趙璐，鄒鵬，方振偉，姜川，李丹妮*

（1.沈陽醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院生物化學教研室，遼寧沈陽110034；2.遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科）

秘制燒傷膏對大鼠淺Ⅱ度燒燙傷的保護作用及機制研究

趙璐1，鄒鵬1，方振偉2，姜川1，李丹妮1*

（1.沈陽醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院生物化學教研室，遼寧沈陽110034；2.遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科）

目的：觀察秘制燒傷膏對大鼠淺Ⅱ度燒燙傷的療效并探討其作用機制。方法：建立經(jīng)典大鼠淺Ⅱ度燒燙傷模型，將72只大鼠隨機分成秘制燒傷膏組、京萬紅組和空白對照組，并分別于燒燙傷后1、2、3、7、14、21 d 6個時間點做描記稱重法，以燒燙傷后2 d的創(chuàng)面面積作為燙傷面積計算各時間點創(chuàng)面愈合率；取燒燙傷后3 d大鼠背部創(chuàng)面全層皮膚，采用Western blot法測定白介素6（IL-6）、核因子κB（NF-κB）和Caspase-3的蛋白表達水平。結(jié)果：燒燙傷后3 d開始，秘制燒傷膏組、京萬紅組與空白對照組創(chuàng)面愈合率差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01或0.05），秘制燒傷膏組創(chuàng)面愈合率與京萬紅組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與京萬紅組、空白對照組比較，秘制燒傷膏組在燒燙傷后3 d時IL-6、NF-κB和Caspase-3蛋白表達水平均有較明顯的降低（P＜0.05）。結(jié)論：大鼠淺Ⅱ度燒燙傷后，秘制燒傷膏通過抑制炎癥與凋亡水平來保護創(chuàng)面，促進創(chuàng)面愈合，且治療效果優(yōu)于京萬紅。

Ⅱ度燒燙傷；秘制燒傷膏；炎癥因子；凋亡

燒燙傷是日常生活中比較常見的一種皮膚意外損傷。本研究以SD大鼠背部皮膚淺Ⅱ度燒燙傷為模型，與傳統(tǒng)治療藥京萬紅比較，觀察秘制燒傷膏在皮膚淺Ⅱ度燒燙傷中愈合效果，擬揭示秘制燒傷膏抑制炎癥反應和細胞凋亡的具體機制。

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑秘制燒傷膏由遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院藥劑室提供，京萬紅軟膏（天津達仁堂京萬紅藥業(yè)有限公司，批號Z12020440）；核因子κB（NF-κB）抗體（1163）、白介素6（IL-6）抗體（9324）；Caspase-3抗體（9662S）（英國Abcam公司）。

1.2 儀器倒置顯微鏡XSZ-DZ（重慶光學儀器廠）；電熱恒溫水箱（中國恒科公司）；超凈工作臺（北京半導體設(shè)備廠）；Western blot及轉(zhuǎn)膜設(shè)備（美國BioRad公司）；顯影劑（日本柯達公司）。

1.3 實驗動物及分組健康成年SD大鼠72只，體重200～240 g，雌雄各半，由沈陽醫(yī)學院動物實驗中心提供（許可證號：SCXK（遼）2015-0001）。按照隨機數(shù)字表法分為秘制燒傷膏組、京萬紅組、空白對照組，每組24只。

1.4 動物模型制備將大鼠適應性飼養(yǎng)7 d。腹腔注射10%水合氯醛（350mg/kg）進行麻醉，然后于大鼠背部用10%硫化鋇脫毛處理，將直徑4 cm鐵棒于90℃熱水中靜置15min，取出后用無菌濾紙迅速吸干表面殘留水分，一端緊貼在大鼠背部處理過的皮膚上10 s，建立淺Ⅱ度燒燙傷模型［1］。1.5給藥方法空白對照組不給藥，京萬紅組和秘制燒傷膏組分別涂有相同面積的秘制燒傷膏和京萬紅軟膏2 g，每天消毒后換藥1次，連續(xù)給藥21 d，每組置于室溫下分開飼養(yǎng)，自由飲食、飲水、排便。造模完成后為了防止休克的產(chǎn)生，立即對大鼠腹腔注射乳酸林格氏液5m l。

