因血漿皮質(zhì)醇濃度比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),可見患者內(nèi)源性皮質(zhì)激素分泌與各項代謝功能均正常,并且未出現(xiàn)皮質(zhì)激素吸收障礙、清除加快及代謝加速等表現(xiàn),表明哮喘激素抵抗和血漿皮質(zhì)醇不存在相關(guān)性,初步認定GR基因bcl-I單核苷酸多態(tài)性為造成患者激素抵抗的重要因素,同時等位基因G可能為哮喘患者激素抵抗的易感基因。

        參考文獻

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        [13]趙峰,蔡累,遆新宇,等.糖皮質(zhì)激素受體基因R477H多態(tài)性與激素抵抗型哮喘的相關(guān)性// 全國中西醫(yī)結(jié)合變態(tài)反應學術(shù)會議.2011:597-599.

        10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.06.033

        2017-02-16]

        518000 深圳市坪山新區(qū)人民醫(yī)院

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