劉蓓蕾 張少勇 陳玉華

糖皮質(zhì)激素受體基因多態(tài)性與支氣管哮喘疾病的關(guān)系研究

劉蓓蕾 張少勇 陳玉華

目的 探析糖皮質(zhì)激素(GC)受體(GR)基因多態(tài)性與支氣管哮喘疾病的關(guān)系。方法 選擇30例哮喘患者作為觀察組,另選30例門診體檢的健康人士作為對(duì)照組,均進(jìn)行糖皮質(zhì)激素受體基因bcl-I單核苷酸多態(tài)性檢測(cè),測(cè)定兩組研究對(duì)象的血漿皮質(zhì)醇(Cor)濃度。結(jié)果 哮喘患者bcl-I基因共有CC純合、CG雜合與GG純合3種基因型,觀察組GG基因型頻率為20.0%,明顯高于對(duì)照組的3.3%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；觀察組G等位基因頻率為36.7%,明顯高于對(duì)照組的16.7%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示G等位基因與哮喘發(fā)生存在相關(guān)性。兩組不同基因血漿皮質(zhì)醇濃度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；30例哮喘患者中,21例患者進(jìn)行了激素抵抗測(cè)試,共有11例存在激素抵抗(不敏感組),不敏感組患者平均皮質(zhì)醇濃度與敏感組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 激素抵抗與血漿皮質(zhì)醇濃度不存在相關(guān)性,GR基因bcl-I單核苷酸多態(tài)性為造成患者激素抵抗的重要因素,等位基因G可能為哮喘患者激素抵抗的易感基因。

糖皮質(zhì)激素受體基因多態(tài)性；支氣管哮喘疾?。魂P(guān)系

支氣管哮喘是人在兒童時(shí)期很容易誘發(fā)的一種疾病,該病主要由肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及T細(xì)胞等多種細(xì)胞、細(xì)胞組參與,屬于氣道慢性炎癥性疾病之一,糖皮質(zhì)激素是目前臨床上治療該病的一種主要藥物,應(yīng)用該藥治療支氣管哮喘疾病,有助于改善患者咳嗽、喘息及咳痰等一系列癥狀,進(jìn)而提高患者的生活質(zhì)量。但是相關(guān)報(bào)道稱［1］,一些患者長(zhǎng)期使用激素其效果并不理想,這些患者被稱之為激素抵抗型哮喘,糖皮質(zhì)激素發(fā)揮效應(yīng)需要受體進(jìn)行介導(dǎo),本次研究著重探析糖皮質(zhì)激素受體基因多態(tài)性與支氣管哮喘的關(guān)系,現(xiàn)在進(jìn)行如下分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2016年1月～2017年1月收治的30例哮喘患者作為觀察組,患者均經(jīng)中華醫(yī)學(xué)會(huì)1997年哮喘防治指南標(biāo)準(zhǔn)診斷,其中男18例、女12例,年齡6～54歲,平均年齡(29.4±11.5)歲。另選30例門診體檢的健康人士作為對(duì)照組,對(duì)照組研究對(duì)象外周血標(biāo)本采自無(wú)哮喘、過(guò)敏性疾病,其中男17例、女13例,年齡6～55歲,平均年齡(28.5±12.7)歲。兩組研究對(duì)象性別、年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法 經(jīng)患者及家屬同意口服強(qiáng)的松1 mg/kg,連續(xù)服用7 d,治療前后進(jìn)行肺功能檢測(cè),第一秒用力呼氣容積(FEV1)改善未達(dá)到15%為激素抵抗哮喘患者。參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》方法與步驟進(jìn)行全血基因組DNA提取。擴(kuò)增條件：在0.5 ml滅菌離心管中混合各成分(緩沖液、聚合酶及基因組DNA等)混合后離心15 s,加入液體石蠟油覆蓋。擴(kuò)增過(guò)程：在聚合酶鏈鎖反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增儀中盛裝反應(yīng)液,按照相應(yīng)條件進(jìn)行擴(kuò)增(預(yù)變性94℃5 min,變形94℃1 min,退火58℃1.5 min,延伸72℃1.5 min,一直到循環(huán)35個(gè)、75℃延伸10 min之后完成)。取所有PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與上樣緩沖液混合均勻,加入1%瓊脂糖凝膠,300 nm紫外燈下切下目的片段,并裝入潔凈1.5 ml離心管中稱重,按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行回收目的片段純化。利用放射免疫法進(jìn)行血漿皮質(zhì)醇濃度測(cè)定,分離之后按照人血漿皮質(zhì)醇濃度試劑盒要求測(cè)定血漿的皮質(zhì)醇濃度。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察比較兩組的基因型頻率與等位基因頻率、多態(tài)性分布與血漿皮質(zhì)醇濃度,并分析激素敏感型與皮質(zhì)醇濃度的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