1.6 觀察指標分別在燒燙傷后1、2、3、7、14、21 d 6個時間點，每組隨機抽取燒3只大鼠，采用描記稱重法測定［2］，即以燒燙傷后2 d的創(chuàng)面面積作為燙傷面積，用透明的方格紙鋪在燙傷處，描出對應時間的創(chuàng)面面積，按描下的筆跡剪下后稱重，以質(zhì)量代替面積，因而創(chuàng)面愈合率（%）=（燙傷面積-各時相點面積）/燙傷面積×100%。

1.7 Western blot法檢測IL-6、NF-κB和Caspase-3的表達水平在燒燙傷后3 d，隨機挑選每組1只大鼠，在10%水合氯醛（350mg/kg）腹腔注射麻醉后，去除表面痂皮，取創(chuàng)面全層皮膚組織150mg左右，用RIPA裂解液處理，提取蛋白，使用酶標儀測定濃度，然后制成相應的蛋白樣品（全程冰浴）。以上方式重復3次，采用Western blot法檢測IL-6、NF-κB、Caspase-3蛋白的表達水平。

1.8 統(tǒng)計學方法采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料采用均數(shù)±標準差表示，采用單因素方差分析（One-Way ANOVA）進行統(tǒng)計學分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 創(chuàng)面愈合率比較燒燙傷后1 d，3組創(chuàng)面愈合率差異無統(tǒng)計學意義。燒燙傷后3、7、14、21 d時間點，秘制燒傷膏組、京萬紅組與空白對照組創(chuàng)面愈合率比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01或＜0.05）；秘制燒傷膏組創(chuàng)面愈合率與京萬紅組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 各組大鼠不同時間點創(chuàng)面愈合率比較（x±s）

2.2 IL-6、NF-κB、Caspase-3表達水平比較秘制燒傷膏組大鼠IL-6、NF-κB和Caspase-3表達水平與京萬紅組、空白對照組比較均明顯下降（P＜0.05），見圖1。

圖1 Westernblot法檢測NF-κB、IL-6和Caspase-3的表達水平

3 討論

在日常生活中，淺Ⅱ度燒燙傷是比較常見的，此種創(chuàng)傷是一種真皮損傷，創(chuàng)面局部紅腫明顯，伴有大小不一的水皰形成，水皰破裂后，創(chuàng)面潮紅，創(chuàng)面溫度較高，且疼痛劇烈，易并發(fā)感染。不同的創(chuàng)面，其處理方式也不同，但目的均是為了減少炎癥和預防感染，降低對創(chuàng)面的負面影響，促進創(chuàng)面早日愈合。秘制燒傷膏在保護和修復創(chuàng)面方面可能存在以下機制：覆蓋創(chuàng)面，形成保護膜，保持創(chuàng)面濕潤，同時防止感染；秘制燒傷膏在分子層面可抗炎、促凋亡，在一定程度上可以減輕炎癥，促進創(chuàng)面愈合［3］。本研究結(jié)果表明在大鼠燒燙傷后分別使用秘制燒傷膏、京萬紅，3、7、14、21 d后與京萬紅組比較，秘制燒傷膏組創(chuàng)面愈合率更好。