PCR擴(kuò)增分析證實(shí),哮喘患者bcl-I基因共有3種基因型,分別為CC純合型、CG雜合型與GG純合型。觀察組GG基因型頻率為20.0%,明顯高于對(duì)照組的3.3%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；觀察組G等位基因頻率為36.7%,明顯高于對(duì)照組的16.7%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示G等位基因與哮喘發(fā)生存在相關(guān)性。兩組不同基因血漿皮質(zhì)醇濃度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；30例哮喘患者中,21例患者進(jìn)行了激素抵抗測(cè)試,共有11例存在激素抵抗(不敏感組),不敏感組患者平均皮質(zhì)醇濃度與敏感組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1,表2,表3。

表1 兩組基因型頻率與等位基因頻率比較［n(%)］

表2 兩組多態(tài)性分布與血漿皮質(zhì)醇濃度比較(±s,ng/ml)

表2 兩組多態(tài)性分布與血漿皮質(zhì)醇濃度比較(±s,ng/ml)

注：與對(duì)照組比較,aP>0.05

基因分型 組別 例數(shù) 皮質(zhì)醇濃度CC 觀察組 14 119.59±44.7a對(duì)照組 21 103.38±47.2 GG 觀察組 6 130.98±26.40a對(duì)照組 1 150.26±32.98 CG 觀察組 10 124.77±42.58a對(duì)照組 8 123.90±38.20平均值 觀察組 30 123.73±40.39a對(duì)照組 30 109.34±46.18

表3 激素敏感型與皮質(zhì)醇濃度的關(guān)系

3 討論

遺傳、環(huán)境等因子都影響著哮喘的發(fā)生、發(fā)展,支氣管哮喘的本質(zhì)是一種呼吸道炎癥性疾病,目前糖皮質(zhì)激素是治療該病最為有效的藥物之一,這種藥物通過(guò)與受體的結(jié)合達(dá)到抑制多種炎性細(xì)胞、因子活化作用,從而減少血管滲透性,使呼吸道高反應(yīng)性得到降低［2-4］。近年來(lái)臨床上發(fā)現(xiàn)部分患者對(duì)激素治療的敏感型比較低,這部分患者被稱之為激素抵抗型哮喘,激素抵抗是一個(gè)非常復(fù)雜的問(wèn)題,其發(fā)病機(jī)制目前尚未明確,可能與遺傳、患者體內(nèi)炎癥狀態(tài)、GR親和力異常等因素相關(guān)［5-7］。

Bcl-I位于GR基因內(nèi)含子2下游,等位基因C的突變頻率較高,相關(guān)研究報(bào)道GR基因內(nèi)含子中存在限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性,共由一個(gè)4.5 kb大片段與2.3 kb小片段組成,后來(lái)一些有關(guān)該變異在肥胖癥中的應(yīng)用陸續(xù)出現(xiàn)［3,8-10］,其單核苷酸多態(tài)性為CG突變,在外顯子2下游646核苷酸的位置,形成了3.9 kb余2.2 kb的片段,C堿基出現(xiàn)的頻率最高,被認(rèn)為野生堿基［4,11-13］。本次研究的30例哮喘患者中,21例患者進(jìn)行了激素抵抗測(cè)試,共有11例存在激素抵抗,通過(guò)GR基因bcl-I單核苷酸多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn),這些患者中共有2例為CC型,其余患者均為含G等位基因的GG基因型、CG基因型,激素抵抗患者平均皮質(zhì)醇濃度增高不顯著,可見G為等位基因C突變,隨之GR結(jié)構(gòu)與功能出現(xiàn)改變,糖皮質(zhì)激素與其結(jié)合的藥理作用降低,進(jìn)而出現(xiàn)了激素抵抗現(xiàn)象。

本次研究共測(cè)定了30例哮喘患者與30例健康人士的血漿皮質(zhì)醇濃度,通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),組間不同基因血漿皮質(zhì)醇濃度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),可見患者內(nèi)源性皮質(zhì)激素分泌與各項(xiàng)代謝功能均正常,并且未出現(xiàn)皮質(zhì)激素吸收障礙、清除加快及代謝加速等表現(xiàn),表明哮喘激素抵抗和血漿皮質(zhì)醇不存在相關(guān)性,初步認(rèn)定GR基因bcl-I單核苷酸多態(tài)性為造成患者激素抵抗的重要因素,同時(shí)等位基因G可能為哮喘患者激素抵抗的易感基因。

參考文獻(xiàn)

［1］李浩,王永慶,孟玲,等.抗哮喘藥物β2腎上腺素受體激動(dòng)劑的藥物基因組學(xué)研究進(jìn)展.藥學(xué)與臨床研究,2013,21(1):62-67.

［2］張雪,潘家華.細(xì)胞間黏附分子-1基因多態(tài)性與小兒哮喘的研究進(jìn)展.安徽醫(yī)學(xué),2013,34(7):1041-1043.

［3］陳慧芬,張德平,邱玉英.β2腎上腺素能受體基因多態(tài)性和支氣管哮喘關(guān)系的最新研究進(jìn)展.國(guó)際呼吸雜志,2013,33(19): 40-44.

［4］周俊雄,尹佳,崔樂(lè),等.中國(guó)變態(tài)反應(yīng)學(xué)2012年度科技發(fā)展薈萃報(bào)告.中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志,2013,7(3):287-300.

［5］金紀(jì)偉,姜玉新,劉文艷,等.IL-4R、IL-13、ADAM33基因多態(tài)性與中國(guó)皖南地區(qū)漢族人群支氣管哮喘的相關(guān)性研究.中國(guó)免疫學(xué)雜志,2011,27(2):135-139.

［6］云哲琳,王冬梅,曲艷杰.支氣管哮喘與糖皮質(zhì)激素受體基因bcl-I單核苷酸多態(tài)性的關(guān)系.實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志,2016,20(11):21-24.

［7］范飛,鮑一笑,劉全華,等.糖皮質(zhì)激素受體基因多態(tài)性與漢族兒童哮喘關(guān)系研究.中國(guó)實(shí)用兒科雜志,2013(2):114-117.

［8］劉震天,周世良,張梅.糖皮質(zhì)激素受體基因外顯子2/1密碼子23多態(tài)性與支氣管哮喘的相關(guān)性研究.南昌大學(xué)學(xué)報(bào)醫(yī)學(xué)版,2006,46(6):66-69.

［9］王德全,王玉國(guó),劉保國(guó),等.糖皮質(zhì)激素受體基因多態(tài)性與自身免疫性疾病相關(guān)性研究進(jìn)展.河北醫(yī)藥,2015,37(12): 1866-1868.

［10］王洪娜.糖皮質(zhì)激素反應(yīng)性與其受體基因多態(tài)性關(guān)系的研究現(xiàn)狀.國(guó)際泌尿系統(tǒng)雜志,2012,32(3):377-381.

［11］胡靜.糖皮質(zhì)激素受體基因Bc/I多態(tài)性在MDD漢族人群的相關(guān)性研究.昆明醫(yī)學(xué)院,2011.

［12］趙峰,遆新宇,蔡累,等.糖皮質(zhì)激素受體基因G679S多態(tài)性與激素抵抗型哮喘的相關(guān)性.醫(yī)學(xué)爭(zhēng)鳴,2009,14(6):541-544.

［13］趙峰,蔡累,遆新宇,等.糖皮質(zhì)激素受體基因R477H多態(tài)性與激素抵抗型哮喘的相關(guān)性// 全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議.2011:597-599.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.06.033

2017-02-16］

518000 深圳市坪山新區(qū)人民醫(yī)院