研究表明，燒燙傷后炎癥介質(zhì)，如IL-6體液濃度在1～3 d內(nèi)達到或接近高峰［4］。創(chuàng)面處大量的炎癥因子會增加局部血管的通透性，進而加重局部水腫，會延緩創(chuàng)面的愈合；此外大量滲出的體液會產(chǎn)生休克，因而減少炎癥因子的濃度能減輕癥狀，促進創(chuàng)面愈合。同時研究表明，創(chuàng)傷后炎癥反應一般與細胞凋亡同步改變，減輕炎癥反應可以有效降低細胞凋亡水平［5］。NF-κB是核轉(zhuǎn)錄因子的一種，最常見于P50/P65組成的二聚體［6］，在機體中常處于靜止狀態(tài)，當機體組織受損導致細胞損傷時，NF-κB激活并轉(zhuǎn)移到細胞核，參與并調(diào)控白介素等炎癥因子的表達水平［7-8］。NF-κB的異?；罨梢源龠M炎癥因子等相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，而炎癥因子作為一種外部刺激信號又可以激活NF-κB的表達，從而放大炎癥反應。部分炎癥因子可以作為一種外源性因素誘導凋亡的產(chǎn)生［9］，而組織細胞大量凋亡后，會延長創(chuàng)面愈合的時間，降低愈合率，增加創(chuàng)面感染的機會。Caspase家族的重要作用是介導細胞凋亡，其中Caspase-3是細胞凋亡的執(zhí)行者，可直接導致細胞凋亡［10］。本研究采用Western blot法檢測燒燙傷后3 d大鼠創(chuàng)面處皮膚的IL-6、NF-κB和Caspase-3表達水平，可以發(fā)現(xiàn)秘制燒傷膏明顯降低了IL-6與Caspase-3的表達水平，同時NF-κB蛋白表達水平也被明顯抑制，提示秘制燒傷膏可能通過NF-κB信號通路調(diào)控創(chuàng)面炎癥因子表達水平，降低凋亡所導致的殘余細胞的死亡，促進創(chuàng)面早期愈合，且治療效果優(yōu)于京萬紅。

本研究僅從炎癥和凋亡角度探討了秘制燒傷膏治療燒燙傷的可能機制，但是卻未更深一步的進行論證；同時表皮生長因子作為燒燙傷后創(chuàng)面愈合的另一個指標，有待進一步研究。

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Protective Effectof Burn OintmentonⅡ-degree Shallow Burn in Ratsand ItsM echanisms

ZHAO Lu1，ZOUPeng1，F(xiàn)ANGZhenwei2，JIANGChuan1，LIDanni1*
（1.Department of Biochemistry and Molecular Biology，Shenyang Medical College，Shenyang 110034，China；2.Internal Medicine of Traditional ChineseMedicine，The Affiliated Hospitalof Liaoning University of TCM）

Objective：To observe the effectof burn ointmentonⅡ-degree shallow burn in rats and itsmechanisms.Methods：ThemodelofⅡ-degree shallow burn in ratswasestablished.The ratswere divided into burn ointmentgroup，Jingwanhong group and the control group，20 rats in each group.At 1，2，3，7，14，21 d after burn，the back whole skin from the wound of ratswere weighed，and the burn area at2 d after burn was used to calculate thewound healins rate atdifferent time points.The full-thickness skin wound at3 d afterburn were taken.The protein levelof IL-6，NF-κB and Caspase-3 weremeasured byWestern blot.Results：Compared with the controlgroup，thewound healing rate significantly increased in burn ointmentgroup and Jingwanhong group（P＜0.01 or0.05）.Thewound healing rate in burn ointmentgroup was better than that in Jingwanhong group（P＜0.05）.Compared with Jingwanhong group and control group，the protein expression level of IL-6，NF-κB and Caspase-3 significantly decreased in burn ointmentgroup（P＜0.05）.Conclusions：The burn ointmentpromoteswound healing by inhibiting inflammation and apoptosis after burn.And theeffectofwound healingofburn ointmentisbetter than Jingwanhong.

Ⅱ-degree shallow burn；burn ointment；inflammatory factor；apoptosis

R285.5

A

1008-2344（2017）03-0232-03

10.16753/j.cnki.1008-2344.2017.03.015

2017-01-03

（文敏編輯）

沈陽醫(yī)學院科技基金項目（No.20132032）

趙璐（1989—），女（漢），實驗員，研究方向：干細胞治療.［通訊作者］李丹妮（1980—），女（漢），講師，研究方向：干細胞治療.E-mail：aqualdn@163.com